处理白细胞的方法、白细胞组合物及其应用方法技术

本发明专利技术提供了处理白细胞的方法与组合物，用于抑制白细胞的增殖并使它们不能引发移植物抗宿主疾病（ＧＶＨＤ），但能有效地增强同种异体供体细胞的植入，促进疾病细胞或病原体的破坏。也提供了白细胞组合物及这些组合物在缓解疾病中的应用方法，其有利于多种类型的免疫重建和免疫治疗，并增强同种异体供体细胞的植入。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及不能增殖但保留功能的细胞组合物，以及这些组合物的制备方法和应用。更特别地，本专利技术涉及制备用于转输的增殖抑制白细胞的方法。
技术介绍
施行骨髓移植(BMT)治疗多种恶性及非恶性血液病，包括白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、贫血和免疫缺陷病，如重度联合免疫缺陷(SCTD)、维-奥二氏综合征和再生障碍性贫血。白血病是造血组织的恶性肿瘤。这些肿瘤可分为两种主要的类型慢性和急性。急性白血病的特征在于未分化的细胞群体(例如，急性淋巴细胞性白血病(或“ALL”)和急性骨髓性白血病(或“AML”))，而慢性白血病通常显示更成熟的形态学(例如，慢性髓细胞性白血病(或“CML”)和慢性淋巴细胞性白血病(或“CLL”))。美国1995年有大约25700例新的白血病病例，其中约4500例是CML。1996年美国诊断出大约7000例新的CML病例，其中约30％最终接受异体BMT(白血病协会白血病协会站点，1997)。预计约50％的BMT患者遭受白血病的复发。白血病治疗的一般目的在于抑制异常形态的增殖，并恢复骨髓中的“正常”血细胞生成。治疗方案可包括化学治疗、放射治疗和骨髓移植的组合。在“属”同种异体骨髓移植(异体BMT)方案中，首先给予白血病患者重度骨髓抑制剂量的化学放射治疗。该治疗阶段用来根除所有白血病细胞及其先祖。抑制病理性造血生理学后，将功能上无作用的骨髓替换为同种异体无病的干细胞。在最佳条件下，移植的骨髓利于正常多克隆造血增殖的恢复。疾病控制的改善也依赖于移植物对白血病细胞的免疫介导的反应，称为移植物抗白血病(GVL)效应。骨髓不是造血祖细胞的唯一来源。外周血和脐血也可作为干细胞的来源。参见McCullough，新一代血液成分，输血(Transfusion)35374(1995)。可系统施用营养因子(如粒细胞-集落刺激因子)，来提高外周血干细胞的增殖，从而产生骨髓的替代品，用于收获造血祖细胞。遗憾地，成功BMT的主要障碍是移植物抗宿主疾病(GVHD)、感染和原发疾病的复发。GVHD和感染引起移植后前100天中10-30％的发病率和死亡率(《基础与临床免疫学》(Basic and ClinicalImmunology)，第8版，Daniel P.Stites，Abba I.Terr和Tristram G.Parslow(编)，Appleton & Lange，Norwalk CT，1994)。如果BMT失败，残余肿瘤细胞的无限制增殖可导致“复发”。参见Slavin等人，“用免疫活性淋巴细胞及其活化细胞因子对最小残余疾病的免疫治疗”，癌症研究(Cancer Investigation)，10221(1992)。过去在这种情况下的医学治疗选择非常有限。例如，第二次骨髓移植和/或细胞毒性药物的广泛应用与极低的存活率相关。然而，由对移植生物学的更充分的理解得出一种治疗策略。对有或无T细胞排除下的BMT的研究显示，对于能用于CML患者最小残余疾病或“全面”复发的治疗的抗白血病治疗而言，T细胞是重要的。基于这种理解，骨髓移植后用供体白细胞输入(DLI)对白血病患者的治疗成为一种公认的治疗。参见Kolb等人，血液(Blood)762462(1990)；Lim，S H.等人，美国血液学杂志(Am.J.Hem.)5461-67，1997；Giralt，S.A.等人，肿瘤学现代观点(Cur.Op.Onc.)889-95，1996。白细胞的转输也已被用作骨髓移植失败后的过继免疫治疗，来诱导永久的缓解。参见，J.Mccullough，新一代血液成分，输血，35374(1995)。DLI对于CML的治疗特别有效，但也可用于AML、ALL和CLL的治疗。DLI也已用于脊髓发育不良(MDS)、非何杰金氏淋巴瘤、何杰金氏病和多发性骨髓瘤的治疗。输入的细胞似乎引起对受体恶性细胞的免疫应答。根据对bcr-abl重排(费城染色体)的PCR分析，大约70％的复发为慢性期的CML患者在DLI后达到持久的细胞遗传免除，并成为残余疾病阴性的(Drobyski，W.R.等人，血液822310-2318，1993)。然而，该方法具有危险，因为患者中的80％发生GVHD，56％发生骨髓发育不良。这是治疗失败的两个主要原因，导致可达20％的反应患者的死亡(Champlin，R.等人，血液学学报(Act.Haemat.)95157-163，1996)。GVHD由转输的BMT或DLI中存在的供体T淋巴细胞引起，增殖并定居于宿主组织。一旦增殖，供体T细胞即攻击宿主组织，引起病理症状。DLI后疾病的根除被认为是由于移植物对肿瘤细胞的免疫反应，即GVL效应(Barrett，J.等人，肿瘤学现代观点，889-95，1996)。GVL效应的机理尚未完全搞清。它是由来源于供体的T细胞实现的，因为T细胞排除的BMT导致白血病复发的更高发病率。免疫应答是发生该效应所必需的，与同种异体BMT相比，同源BMT后更高的复发率在实验中证明了这一点(Duell，T.，国际医学年报(Ann.Int.Med.)126184-192，1997)。在日本，人群的高均一性导致无效的DLI治疗，因为随机供体和宿主不是充分同种异体的(Takahashi，K.等人，柳叶刀(Lancet)343700-702，1994)。临床结果表明，GVL效应可与致病性GVHD区分。用T细胞排除的同种异体BMT治疗的患者比用BMT和标准GVHD预防治疗的患者显示更高的复发率，甚至当控制GVHD发病率数时仍如此(Horowitz，M.M.等人，血液75555-562，1990)。也有许多报道的病例，观察到CML的免除而没有GVHD的发病(Duell，T.，国际医学年报126184-192，1997)。在动物模型中，GVHD与GVL的区分是可实现的(参见，例如，Johnson，B.D.等人，骨髓移植(Bone Marrow Transplant.)11329-336，1993；Glass，B.等人，英国血液学杂志(Br.J.Hem.)93412-420，1996；Johnson，B.D.等人，血液853302-3312，1995)。为了避免急性GVHD，用几种技术清除在BMT中存在的供体T淋巴细胞或成熟淋巴细胞。然而，当前没有有效的骨髓处理来完全避免GVHD，因为在大多数情况下GVL效应被减弱，导致更高的复发率(Kantarjian，H.M.等人，血液873069-3081，1996)。人及动物模型的某些实验方法包括，T细胞亚群的排除，UVB照射(Greenfeld，J.I.等人，外科研究杂志(J.Sur.Res.)60137-141，1996)，或T细胞排除随后再加入一定量的T细胞，滴定一定量T细胞的GVHD的缺乏(Drobyski，W.R.等人，血液，822310-2318，1993)。一种策略中，用一种“自杀基因”转染供体T细胞，该基因是提供对药物丙氧鸟苷的敏感性的疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因。如果观察到GVHD症状，则给予患者丙氧鸟苷以在体内消除T细胞，直到症状消退(Bordignon，C.等人，人类基因治疗(Hum.Gen.Ther.)6813-819，1995；Bonini C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种待用于向同种异体受体中引入的分离的细胞群体，该细胞群体中含有一种白细胞群体，其中该白细胞群体的一部分是不增殖的，使得该受体中移植物抗宿主疾病（ＧＶＨＤ）的诱导被抑制，并且其中该白细胞群体的一部分保留免疫学活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：WM格林曼，JA格拉斯，S塔利布，A斯塔西诺波劳斯，DJ海，JE赫尔斯特，
申请(专利权)人：塞鲁斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]