治疗肿瘤抑制基因p53缺陷肿瘤的重组毒素腺病毒突变体制造技术

本发明专利技术提供一种具有特异性治疗肿瘤抑制基因ｐ５３缺陷肿瘤的重组毒素腺病毒突变体。主要特点是用质粒ｐＶＣ４５Ｆ，质粒ｐＧＬ３－ｃｏｎｔｒｏｌ，质粒ｐＡＢＳ．４，腺病毒质粒ｐＢＨＧ１１，质粒ｐＵＣ１８，腺病毒突变体ｄＬ１５２０等经一系列中间过程，得到基因表达质粒等等中间产物，将最后得到的产物质粒ｐＢＨＧ－ＰＥ与质粒ｐＡｄΔＥ１ｂ转染２９３细胞，从形成的空斑中筛选出含有重组毒素基因的腺病毒突变体，用ＰＣＲ鉴定重组毒素腺病毒突变体，命名ＣＢＣ－０１５，该重组突变体可进一步开发为一种效率强大的抗肿瘤新药，用于ｐ５３缺陷肿瘤的基因治疗。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种治疗肿瘤抑制基因ｐ５３缺陷肿瘤的腺病毒突变体，其特征是：质粒ｐＶＣ４５Ｆ（Ａ）经限制性内切核酸酶双酶切后，回收包含ＰＥ基因的片段（ａ）；同时，质粒ｐＧＬ３－ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｂ），经限制性内切核酸酶双酶切后得到载体ｐＧＬ３－ΔＬｕｃ（ｂ）；将（ｂ）与（ａ）连接起来，从而构建成ＰＥ基因表达质粒ｐＧＬ３－ＰＥ（ｃ）；该表达质粒经限制性内切核酸酶，双酶切，得到ＰＥ基因表达单元（ｄ）；质粒ｐＡＢＳ．４（Ｃ）经双酶切，得到载体ｐＡＢＳ．４（ｅ）；再将（ｅ）与（ｄ）连接，连接产物为ＰＥ基因表达中间载体命名为ｐＡＢＳ－ＰＥ（ｆ）；将（ｆ）经限制性内切核酸酶酶切，得到ＰＥ基因与卡那霉素基因融合片段（ｇ）；腺病毒质粒ｐＢＨＧ１１（Ｄ）经酶切后得到载体ｐＢＨＧ１１（ｈ），将（ｈ）与（ｇ）连接，从连接产物中筛选出重组质粒，命名为腺病毒中间质粒ｐＢＨＧ－ＰＥ（ｉ）；腺病毒突变体ｄＬ１５２０（Ｆ）经限制性内切核酸酶酶切，回收缺失Ｅ１ｂ的腺病毒ＤＮＡ片段（ｊ）；质粒ｐＵＣ１８（Ｅ）经双酶切后得到的载体ｐＵＣ１８（ｋ）；将（ｋ）与（ｊ）连接，从连接后产物中筛选出重组质粒，命名为腺病毒质粒ｐＡｄΔＥｌｂ（ｌ）；将（ｌ）与（ｉ）共转染２９３细胞（１３），从形成的空斑中筛选出含有重组毒素基因的腺病毒突变体（１４），用ＰＣＲ鉴定重组毒素腺病毒突变体（Ｚ）。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：魏于全，田聆，
申请(专利权)人：华西医科大学，
类型：发明
国别省市：51[中国|四川]