神经氨酸酶及抑制剂在制备治疗高血压的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了神经氨酸酶及抑制剂在制备治疗高血压的药物中的应用。已知扎那米韦、磷酸奥司他韦为神经氨酸酶的有效抑制剂，黄连碱对神经氨酸酶的抑制作用也已在申请人先前的专利申请中公开，申请人又发现丹酚酸B在体外可以抑制神经氨酸酶的活性，为神经氨酸酶的抑制剂；体内试验证明，这几种神经氨酸酶抑制剂可以有效抑制血管内皮细胞中神经氨酸酶活性，进而降低血压。因此，神经氨酸酶及其抑制剂可用于制备治疗高血压的药物。

The application of neuraminidase and inhibitors in the preparation of drugs for the treatment of hypertension

The invention discloses the application of neuraminidase and inhibitors in the preparation of drugs for the treatment of hypertension. Zana Mi Vee, known as oseltamivir are potent inhibitors of neuraminidase inhibition of neuraminidase, Huang Lianjian has also been in the previous patent application in public, the applicant also found that salvianolic acid B can inhibit neuraminidase activity in vitro, for God by arginase inhibitors; in vivo test showed that these neuraminidase inhibitors can effectively inhibition of neuraminidase activity in vascular endothelial cells, thereby reducing blood pressure. Therefore, neuraminidase and its inhibitors can be used in the preparation of drugs for the treatment of hypertension.

【技术实现步骤摘要】
神经氨酸酶及抑制剂在制备治疗高血压的药物中的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及酶和酶抑制剂的应用，具体涉及神经氨酸酶及其抑制剂在制备治疗高血压的药物中的应用。
技术介绍
神经氨酸是广泛存在于生物体内的一类天然糖酸类化合物。现在确定神经氨酸有五十多种天然衍生物，N-乙酰神经氨酸、N-羟乙酰基神经氨酸是其中较为常见的衍生物。神经氨酸通常以短链残基的形式链接在糖蛋白、糖脂等糖缀合物的末端。神经氨酸是重要的生物信息传递分子，细胞表面糖蛋白和糖脂的神经氨酸化修饰在许多生物过程中发挥着至关重要的作用，包括细胞粘附、抗原识别和信号传导等。在生物体内，神经氨酸酶是一种与神经氨酸相关的酶，在生物体内许多重要的生理过程中发挥着不可或缺的作用。神经氨酸酶可以断裂糖缀合物末端与神经氨酸残基相连接的糖苷键从而水解神经氨酸糖缀合物使得神经氨酸游离。神经氨酸酶抑制剂是一类可以抑制神经氨酸酶活性的物质，如扎那米韦和磷酸奥司他韦。扎那米韦和磷酸奥司他韦是临床常用的治疗流感的药物。流感病毒通过其表面的红血球凝集素与宿主细胞表面的神经氨酸残基结合，继而侵入宿主细胞。随后，其基因在宿主细胞内复制和表达，形成新的流感病毒。在新病毒的释放阶段，神经氨酸酶催化水解成熟的流感病毒表面红血球凝集素与宿主细胞神经氨酸残基之间相连接的神经氨酸糖苷键，使得新病毒颗粒脱离被感染细胞，进一步在宿主体内扩散。扎那米韦和磷酸奥司他韦通过抑制神经氨酸酶的活性抑制新病毒颗粒脱离被感染细胞，抑制其在宿主体内扩散，达到治疗目的。申请人于2016年3月22日提交了申请号为“201610166253.5”、专利技术名称为“神经氨酸酶及其抑制剂在心肌缺血及心肌梗死中的应用”的专利申请，该申请公开了神经氨酸酶及其抑制剂在心肌缺血及心肌梗死中的应用，提供了神经氨酸酶与心肌缺血损伤的关联性，证明通过抑制神经氨酸酶的活性可以缓解心肌缺血损伤，神经氨酸酶可以作为筛选预防、缓解和/或治疗心肌缺血损伤药物的靶标；该申请还证明了神经氨酸酶抑制剂对心肌缺血损伤的缓解作用，神经氨酸酶抑制剂通过降低神经氨酸酶的水平改善心肌缺血损伤。申请人在随后的研究中还发现神经氨酸酶与多种疾病相关，经过检索，未发现现有技术公开过神经氨酸酶与这些疾病的相关性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供神经氨酸酶及其抑制剂在制备治疗高血压的药物中的应用。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：神经氨酸酶在制备治疗高血压的药物中的应用。神经氨酸酶抑制剂在制备治疗高血压的药物中的应用。黄连碱或丹酚酸B及其可药用盐用于制备神经氨酸酶抑制剂的用途。扎那米韦、磷酸奥司他韦、黄连碱或丹酚酸B及其可药用盐用于制备抑制血管内皮细胞神经氨酸活性的药物的用途。扎那米韦、磷酸奥司他韦、黄连碱或丹酚酸B及其可药用盐用于制备治疗高血压的药物的用途。已知扎那米韦、磷酸奥司他韦为神经氨酸酶的有效抑制剂，黄连碱对神经氨酸酶的抑制作用也已在申请人先前的专利申请中公开，申请人又发现丹酚酸B在体外可以抑制神经氨酸酶的活性，为神经氨酸酶的抑制剂；体内试验证明，这几种神经氨酸酶抑制剂可以有效抑制血管内皮细胞中神经氨酸酶活性，进而降低血压。因此，神经氨酸酶及其抑制剂可用于制备治疗高血压的药物。附图说明图1为高血压模型组和各干预组与健康对照组静脉内皮细胞神经氨酸酶活性比较。具体实施方式下面结合实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。实施例1：一、实验方法将SPF级9周龄SHR雄性大鼠(体质量180～200g)自由饮食饲养3d后，适应性测量血压5次，平均血压≥160mmHg(1mmHg＝0.133kPa)的SHR进入实验分组，按体重随机均分为5组，每组10只：模型组和扎那米韦、磷酸奥司他韦、黄连碱、丹酚酸B给药组。另取9周龄正常血压WKY雄性大鼠作为对照组。给药组大鼠分别给予0.2mg/kg/d的扎那米韦(i.v.)、5mg/kg/d磷酸奥司他韦(p.o.)、40mg/kg/d黄连碱(p.o.)、40mg/kg/d丹酚酸B(p.o.)，模型组和对照组灌胃给予等体积溶媒0.5％CMC-Na，连续给药4周。给药4周后，按全自动无创血压测量系统(成都泰盟；型号BP-600A)使用要求操作，在安静、温暖、通风、熟悉的环境下分别测量每组大鼠末次给药后1h的尾动脉收缩压(SBP)。每只大鼠连续测量5次，取平均值，血压测量均由同一人操作。结果如表1和图1所示。大鼠末次给药后禁食、自由饮水24h，称体质量，以1％戊巴比妥钠(30～40mg/kg)麻醉，腹主动脉取血，分离血浆和血清。测定血清中N-乙酰神经氨酸含量，测定方法按照试剂盒(N-乙酰神经氨酸含量检测试剂盒，齐一生物)要求操作。二、实验结果与对照组相比，模型组大鼠尾动脉收缩压显著较高，血清中N-乙酰神经氨酸含量也显著较高；与模型组相比，各给药组大鼠尾动脉收缩压显著降低，血清中N-乙酰神经氨酸含量也显著降低。实验结果如表1所示。表1模型组和各给药组与对照组尾动脉收缩压、血清N-乙酰神经氨酸含量比值实施例2：将人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-c)培养于环境为10％胎牛血清、1％双抗的高糖DMEM培养液中，条件37℃、5％CO2。隔天换液，以0.25％胰酶消化传代后，按条件培养基不同分别转种于培养皿中，分组为空白对照组(对照组)、高血压模型组(高血压组)、扎那米韦干预组(扎那米韦组)、磷酸奥司他韦干预组(磷酸奥司他韦组)、黄连碱干预组(黄连碱组)、丹酚酸B干预组(丹酚酸B组)。条件培养基配制按照实验分组配制如下：①空白对照组：含10％血清的正常培养基；②高血压模型组：含10％血清及1μg/ml浓度血管紧张素II的正常培养基；③扎那米韦干预组：模型组培养基基础上添加20nmol/L扎那米韦；④磷酸奥司他韦干预组：模型组培养基基础上添加20nmol/L磷酸奥司他韦；⑤黄连碱干预组：模型组培养基基础上添加200nmol/L黄连碱；⑥丹酚酸B干预组：模型组培养基基础上添加200nmol/L丹酚酸B。各组细胞采用不同条件的培养基，培养48h，将上清遗弃后，用磷酸盐缓冲液冲洗两遍，收集细胞裂解，用神经氨酸酶检测试剂盒P0306测定各组静脉内皮细胞的神经氨酸酶活性。结果显示，与健康对照组相比，高血压模型组静脉内皮细胞的神经氨酸酶活性显著升高；与高血压模型组，各药物干预组静脉内皮细胞的神经氨酸酶活性显著降低。高血压模型组和各给药组与健康对照组静脉内皮细胞的神经氨酸酶活性的比值如表2和图1所示。表2高血压模型组和各给药组与健康对照组静脉内皮细胞神经氨酸酶活性比值实施例1和实施例2结合可以证明，扎那米韦、磷酸奥司他韦、黄连碱、丹酚酸B可以抑制血管内皮细胞的神经氨酸酶活性，通过抑制神经氨酸酶的活性发挥降血压的作用。实施例3：采用市售的神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒P0309(碧云天，Beyotime)对丹酚酸B进行体外抑制活性测试，阳性对照药为磷酸奥司他韦。在96孔板上每孔加入70μL缓冲液和10μL神经氨酸酶溶液，再加入10μL不同浓度的待测液，振动混匀，在37℃孵育5min，加入10μL含荧光底物的溶液，振动混匀，在37℃孵育30min，进行荧光测定，其中激发波长为322nm，发射波长为450nm。根据荧光读数计算出不同待本文档来自技高网...

【技术保护点】
神经氨酸酶在制备治疗高血压的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.神经氨酸酶在制备治疗高血压的药物中的应用。2.神经氨酸酶抑制剂在制备治疗高血压的药物中的应用。3.黄连碱或丹酚酸B及其可药用盐用于制备神经氨酸酶抑制剂的用途。4.扎那米韦、磷...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐炼文，张蕾，魏婷婷，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32