体外细胞培养和移植试剂盒制造技术

公开了一种体外细胞培养和移植试剂盒，它含有：在从人体获得的细胞混合物中选择具有所需表现型的细胞的装置；从混合物分离选择的细胞的装置；孵育分离细胞的装置；含有有效量的细胞扩增因子的组合物，其中扩增因子选自：ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＴＰＯ、ＥＰＯ、ｆｌｔ３－配体、ＳＦ和ＧＭ－ＳＣＲ－ＩＬ－３融合蛋白；以及细胞生长培养基。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞选择和扩增技术，更具体地，涉及体外细胞培养和移植试剂盒。专利技术背景细胞减少疗法涉及采用电离辐射和化学毒素来杀死迅速分裂的细胞。由于对正常细胞的细胞毒性作用而带来的典型副作用限制了细胞减少疗法的应用。常见的副作用是骨髓抑制，或者损害产生红细胞、白细胞和血小板的骨髓细胞。而骨髓抑制的结果，将使病人得血细胞减少症，或血细胞缺乏，这些会增加感染和出血疾病的风险。血细胞减少症会增加发病率及死亡率，并导致在癌症治疗中的低剂量服药。另一方面，高剂量的化学疗法在治疗上是有益的，因为与标准剂量的疗法相比较，它可以提高患转移癌症尤其是乳腺癌病人的目标应答频率。它可使一些甚至预后不良病人长期无病缓解。然而，高剂量的化学疗法具有毒性，很多会导致与感染、出血疾病、及其它与长期骨髓再生障碍相关影响等有关的临床并发症。许多临床研究者已经设计了各种细胞减少疗法的剂量方案和计划来增加癌症治疗的服药量，同时又可以限制其对骨髓的损害。另一种方法是利用这样一个事实血细胞来自造血干细胞，而这些干细胞定向分化成不同的谱系，即红细胞系的、巨核细胞的、粒细胞的、单核细胞和淋巴细胞。因此，在用细胞减少疗法治疗癌症病人中，针对这些干细胞的细胞分离十分感兴趣。一种疗法涉及骨髓或外周血细胞移植，在该方法中，在细胞减少治疗之前，收集骨髓或循环系统中的造血祖细胞或干细胞并通过细胞培养而繁殖。接着在治疗后将扩增的细胞群再输入以恢复完整的造血功能。任选地，可以使用选择步骤以增加收集的外植体中造血祖细胞的相对数目。通过再输入分离的干细胞或祖细胞，可以大大减少将其他类型的细胞(包括恶性细胞)再输入的机会。此外，在同种异体移植过程中，通过仅选择干细胞或祖细胞可大大减少移植的T细胞的数目，从而降低引发病人患移植物抗宿主病(Graft-versus-Host Disease，GvHD)的可能性。已知有各种细胞选择技术可在一群细胞中鉴别和分离出造血干细胞或祖细胞。用于鉴别和选择这些细胞类型的方法和材料是已知的。例如，可用单克隆抗体与干细胞或祖细胞上发现的标记蛋白或表面抗原蛋白结合。造血干细胞的这类标记物或细胞表面抗原包括CD34，My-10和Thy-1。在一种方法中，将抗体固定于某一表面如玻璃珠表面，然后与可能含有干细胞的细胞混合物接触。这使抗体可结合并将干细胞固定于玻璃珠。或者，可将抗体和细胞混合物一起孵育，将形成的共混物与对抗体-细胞复合物具有亲和性的表面进行接触。将不需要的细胞和细胞物质去除，得到较纯的干细胞群。具有CD34标记物的干细胞占骨髓中单核细胞的约1-3％。CD34+干细胞在外周血中数量比在骨髓中低约10-100倍。因此，为了减少从骨髓或外周血中获得的所需干细胞的数目，需要具有增加或扩增分离的干细胞数目的方法，以便在高剂量的放射或化学治疗后使骨髓快速而完全地恢复。另一种细胞选择方法涉及用某种抗代谢物(antimetabolite)去除分裂细胞。通过将细胞因子刺激和抗代谢物处理两者结合起来，可在应答细胞中诱发细胞死亡。因此，抗细胞因子增殖效应的细胞被阳性选择出。参见Beradi等人，Sci-ence，267104(1995)。使用扩增的干细胞还允许在不能获得足量干细胞的情况下进行移植。一种被称为体外干细胞培养和移植(ESCCAT)的程序，也称为回体(ex vivo)扩增，通常涉及从外周血、骨髓或脐带血中获取自体或同种异体干细胞，分离出干细胞，然后体外扩增这些细胞。在扩增之后，将细胞输入病人。专利技术概述本专利技术涉及细胞选择和扩增技术，尤其是体外细胞培养和移植(ESCCAT)。更具体地，本专利技术涉及体外细胞培养和移植试剂盒，该试剂盒含有，但并不限于在从人体获得的细胞混合物中选择具有所需表现型的细胞的装置；从混合物分离选择的细胞的装置；孵育分离细胞的装置；含有有效量的细胞扩增因子的组合物，其中扩增因子选自GM-CSF、G-CSF、IL-1、IL-3、IL-6、TPO、EPO、flt3-配体、SF和GM-SCF/IL-3融合蛋白；以及细胞生长培养基。在试剂盒中，分离装置用于接受细胞混合物和选择装置，并用于从混合物中分离所需细胞。此外，孵育装置用于接受来自分离装置的分离细胞、细胞生长培养基和扩增因子组合物，并进一步用于使细胞扩增因子与分离细胞充分接触，从而发生细胞扩增。任选地，本专利技术的试剂盒可含有容器，以盛装从人体收集来的细胞混合物，其中该容器用于接受收集的细胞，有时还可接受选择装置。本专利技术的试剂盒提供了大量的细胞扩增因子，这些因子在ESCCAT中用于刺激能自我更新的干细胞增殖以及谱系定向(lineage-committed)的祖细胞的增殖和分化。这些细胞生长因子包括白细胞介素1和3(分别为IL-1和IL-3)、粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSFs)、GM-CSF和IL-3的分子融合蛋白(PIXY321)、flt3-配体和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。其他血细胞生长因子包括干细胞因子(SF)(也称为c-kit配体、肥大细胞生长因子和钢因子)、血小板生成素、红细胞生成素(EPO)和IL-6。这些因子可用于促进分离的干细胞和祖细胞的体外扩增。本专利技术的试剂盒可用于选择和扩增具有所需表现型的任何细胞群。例如，该试剂盒可用于造血干细胞和祖细胞的扩增和移植、T细胞或B细胞的扩增和移植，以及基因治疗。专利技术的详细描述本专利技术涉及细胞选择和扩增技术，尤其是体外细胞培养和移植。如此处所述，本专利技术包括一种ESCCAT试剂盒，它含有1)在细胞混合物中选择具有所需表现型的细胞的装置；2)从混合物中分离选择的细胞的装置；3)孵育分离细胞的装置；4)含有有效量的细胞扩增因子的组合物，其中扩增因子选自GM-CSF、G-CSF、，IL-1、IL-3、IL-6、TPO、EPO、flt3-配体、SF和GM-SCF/IL-3融合蛋白；以及5)细胞生长培养基。可设计任选的容器，以便最初接受收集的细胞，有时还可接受选择装置。分离装置用于接受直接来自病人或来自任选的容器的细胞混合物和选择装置。分离装置还用于从混合物中分离选择出的细胞。孵育装置用于接受来自分离装置的分离细胞、细胞生长培养基和扩增因子组合物，并进一步用于使细胞扩增因子与分离细胞充分接触以诱发分离细胞的扩增。可从各种来源收集细胞混合物。对于选择造血干细胞或祖细胞，一般是从包括骨髓、外周血或脐带血在内的来源收集细胞。定义术语“干细胞”和“祖细胞”指多潜能的早期谱系细胞。与本领域中一般习惯相同，在本文中这两个术语可互换使用。术语“干细胞或祖细胞”指或者干细胞、或祖细胞，或者干细胞和祖细胞的混合物。如本领域中通常使用的那样，干细胞和祖细胞一般可用下列细胞特征进行鉴别CD34+，CD33-，CD38-，Thy-1+和My-10+。此处所用的术语“flt3-L”是指在祖细胞和干细胞中所发现的能够与flt3受体独立结合或复合的一类多肽。术语“flt3-L”还包含EP-A 627 487中所述的蛋白质，该专利在此引用作为参考。术语“flt3-L”包含具有EP-A 627 487中氨基酸顺序SFQ ID NO6的1至235的蛋白质，以及与该蛋白质具有高度相似性或高度同一性的、具有生物活性并可结合flt3受体的蛋白质。并且，此术语指E本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外细胞培养和移植试剂盒，其特征在于，含有：１）在从人体获得的细胞混合物中选择具有所需表现型的细胞的装置；２）从混合物中分离选择的细胞的装置；３）孵育分离细胞的装置；４）含有有效量的细胞扩增因子的组合物，其中扩增因子选自：ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＴＰＯ、ＥＰＯ、ｆｌｔ３－配体、ＳＦ和ＧＭ－ＳＣＦ／ＩＬ－３融合蛋白；以及５）细胞生长培养基；其中，分离装置用于接受细胞混合物和选择装置，并用于从混合物中分离选择出的细胞；孵育装置用于接受来自分离装置的分离细胞、细胞生长培养基和扩增因子组合物，并进一步用于使细胞扩增因子与分离细胞充分接触以使分离细胞扩增。２．如权利要求１所述的试剂盒，其特征在于，分离的细胞是人造血干细胞或祖细胞。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：SD莱曼，
申请(专利权)人：依默耐克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]