突变的2,5二酮基-D-葡萄糖酸还原酶及其基因工程表达制造技术

本发明专利技术为一种生物合成２，５二酮基－Ｄ－葡萄糖酸（２，５ＤＫＧ）还原酶的技术，通过聚合酶链反应技术扩增，克隆到有突变的棒状杆菌２，５ＤＫＧ还原酶Ｉ基因，构建适当的表达载体在大肠杆菌和欧文氏菌高效表达来实现发明专利技术目的。由２，５ＤＫＧ还原酶Ｉ突变基因所表达的２，５ＤＫＧ还原酶具有很高的催化活性，适用于改进葡萄糖串联发酵产生维生素Ｃ前体２－酮基－Ｌ－古龙酸（２－ＫＬＧ）的工艺。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种突变的２，５－二酮基－Ｄ－葡萄糖酸还原酶（２，５ＤＫＧ还原酶Ⅰ）及其基因工程表达系统，其特征是：Ａ．在２，５ＤＫＧ还原酶Ⅰ基因编码区中，４３４位由Ａ突变为Ｇ，７３４位由Ｔ突变为Ｃ，从而使相应的２，５ＤＫＧ还原酶Ⅰ的１４５位由Ｈｉｓ突 变为Ａｒｇ，２４５位由Ｖａｌ突变为Ａｌａ。Ｂ．２，５ＤＫＧ还原酶Ⅰ基因是采用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）从棒状杆菌ＳＣＢ３０５８基因组扩增获得，进而构建重组表达载体转化宿主细胞，构建成基因工程表达系统。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：尹光琳，陈策实，
申请(专利权)人：中国科学院上海生物工程研究中心，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]