本发明专利技术涉及分离的或重组的哺乳动物内切葡糖醛酸糖苷酶、多肽和肽，尤其是人、小鼠和大鼠乙酰肝素酶、编码它们的基因序列，及其在例如化学化合物、蛋白质、多肽、小分子及大分子的测定及表征中的应用，这些物质能抑制转移、血管发生、血管成形术诱导的再狭窄、动脉粥样硬化、炎症、促进创伤愈合和以其它方式调节与硫酸乙酰肝素的乙酰肝素酶切割有关的生理过程。本发明专利技术进一步涉及改变、修饰或以其它方式调节哺乳动物乙酰肝素酶在细胞中表达水平的方法。本发明专利技术的另一方面涉及能结合和／或抑制哺乳动物乙酰肝素酶的免疫活性分子，尤其是单克隆抗体。本发明专利技术的再另一方面涉及乙酰肝素酶作为促进创伤愈合过程的药剂的应用。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分离的或重组的哺乳动物内切葡糖醛酸糖苷酶、多肽和肽，尤其是人血小板乙酰肝素酶、编码它们的基因序列，及其在例如化学化合物、蛋白质、多肽、小分子及大分子的测定及表征中的应用，这些物质能抑制转移、血管发生、血管成形术诱导的再狭窄、动脉粥样硬化、炎症、促进创伤愈合和以其它方式调节与硫酸乙酰肝素的乙酰肝素酶(heparanase)切割有关的生理过程。本专利技术进一步涉及改变、修饰或以其它方式调节哺乳动物之乙酰肝素酶在细胞中表达水平的方法。本专利技术的另一方面涉及能结合和／或抑制哺乳动物之乙酰肝素酶的免疫活性分子，尤其是单克隆抗体。本专利技术的再另一方面涉及乙酰肝素酶作为抑制新血管形成过程的药剂的应用。概要在叙述的最后收集了本说明书用数字提及的出版物的书目细节。本说明书具有用程序PatentIn 2．0版制备的核苷酸和氨基酸序列信息，示于书目后。序列表中每一核苷酸或氨基酸序列表示为数字指示&#60210&#62，其后为序列标识(例如&#60210&#621、&#60210&#622等)。序列的长度、类型(DNA、蛋白质(PRT)等)和每种核苷酸或氨基酸序列的来源生物分别用数字指示范围&#60211&#62、&#60212&#62和&#60213&#62提供的信息表示。本说明书提及的核苷酸和氨基酸序列表示为数字指示范围&#60400&#62之后为序列标识(例如&#60400&#621、&#60400&#622等)中提供的信息。此处提及的核苷酸序列的名称由IUPAC-IUB生物化学命名委员会所推荐，其中A代表腺嘌呤，C代表胞嘧啶，G代表鸟嘌呤，T代表胸腺嘧啶，Y代表嘧啶残基，R代表嘌呤残基，M代表腺嘌呤或胞嘧啶，K代表鸟嘌呤或胸腺嘧啶，S代表鸟嘌呤或胞嘧啶，W代表腺嘌呤或胸腺嘧啶，H代表除鸟嘌呤之外的核苷酸，B代表除腺嘌呤之外的核苷酸，V代表除胸腺嘧啶之外的核苷酸，D代表除胞嘧啶之外的核苷酸，N代表任何核苷酸残基。此处提及的氨基酸残基的名称示于表Ⅰ中。在此使用时，术语“来源于”是指指定的整体可以从特定来源获得，虽然不必直接从该来源获得。在本说明书中，除非内容另外需要，否则单词“包含(comprise)”或其变形如“comprises”或“comprising”可认为是指包含指定的步骤或组件或整体或者步骤或组件或整体群，而不排除其它任何步骤或组件或整体或者组件或整体群。研究显示，尽管毛细管内皮对转移性肿瘤细胞的最初捕获是不依赖血小板的，但其后不久发生的血小板聚集能引起血小板活化和脱粒，导致裂隙形成和内皮细胞的收缩，使下面的基膜暴露于肿瘤细胞的粘附(Tanaka等人，1986；Crissman等人，1985；Yahalom等人，1985)。基板和下面的结缔组织基质主要由纤连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白和玻连蛋白的复杂网络组成，其中每一种都可与包埋于基质中的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)的硫酸乙酰肝素(HS)侧链相互作用(Yurchenco和Schittny，1990)。HS链一般由被低度硫酸化或非硫酸化区域(主要是1→4连接于β-D-葡糖醛酸的N-乙酰化葡糖胺的二糖单位)隔开的成簇硫酸化二糖单位(主要是1→4连接于α-L-艾杜糖醛酸残基的N-硫酸化葡糖胺)组成(Turnbull和Gallagher，1990；1991)。在进行本专利技术的工作中，专利技术者设法分离并表征了能切割包埋于基质中的HSPG之HS侧链的酶、蛋白质、多肽和肽及编码它们的基因序列。这样产生的基因序列提供了一种当在基质部位表达或向其转运时能帮助ECM解装配并有助于细胞迁移的工具。本专利技术的基因序列进一步提供了开发大量治疗性和预防性药物化合物的方法，特别是用于抑制转移、新血管形成、血管发生、血管成形术诱导的再狭窄、动脉粥样斑块形成和炎症和／或促进创伤愈合。本专利技术的第二方面提供一种分离的核酸分子，其包含一种编码哺乳动物内切葡糖醛酸糖苷酶(endoglucuronidase)多肽、尤其是乙酰肝素酶或其片段或衍生物的核苷酸序列，或互补于编码它们的序列的核苷酸序列。更具体而言，哺乳动物内切葡糖醛酸糖苷酶多肽包含如&#60400&#621-11或&#60400&#6213或&#60400&#6215或&#60400&#6217或&#60400&#6219或&#60400&#6223中任一个或多个所示的氨基酸序列，或者与之至少40％相同。本专利技术的另一方面提供一种分离的核酸分子，它与&#60400&#6212或&#60400&#6214或&#60400&#6216或&#60400&#6218中任一个或其同源物、类似物或衍生物所示的核苷酸序列或其互补序列至少40％相同。本专利技术的再另一方面提供一种基因构建体，其表达重组内切葡糖醛酸糖苷酶活性，尤其是乙酰肝素酶活性或其活性部位。本专利技术的另一方面提供一种重组哺乳动物内切葡糖醛酸糖苷酶多肽，尤其是乙酰肝素酶或其片段或衍生物。本专利技术的再另一方面涉及一种鉴定乙酰肝素酶活性调节剂的方法，该方法包括在一种潜在调节剂的存在下测定重组乙酰肝素酶活性，并且将该活性与不存在该潜在调节剂时的重组乙酰肝素酶活性相比较。本专利技术的另一方面涉及哺乳动物内切葡糖醛酸糖苷酶多肽尤其是哺动物乙酰肝素酶的抑制剂。本专利技术所包括的抑制剂分子尤其可用作转移、血管发生、创伤愈合、血管成形术诱导的再狭窄、动脉硬化、动脉粥样硬化、炎症或乙酰肝素酶活性升高的其它生理性或医学病症的抑制剂。本专利技术的再另一方面涉及重组乙酰肝素酶或其活性片段或衍生物的应用，用于抑制参与组织发育、炎症、创伤愈合和肿瘤转移的调节的新血管形成及其相关过程。本专利技术的重组多肽也可用于硫酸化分子如HSPG和硫酸乙酰肝素分子的测序，或用来辅助硫酸化蛋白聚糖、硫酸化寡糖和硫酸乙酰肝素分子结构的确定，其中用该重组多肽从中切割硫酸乙酰肝素部分。本专利技术的另一方面提供一种能结合本专利技术的重组内切葡糖醛酸糖苷酶多肽的免疫活性分子，尤其是能结合和／或抑制乙酰肝素酶多肽催化活性的抗体分子。本专利技术的抗体分子尤其可用于生物样品中乙酰肝素酶表达的诊断，特别是当患者被怀疑患有与升高的乙酰肝素酶表达有关的病症时，如癌症、转移、血管发生、血管成形术诱导的再狭窄、动脉粥样硬化或炎症等。本专利技术的另一方面提供一种重组内切葡糖醛酸糖苷酶多肽，尤其是重组乙酰肝素酶多肽或其免疫活性同源物、类似物或衍生物，在生物样品的乙酰肝素酶表达的诊断中尤其是在患者样品如血清的诊断测定中用作“标准”，其中患者疑患有与升高的乙酰肝素酶表达有关的病症，如上文所列本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的核酸分子，其包含与〈４００〉１２或〈４００〉１４或〈４００〉１６或〈４００〉１８中的任一个或其互补序列至少有８０％同一性的核苷酸序列，并且其编码一种具有哺乳动物内切葡糖醛酸糖苷酶活性的多肽。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：CG弗里曼，MD休利特，CR帕里什，BJ哈姆多夫，
申请(专利权)人：澳大利亚国立大学，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]
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