用于重组腺伴随病毒生产的全功能辅助病毒的产生及其用途制造技术

本发明专利技术包括了一种装载了２型腺伴随病毒（ＡＡＶ－２）ｒｅｐ－ｃａｐ基因的重组单纯疱疹病毒（ＨＳＶ１－ｒｃ）的产生方法及其在重组腺伴随病毒（ｒＡＡＶ）生产中的用途。这种重组单纯疱疹病毒能提供ｒＡＡＶ质粒在细胞内复制和包装成ｒＡＡＶ毒粒所需的全部辅助功能，并能用于ｒＡＡＶ的大量制备。ＨＳＣ１－ｒｃ的产生是在对一套含有ＨＳＶ１病毒全基因组的粘性质粒（ＳｅｔＣ粘粒，包括ｃｏｓ６，ｃｏｓ１４，ｃｏｓ２８，ｃｏｓ４８，ｃｏｓ５６）进行改造的基础上实现的。首先，用重组ＤＮＡ技术将ＡＡＶ－２ｒｅｐ－ｃａｐ基因插入基中一个粘粒的ＨＳＶ－１基因组中，例如插入ｃｏｓ６的ＨＳＶ１ＵＬ２基因中构建成ｃｏｓ６－ｒｃΔＵＬ２；插入ｃｏｓ５６的ＨＳＶ１ＵＬ４４基因中构建成ｃｏｓ５６－ｒｃΔＵＬ４４。然后，将插入了ｒｅｐ－ｃａｐ的重组粘粒与相应的其余４个粘粒经酶切切去粘粒骨架部分后用脂质体方法共转染ＨＳＶ１１敏感细胞如ＢＨＫ－２１，５个ＨＳＶ１片段在细胞中发生同源重组而产生ＨＳＶ１－ｒｃ。用ＨＳＶ１－ｒｃ感染ｒＡＡＶ载体质粒转染的细胞或稳定携带ｒＡＡＶ载体质粒的细胞株，就能产生大量有感染性的ｒＡＡＶ毒粒。用这种方法产生的ｒＡＡＶ能将外源基因导入哺乳动物细胞中并表达。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
本专利技术属于病毒基因工程领域，具体涉及大量生产重组腺伴随病毒（ｒＡＡＶ）所需的复制和包装功能系统。本专利技术涉及一种装载了２型腺伴随病毒（ＡＡＶ－２）ｒｅｐ－ｃａｐ基因（４．３ｋｂ）的重组单纯疱疹病毒（ＨＳＶ１－ｒｃ）的产生方法及其在重组腺伴随病毒（ｒＡＡＶ）生产中的用途。 本专利技术提出的能提供ｒＡＡＶ复制和包装所需的全部功能的辅助病毒ＨＳＶ－ｒｃ的制备策略，其特征在于，通过对一套含有ＨＳＶ－１全基因组的粘粒（ＳｅｔＣ）进行基因操作，将ｒｅｐ－ｃａｐ基因插入到在ＨＳＶ－１基因组片段中，然后将其与其余４个粘粒共转染细胞，获得含有ｒｅｐ－ｃａｐ的重组ＨＳＶ－１。该重组病毒既能作为产生ｒＡＡＶ所需要的辅助病毒功能，又能提供ｒｅｐ－ｃａｐ基因的功能，因此是一种生产ｒＡＡＶ的全功能辅助病毒。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴小兵，侯云德，伍志坚，
申请(专利权)人：本元正阳基因技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]