一种长效保存空肠弯曲菌群培养基及制备方法技术

一种长效保存空肠弯曲菌群培养基及其制备方法，其培养基由布氏肉汤、甘油、胰胨、硫酸亚铁、偏性硫酸亚铁、丙酮酸钠、卵黄生理盐水等组成，并按一定顺序先加热溶混，调整ｐＨ值至７. ５，再进行高温灭菌，分装后保存冰箱备用，也可脱水拱干，制成干粉包装后销售。使用本培养基保存空肠弯曲菌，于－５０℃低温下，保存７８个月（６年半）全部存活，不变异。本培养基配制容易，使用方便，保存期长。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属医学领域的菌种保藏，具体地说是一种长效保存肠弯曲菌群种株的培养基及其制备方法。空肠弯曲菌是一种能引起人体多种疾病的病菌，除能引起肠炎暴发处，还可引起食物中毒、关节炎、脑膜炎、胆囊炎、心内膜炎等疾病。但该菌生活较弱，在人工培养基内48-72小时后，通常蜕变为无生活力的球形状态，球变后往往失去生长能力而死亡，影响分离培养和阳性率，不利于临床上对病人诊治和流行病学调查。对此国外经济发达国家主要采用超低温(-70～80℃)冷冻干燥设备，如仲西寿男，(1981年)Mills等(1984年)采用冷冻干燥深低温(-70℃)或液氮保存，效果较好，存活率达92%，可保存12个月不失活，但随着时间延长存活率逐步降低。国内研究者多数使用卵黄(EM)为基础保存温度4～10℃或中温35℃、37℃或双相保存法，此灯卵黄、血清、血液均需严格无菌处理，卵黄基础80℃多次灭菌，制备复杂，污染率高，形态易变异，死亡率高，耗资大。林业杰等(1987年)研究的保护剂属甘油型，在-22～-28℃保存24个月存活率95%，尔后出现的FMRG保存培养基，在-50℃的低温下，保存期达14个月以上，制备简单，使用方便，效果尚属满意。本专利技术的目的在于提供一种能长效保存空肠弯曲菌群的培养基及其制备方法，该培养基所用材料易得，制备方法简便，并适用于目前国内县级以上医疗单位具备的-40℃冷藏设备，便于在国内推广使用。按本专利技术所提出的保存空肠弯曲菌群的培养基，其组分如下布氏肉汤 300ml甘油C·P 100～150ml胰胨(oxoid) 5～10g酵母浸膏BR 1.5～2.0g硫酸亚铁C·P 0.25g偏性硫酸亚铁C·P 0.25g丙酮酸钠C·P 0.25g磷酸氢二钾A·R 1.0g硫乙醇酸钠A·R 0.25g琼脂 1.5g二甲基亚砜 10mlL-半胱氨酸盐 0.2g无菌卵黄生理盐水 25g新鲜绵羊血 25ml本培养基配方的原理为布氏肉汤和胰胨作为基础，以供给氮和维生素作基质来源;硫乙醇酸钠降低氧压，形成微氧环境，硫酸亚铁作为还原剂降低氧化还原电势，并为菌细胞重要微量元素来源，供其代谢中需要;偏性亚硫酸钠和二甲基亚砜能够维持基质酸硷平衡，保持基质弱硷性;丙酮酸钠能抑制杂菌;甘油是一种对菌细胞膜亲水性强的胶水物质，能降低基质表面张力，从而维持着菌细胞内外渗透压的平衡状态，起保护膜作用。按本专利技术所提出的保存空肠弯曲菌群的培养基的制备方法为将上述组分中除二甲基亚砜、卵黄生理盐水和羊血外的其余成份混合，加热溶解呈液状，调整PH值至7.5，再进行121℃15分钟灭菌，在无菌情况下加入二甲基亚砜、卵黄生理盐水和羊血，混匀后分装试管，每管0.5毫升，用无菌胶塞紧塞，保存冰箱备用。本培养基亦可经脱水烘干，制成干粉，用瓶包装后对外销售，使用时按比例加水调配即成培养基原液。实施例将空肠弯曲菌株接种于上述保存基内，置-50℃低温下保藏，保存10株至78个月(6年半)全部存活，存活率100%;于66个月时任取其中7株，活菌计数1.0×102～8.0×104(CFU/ml)，平均每年死亡数≤1log指数;形态以弧形、海鸥形为主，球形体少;保存期内经130次反复冻融仍不影响存活率，无污染。其技术指标如下色泽桔红色容量0.5ml保存温度-50℃保存期6.5年存活率100%PH 7.4～7.5活菌死亡数≤1 log(年)耐冻融性强污染率(%) 0形态不变异本专利技术主要解决对空肠弯曲菌群引起的各种疾病防治中病原体的长效保存问题，以提高阳性率和疾病诊断率，从而提高治疗率。本培养基配制方便，配制后在冰箱存放(4～8℃)数年不变质。使用本专利技术的培养基来保存菌群方法简便，保期长，大量节约了原有保存方法的繁琐环节，节省了人力物力。鉴于国内县级以上医疗单位均有-40℃冷藏设备，为推广使用本专利技术提供了有利条件。此外，本专利技术对经济不发达国家和地区也有一定的推广意义。权利要求1.一种医学领域菌种保藏用的长效保存空肠弯曲菌群的培养基，其特征在于组分为布氏肉汤300ml，甘油(C·P)100～150ml，胰胨(oxoid)5～10g，醇母浸膏(BR)1.5～2.0g，硫酸亚铁(C·P)0.25g，偏性硫酸亚铁(C·P)0.25g，丙酮酸钠(C·P)0.25g，磷酸氢二钾(A·R)1.0g，硫乙醇酸钠(A·R)0.25g，琼脂1.5g，二甲基亚砜10ml，L-半胱氨酸盐0.2g，无菌卵黄生理盐水25ml，新鲜绵羊血25ml。2.一种医学领域菌种保藏用的长效保存空肠弯曲菌群的培养基的制备方法，其特征为将上述培养基组分中二甲基亚砜、卵黄生理盐水和羊血外的其他成份混合，加强溶解呈液状，调整PH值至7.5，再进行121℃15分钟灭菌，在无菌情况下加入二甲基亚砜、卵黄生理盐水和羊血，混匀后分装试管，用无菌胶塞紧塞，保存冰箱备用。全文摘要一种长效保存空肠弯曲菌群培养基及其制备方法，其培养基由布氏肉汤、甘油、胰胨、硫酸亚铁、偏性硫酸亚铁、丙酮酸钠、卵黄生理盐水等组成，并按一定顺序先加热溶混，调整pH值至7.5，再进行高温灭菌，分装后保存冰箱备用，也可脱水拱干，制成干粉包装后销售。使用本培养基保存空肠弯曲菌，于-50℃低温下，保存78个月(6年半)全部存活，不变异。本培养基配制容易，使用方便，保存期长。文档编号C12N1/20GK1096819SQ9310745公开日1994年12月28日 申请日期1993年6月23日 优先权日1993年6月23日专利技术者施培福 申请人:铜陵市卫生防疫站本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种医学领域菌种保藏用的长效保存空肠弯曲菌群的培养基，其特征在于组分为：布氏肉汤３００ｍｌ，甘油（Ｃ.Ｐ）１００～１５０ｍｌ，胰胨（ｏｘｏｉｄ）５～１０ｇ，醇母浸膏（ＢＲ）１. ５～２. ０ｇ，硫酸亚铁（Ｃ.Ｐ）０. ２５ｇ，偏性硫酸亚铁（Ｃ.Ｐ）０. ２５ｇ，丙酮酸钠（Ｃ.Ｐ）０. ２５ｇ，磷酸氢二钾（Ａ.Ｒ）１. ０ｇ，硫乙醇酸钠（Ａ.Ｒ）０. ２５ｇ，琼脂１. ５ｇ，二甲基亚砜１０ｍｌ，Ｌ－半胱氨酸盐０. ２ｇ，无菌卵黄生理盐水２５ｍｌ，新鲜绵羊血２５ｍｌ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：施培福，
申请(专利权)人：铜陵市卫生防疫站，
类型：发明
国别省市：34[中国|安徽]