生长抑素基因工程体及其活载体疫苗制造技术

本发明专利技术生长抑素基因工程体及其活载体疫苗，属于生物技术高科技研究领域。将合成的ＳＳ基因连接于乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因上，构建成ＨＢｓ／ｓｓ融合基因。然后将其克隆到痘苗病毒表达载体（ｐＧＪＰ－５）中，与痘苗病毒同源重组，筛选出能表达ＨＢｓＡｇ／ｓｓ融合蛋白的重组痘苗病毒（ｖｖ－ＨＢｓ／ｓｓ）。将此基因工程体在鸡胚绒毛尿膜上增殖后，制成生长抑素基因工程活载体疫苗。经农业部审批为安全等级Ⅰ级，同意进行中间试验。试验结果表明，本疫苗生产工艺简便，不造成环境污染，免疫猪、牛、羊等家畜安全有效。于１９９９年月１２月经农业部审批。同意在川、苏２省商品化生产（农基安审定９９Ｂ－０３－０９）。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
用于生长抑素（ＳＳ）基因工程活载体疫苗的基因工程体－重组痘苗病毒（ｖｖ－ＨＢｓ／ＳＳ），其构建方法为：１、１）ＳＳ基因合成和克隆ＳＳ为１４个氨基酸残基组成的短肽，其氨基酸序列和密码子如下：１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １ １ １２ １３ １４Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａａｎ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ５′－ＣＣＴ ＧＧＣ ＴＧＣ ＡＡＧ ＡＡＣ ＴＴＣ ＴＴＣ ＴＧＧ ＡＡＧ ＡＣＴ ＴＴＣ ＡＣＡ ＴＣＣ ＴＧＴ－３′用３８０型ＤＮＡ自动合成仪合成Ａ５２和Ａ２３ ２个两端有酶切位点的ＳＳ基因片段：Ａ５２５′－ＧＧＡＴＣＣＧＡＴＧＧＣＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＡＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧＡＡＧＡＣＴＴＴＣＡＣＡＴＣＣＴＧＴ３′－Ａ ＡＧＴＧＴＡＧＧＡＣＡＡＴＣＡＴＴＣＧＡＡＡ－５′Ａ２３将２条合成单链摩尔等混合，退火，补齐，即成两端有粘性末端的ＳＳ基因，并将其基因克隆于ｐＵＣ１２，获得带ＳＳ基因的ｐＵＣ１２－ＳＳ质粒：ＢａｍＨＩ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ １３ １４ ｓｔｏｐ５′－ＧＧＡＴＣＣＧ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＧＣ ＴＧＣ ＡＡＧ ＡＡＣ ＴＴＣ ＴＴＣ ＴＧＧ ＡＡＧ ＡＣＴ ＴＴＣ ＡＣＡ ＴＣＣ ＴＧＴ ＴＡＧ ＴＡＡＧＣＴＴＴ－３′ＣＣＴＡＧＧ Ｃ ＴＡＣ ＣＧＡ ＣＣＧ ＡＣＧ ＴＴＣ ＴＴＧ ＡＡＧ ＡＡＧ ＡＣＣ ＴＴＣ ＴＧＡ ＡＡＧ ＴＧＴ ＡＧＧ ＡＣＡ ＡＴＣ ＡＴＴＣＧＡＡＨｉｎｄⅢ１、２）ＳＳ基因与ＨＢｓＡｇ融合基因的构建 从带ＨＢｓ基因的ｐＷＲ１３－ＨＢ ｓ／４经改造成ＰＷＲ１３－ＨＢｓ／６后，从中切下７０００ｂｐ的ＨＢｓ基因片段，将其插入ｐＵＣ↓［１２］－ｓｓ质粒，构建成带ＨＢｓ／ｓｓ嵌合基因的ｐＵＣ↓［１２］－ＨＢｓ／ｓｓ质粒；１、３）ＨＢｓ／ｓｓ表达质粒的构建 将ＨＢｓ／ｓｓ嵌合基 因克隆到痘苗病毒表达载体ｐＧＪＰ－５的启动子Ｐ７．５之后，获得ｐＧＪＰ－ＨＢｓ／ｓｓ质粒；１、４）带ＨＢｓ／ｓｓ基因的重组痘苗病毒克隆 将ｐＧＪＰ－ＨＢｓ／ｓｓ转染，经痘苗病毒感染的ＣＶ－１细胞，由于该质粒中外源基因插入部位的两侧带有痘 苗病毒ＴＫ基因的同源序列，因同源重组而获得带ＨＢｓ／ｓｓ基因的重组痘苗病毒（ｖｖ－ＨＢｓ／ｓｓ）。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杜念兴，杨宏，吉传义，龚文波，徐文忠，王林云，申咏红，黄吉风，张益民，杨京平，李汝俭，
申请(专利权)人：南京南农高科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]