一种孕酮检测试剂盒的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种孕酮检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)按试剂R1组分含量，将MOPSO溶于纯化水，调节pH，制成R1缓冲液；将NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG‑2000溶于R1缓冲液，得试剂R1；(2)按试剂R2组分含量，将MOPSO溶于纯化水，调节pH，制成R2缓冲液；将NaCl、NaN3、酪蛋白、甘油溶于R2缓冲液，得R2分散液；制备胶乳包被的孕酮多克隆抗体；用R2分散液来溶解得到的胶乳包被的孕酮多克隆抗体，超声分散，得试剂R2。本发明专利技术的优点在于：(1)制备的试剂盒灵敏度高，操作简单、快速；(2)制备的试剂盒稳定性佳，特异性强；(3)制备的试剂盒可用于全自动生化分析仪上。

【技术实现步骤摘要】
一种孕酮检测试剂盒的制备方法
本专利技术涉及医学检验
，尤其涉及一种孕酮检测试剂盒的制备方法。
技术介绍
孕酮，亦称为黄体酮、孕甾酮、黄体甾酮、黄体激素、助孕激素、助孕素或助孕酮，是卵巢分泌的具有生物活性的主要孕激素。在排卵前，每天产生的孕酮激素量为2-3mg，主要来自卵巢；排卵后，上升为每天20-30mg，绝大部分由卵巢内的黄体分泌。孕酮可以保护女性的子宫内膜，在女性怀孕期间，孕酮激素可以给胎儿的早期生长及发育提供支持和保障，而且能够对子宫起到一定的镇定作用。另外，孕酮激素和雌性激素的关系密不可分，两者都是相当重要的女性激素。雌性激素的作用主要是促使女性第二性征发育成熟，而孕酮激素则是在雌性激素作用的基础上，进一步促进第二性征的发育成熟，两者之间有协同作用。孕酮检查主要用于了解黄体的功能及卵巢有无排卵。目前，检测检测孕酮的方法主要还是放射免疫分析法，但众所周知，放射免疫分析法具有一定的放射性污染，且应用仪器比较昂贵。因此，目前急需一种无污染、操作成本低的孕酮检测试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种无污染、操作成本低的孕酮检测试剂盒的制备方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种孕酮检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R1的组分含量，将MOPSO溶于纯化水中，搅拌均匀，调节pH，配制成R1缓冲液；②按照上述试剂R1的组分含量，将NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG-2000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)按照下列组分含量配制试剂R2：试剂R2：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R2的组分含量，将MOPSO溶于纯化水中，搅拌均匀，调节pH，配制成R2缓冲液；②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN3、酪蛋白、甘油溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③制备胶乳包被的孕酮多克隆抗体：a.取粒径为80nm和120nm的胶乳微球于MES缓冲液中，加入EDAC溶液混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入NHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；b.在混合微球乳液中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚80nm和120nm粒径的胶乳；离心沉淀，将剩余物质分散于MES缓冲液中，反复2-4次，最后于MES缓冲液中恢复至原体积，再加入孕酮多克隆抗体，于37℃下反应3-4h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复2-4次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入BSA；c.2-8℃封存45-50h，得最终所需的胶乳包被的孕酮多克隆抗体；④用R2分散液来溶解得到的胶乳包被的孕酮多克隆抗体，超声分散，最终制得试剂R2；其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在试剂R2中的最终浓度为9％-11％。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)中，试剂R1的MOPSO缓冲液的pH为6.8。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(2)中，试剂R2的MOPSO缓冲液的pH为6.8。作为本专利技术的优选方式之一，所述制备胶乳包被的孕酮多克隆抗体的步骤a中，采用的MES缓冲液为100mMMES缓冲液。作为本专利技术的优选方式之一，所述制备胶乳包被的孕酮多克隆抗体的步骤a中，采用的EDAC溶液为50g/L的EDAC溶液。作为本专利技术的优选方式之一，所述制备胶乳包被的孕酮多克隆抗体的步骤a中，采用的NHS溶液为50g/L的NHS溶液。作为本专利技术的优选方式之一，所述制备胶乳包被的孕酮多克隆抗体的步骤b中，加入的BSA为30g/L的BSA。本专利技术相比现有技术的优点在于：(1)采用本方法制备的试剂盒具有较高的检测灵敏度，操作简单、快速，从检测到出结果只需10分钟；(2)本方法采取了不同粒径的胶乳微球混合使用，大大提高了试剂盒的灵敏度和线性范围；(3)采用本方法制备的试剂盒与样品所形成的抗原抗体复合物，稳定性佳，在特定波长下有一定的吸光度，特异性强；(4)采用本方法制备的试剂盒可用于全自动生化分析仪上，适合全自动测试，可大规模的开展和推广。具体实施方式下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1本实施例的一种孕酮检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R1的组分含量，将MOPSO溶于纯化水中，搅拌均匀，调节pH，配制成R1缓冲液；②按照上述试剂R1的组分含量，将NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG-2000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)按照下列组分含量配制试剂R2：试剂R2：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R2的组分含量，将MOPSO溶于纯化水中，搅拌均匀，调节pH，配制成R2缓冲液；②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN3、酪蛋白、甘油溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③制备胶乳包被的孕酮多克隆抗体：a.取粒径为80nm和120nm的胶乳微球于100mMMES缓冲液中，加入50g/L的EDAC溶液，混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入50g/L的NHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；b.在混合微球乳液中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，在一定条件下共聚80nm和120nm粒径的胶乳，离心沉淀，将剩余物质分散于MES缓冲液中，反复2次，最后于MES缓冲液中恢复至原体积，再加入孕酮多克隆抗体，于37℃下反应3h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复2次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入BSA30g/L；c.2℃封存45h，得最终所需的胶乳包被的孕酮多克隆抗体；④用R2分散液来溶解得到的胶乳包被的孕酮多克隆抗体，超声分散，最终制得试剂R2；其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在试剂R2中的最终浓度为9％。实施例2本实施例的一种孕酮检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R1的组分含量，将MOPSO溶于纯化水中，搅拌均匀，调节pH，配制成R1缓冲液；②按照上述试剂R1的组分含量，将NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG-2000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)按照下列组分含量配制试剂R2：试剂R2：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R2的组分含量，将MOPSO溶于纯化水中，搅拌均匀，调节pH，配制成R2缓冲液；②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN3、酪蛋白、甘油溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③制备胶乳包被的孕酮多克隆抗体：a.取粒径为80nm和120nm的胶乳微球于100mMMES缓冲液中，加入50g/L的EDAC溶液，混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入50g/L的NHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；b.在混合微球乳液中加入聚乙烯对氯甲基苯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种孕酮检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：

【技术特征摘要】
1.一种孕酮检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：①按照上述试剂R1的组分含量，将MOPSO溶于纯化水中，搅拌均匀，调节pH，配制成R1缓冲液；②按照上述试剂R1的组分含量，将NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG-2000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)按照下列组分含量配制试剂R2：试剂R2：①按照上述试剂R2的组分含量，将MOPSO溶于纯化水中，搅拌均匀，调节pH，配制成R2缓冲液；②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN3、酪蛋白、甘油溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③制备胶乳包被的孕酮多克隆抗体：a.取粒径为80nm和120nm的胶乳微球于MES缓冲液中，加入EDAC溶液混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入NHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；b.在混合微球乳液中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚80nm和120nm粒径的胶乳；离心沉淀，将剩余物质分散于MES缓冲液中，反复2-4次，最后于MES缓冲液中恢复至原体积，再加入孕酮多克隆抗体，于37℃下反应3-4h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复2-4...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴泽东，庄庆华，吴铮，丁先骏，朱雨，周珍珍，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34