血小板生长因子(TPO)及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种新的治疗血小板减少症的基因和基因工程生产的蛋白质药物，其ＣＤＮＡ全长１０６２ｂｐ，可表达出３５３个氨基酸的蛋白质。通过基因重组技术应用大肠杆菌、ＣＨＯ和昆虫细胞（ＳＦ９）表达，纯化获得高效ＴＰＯ和抗体，用于肌肉内直接注入ＴＰＯ基因，亦可达到同样治疗目的。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新的治疗人体疾病的DNA及蛋白质药品，它具有特异性促血小板生成能力。可用于治疗各种原因引起的血小板减少症和出血性疾病。TPO是1994年美国dc.sanvase最先分离出的基因，CDNA全长1062bp，可以表达出353个氨基酸的蛋白质，它具有特异性促血小板生成的能力。但迄今为止，尚无成熟产品问世，亦无系统的生产工艺。本专利技术的目的，在于开发出一种用于治疗血小板减少的新的基因药物和基因工程药物，并提供一种能高效表达出入TPO，并进行分离纯化的制备方法。本专利技术是通过以下方案实施的首先应用RT-PCR技术，克隆出含有信号肽的人全长TPO、CDNA。再将人TPO CDNA通过基因重组技术，克隆进真核表达载体(CHO和SF9昆虫细胞)及大肠杆菌中。应用细胞培养和细菌扩增技术，高效表达出人TPO(其氨基酸序列如附图)其得率可达15％。再应用超泸凝胶层析、亲和层析和高压液相方法，分离纯化出TPO，其纯度可达95％以上。本专利技术的用途有以下几个方面1、应用基因工程产品进行离体和整体实验，证明具有促进血小板生长的作用。2、还可以应用此产品制备单克隆和多克隆抗体，进行体内TPO水平的检测，用于出血性疾病的诊断和鉴别诊断。3、构建TPO真核表达载体，通过基因缝线导入再生的肌肉组织，可以在体内长期表达出TPO，并放入血，以提高体内TPO水平，起到升高血小板的作用。本专利技术的优点在于应用大肠杆菌的真核表达体系，可以高效大量生产TPO，有利于工业化生产。此种药物与以往的升血小板药物比较；疗效好，维持时间长，是一种长效升血小板药物并具有特异性促血小板生长作用。权利要求1.本专利技术涉及一种基因及基因工程药物。其特征在于是353个氨基酸蛋白质构成CDNA全长1062bp。2.根据权利要求1所述之基因及基因工程生产的蛋白质药物，其特征在于应用大肠杆菌。CHO和昆虫细胞(SF9)表达体系生产TPO。3.根据权利要求1、2所述之蛋白质药物，其特征在于可以应用于临床血液病的治疗。4.根据权利要求1、2所述之蛋白质药物，其特征在于可应用TPO单克隆和多克隆抗体生产检测药盆，用于临床血液病的诊断和鉴别诊断。5.根据权利要求1、2所述之基因药物，其特征在于可应用体内肌肉介导TPO基因转移技术，治疗血液病和出血性疾病。全文摘要本专利技术涉及一种新的治疗血小板减少症的基因和基因工程生产的蛋白质药物，其CDNA全长1062bp，可表达出353个氨基酸的蛋白质。通过基因重组技术应用大肠杆菌、CHO和昆虫细胞(SF9)表达，纯化获得高效TPO和抗体，用于肌肉内直接注入TPO基因，亦可达到同样治疗目的。文档编号C07K14/435GK1154971SQ9610032公开日1997年7月23日 申请日期1996年1月19日 优先权日1996年1月19日专利技术者侯伟敏 申请人:北京医科大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
本专利技术涉及一种基因及基因工程药物，其特征在于：是３５３个氨基酸蛋白质构成ＣＤＮＡ全长１０６２ｂｐ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：侯伟敏，
申请(专利权)人：北京医科大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]