一种人类乳头瘤病毒１１Ｌ１－Ｅ７重组蛋白及其应用，利用分子克隆技术构建ＨＰＶ１１型早期蛋白基因Ｅ７与ＨＰＶ１１晚期基因Ｌ１融合的重组体ＨＰＶ１１Ｌ１－Ｅ７，并使其在杆状病毒－昆虫表达系统进行表达。该重组蛋白经证实具有与野生型ＨＰＶ相似的生物学特性。该重组蛋白可与药学上可接受的药物制成药物组合物，应用于临床预防和治疗ＨＰＶ感染性疾病，并为今后研制用于临床预防和治疗尖锐湿疣的疫苗奠定基础。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种新的病毒重组蛋白和这种重组蛋白的用途，尤其是一种人类乳头瘤病毒11L1-E7重组蛋白及其在感染性疾病的预防与治疗中的应用。近年来，我国性传播性疾病的发病率持续快速升高已严重危害我国人民的健康和家庭幸福。尖锐湿疣(condyloma acuminatum)是性传播性疾病之一，它在我国的发病率已占性传播性疾病的首位。由于缺乏理想的治疗方法，尖锐湿疣的复发率高达30％到70％。因此寻求理想的治疗和预防手段应成为我国迫在眉捷的大事。尖锐湿疣由人类乳头瘤病毒(Human Papilloma Virus，HPV)引起。HPV是一群小DNA肿瘤病毒，属乳多空病毒科的多瘤病毒。目前已确定130个型别，其中78个型已被完全克隆。引起尖锐湿疣的HPV有11型、6型、16型、18型和33型等，其中最常见的是HPV11型。HPV不仅可以引起皮肤粘膜上皮的过度增殖，还与多种鳞状细胞癌的发生发展有关。乳头瘤病毒的感染具有严格的宿主特异性和嗜上皮性，人是HPV的唯一宿主，至今仍未能体外培养。HPV研究的重大突破是发现HPV的晚期结构蛋白L1能在体外真核细胞表达系统表达并自动形成病毒样颗粒(Virus Like Particles，VLPs)。研究表明，VLPs的最大特点是其具有与野生型HPV病毒颗粒极为相似的空间结构和抗原决定簇，因此两者抗原性十分近似。其另一大特点是L1的羧基端可以象载体那样连接其它基因并随之在一定的表达系统进行表达，产生的重组蛋白可随着L1形成嵌合型病毒样颗粒VLPs。近年研究还表明，病毒样颗粒VLPs可作为外源性抗原通过非经典的组织相容复合体(MHC)classI抗原提呈通路得到呈递，并有效激活以细胞毒性T淋巴细胞反应(CTL)为特征的细胞免疫反应。细胞免疫对于机体清除病毒感染至关重要。为了更好地防治HPV感染性疾病，国外许多学者正在研究乳头瘤病毒结构蛋白L1和早期蛋白E7引发机体特异性细胞免疫反应的机制等。体外试验、动物试验和人体试验均证实，乳头瘤病毒的晚期结构蛋白L1和早期蛋白E7能引发机体的特异性细胞免疫反应。但关于HPV11L1-E7重组蛋白及其应用尚无记载。本专利技术的目的是提供一种人类乳头瘤病毒11L1-E7重组蛋白及其在感染性疾病的预防与治疗中的应用。本专利技术的目的是这样实现的将HPV11E7基因利用分子克隆技术克隆入连有HPVL1的载体PUC，再将这HPV11L1-E7基因片段插入杆状病毒转染载体pVL1393，然后转染杆状病毒线状DNA并用之感染SF-9昆虫细胞使HPV11L1-E7基因得到表达，其重组体pVL1393/HPV11L1-E7DNA的序列为(1)pVL1393/HPV11L1-E7aATGTGGCGGCCTAGCGACAGCACAGTATATGTGCCTCCTCCCAACCCTGTATCCAAGGTTGTTGCCACGGATGCGTATGTTAAACGCACCAACATATTTTATCATGCCAGCAGTTCTAGACTCCTTGCTGTGGGACATCCATATTACTCTATCAAAAAAGTTAACAAAACAGTTGTACCAAAGGTGTCTGGATATCAATATAGAGTGTTTAAGGTAGTGTTGCCAGATCCTAACAAGTTTGCATTACCTGATTCATCCCTGTTTGACCCCACTACACAGCGTTTAGTATGGGCGTGCACAGGGTTGGAGGTAGGCAGGGGTCAACCTTTAGGCGTTGGTGTTAGTGGGCATCCATTGCTAAACAAATATGATGATGTAGAAAATAGTGGTGGGTATGGTGGTAATCCTGGTCAGGATAATAGGGTTAATGTAGGTATGGATTATAAACAAACCCAGCTATGTATGGTGGGCTGTGCTCCACCGTTAGGTGAACATTGGGGTAAGGGTACACAATGTTCAAATACCTCTGTACAAAATGGTGACTGCCCCCCGTTGGAACTTATTACCAGTGTTATACAGGATGGGGACATGGTTGATACAGGCTTTGGTGCTATGAATTTTGCAGACTTACAAACCAATAAATCGGATGTTCCCCTTGATATTTGTGGAACTGTCTGCAAATATCCTGATTATTTGCAAATGGCTGCAGACCCTTATGGTGATAGGTTGTTTTTTTATTTGCGAAAGGAACAAATGTTTGCTAGACACTTTTTTAATAGGGCCGGTACTGTGGGGGAACCTGTGCCTGATGACCTGTTGGTAAAAGGGGGTAATAACAGATCATCTGTAGCTAGTAGTATTTATGTACATACACCTAGTGGCTCATTGGTGTCTTCAGAGGCTCAATTATTTAATAAACCATATTGGCTTCAAAAGGCTCAGGGACATAACAATGGTATTTGCTGGGGAAACCACTTGTTTGTTACTGTGGTAGATACCACACGCAGTACAAATATGACACTATGTGCATCTGTGTCTAAATCTGCTACATACACTAATTCAGATTATAAGGAATACATGCGCCATGTGGAGGAGTTTGATTTACAGTTTATTTTTCAATTGTGTAGCATTACATTATCTGCAGAAGTCATGGCCTATATACACACAATGAATCCTTCTGTTTTGGAGGACTGGAACTTTGGTTTATCGCCTCCACCAAATGGTACACTGGAGGATACTTATAGATATGTACAGTCACAGGCCATTACCTGTCAGAAACCCACACCTGAAAAAGAAAAACAGGATCCCTATAAGGATATGAGTTTTTGGGAGGTTAACTTAAAAGAAAAGTTTTCAAGTGAATTAGATCAGTTTCCCCTTGGACGTAAGTTTTTATTGCAAAGTGGATATCGAGGACGGACGTCTGCTCGTACAGGTATAAAGCGCCCAGCTGTGTCTAAGCCCTCTACAGCCCCCAAACGAAAACGTACCAAAACCAAAAAGTAA--- ATG CAT GGA AGA CTTGTT ACC CTA AAG GAT ATA GTA CTA GAC CTG CAG CCT CCT GAC CCT GTA GGG TTACAT TGC TAT GAG CAA TTA GAA GAC AGC TCA(2) pVL1393/HPV11L1-E7bATGTGGCGGCCTAGCGACAGCACAGTATATGTGCCTCCTCCCAACCCTGTATCCAAGGTTGTTGCCACGGATGCGTATGTTAAACGCACCAACATATTTTATCATGCCAGCAGTTCTAGACTCCTTGCTGTGGGACATCCATATTACTCTATCAAAAAAGTTAACAAAACAGTTGTACCAAAGGTGTCTGGATATCAATATAGAGT本文档来自技高网...
【技术保护点】
人类乳头瘤病毒１１Ｌ１－Ｅ７重组蛋白及其应用，其特征在于：将ＨＰＶ１１Ｅ７基因利用分子克隆技术克隆入连有ＨＰＶＬ１的载体ＰＵＣ，再将这ＨＰＶ１１Ｌ１－Ｅ７基因片段插入杆状病毒转染载体ｐＶＬ１３９３，然后转染杆状病毒线状ＤＮＡ并用之感染ＳＦ－９昆虫细胞使ＨＰＶ１１Ｌ１－Ｅ７基因得到表达，其重组体ｐＶＬ１３９３／ＨＰＶ１１Ｌ１－Ｅ７ＤＮＡ的序列为：（１）ｐＶＬ１３９３／ＨＰＶ１１Ｌ１－Ｅ７ａ：ＡＴＧＴＧＧＣＧＧＣＣＴＡＧＣＧＡＣＡＧＣＡＣＡＧＴＡＴＡＴＧＴＧＣＣＴＣＣＴＣ ＣＣＡＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＣＡＡＧＧＴＴＧＴＴＧＣＣＡＣＧＧＡＴＧＣＧＴＡＴＧＴＴＡＡＡＣＧＣＡＣＣＡＡＣＡＴＡＴＴＴＴＡＴＣＡＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＴＣＴＡＧＡＣＴＣＣＴＴＧＣＴＧＴＧＧＧＡＣＡＴＣＣＡＴＡＴＴＡＣＴＣＴＡＴＣＡＡＡ ＡＡＡＧＴＴＡＡＣＡＡＡＡＣＡＧＴＴＧＴＡＣＣＡＡＡＧＧＴＧＴＣＴＧＧＡＴＡＴＣＡＡＴＡＴＡＧＡＧＴＧＴＴＴＡＡＧＧＴＡＧＴＧＴＴＧＣＣＡＧＡＴＣＣＴＡＡＣＡＡＧＴＴＴＧＣＡＴＴＡＣＣＴＧＡＴＴＣＡＴＣＣＣＴＧＴＴＴＧＡＣＣＣＣＡＣＴＡ ＣＡＣＡＧＣＧＴＴＴＡＧＴＡＴＧＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＧＧＧＴＴＧＧＡＧＧＴＡＧＧＣＡＧＧＧＧＴＣＡＡＣＣＴＴＴＡＧＧＣＧＴＴＧＧＴＧＴＴＡＧＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＴＴＧＣＴＡＡＡＣＡＡＡＴＡＴＧＡＴＧＡＴＧＴＡＧＡＡＡＡＴＡＧＴＧＧＴ ＧＧＧＴＡＴＧＧＴＧＧＴＡＡＴＣＣＴＧＧＴＣＡＧＧＡＴＡＡＴＡＧＧＧＴＴＡＡＴＧＴＡＧＧＴＡＴＧＧＡＴＴＡＴＡＡＡＣＡＡＡＣＣＣＡＧＣＴＡＴＧＴＡＴＧＧＴＧＧＧＣＴＧＴＧＣＴＣＣＡＣＣＧＴＴＡＧＧＴＧＡＡＣＡＴＴＧＧＧＧＴＡＡＧＧＧ ＴＡＣＡＣＡＡＴＧＴＴＣＡＡＡＴＡＣＣＴＣＴＧＴＡＣＡＡＡＡＴＧＧＴＧＡＣＴＧＣＣＣＣＣＣＧＴＴＧＧＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＣＡＧＴＧＴＴＡＴＡＣＡＧＧＡＴＧＧＧＧＡＣＡＴＧＧＴＴＧＡＴＡＣＡＧＧＣＴＴＴＧＧＴＧＣＴＡＴＧＡＡＴＴＴＴＧ ＣＡＧＡＣＴＴＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＡＡＴＣＧＧＡＴＧＴＴＣＣＣＣＴＴＧＡＴＡＴＴＴＧＴＧＧＡＡＣＴＧＴＣＴＧＣＡＡＡＴＡＴＣＣＴＧＡＴＴＡＴＴＴＧＣＡＡＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＡＣＣＣＴＴＡＴＧＧＴＧＡＴＡＧＧＴＴＧＴＴＴＴＴＴＴＡＴＴＴ ＧＣＧＡＡＡＧＧＡＡＣＡＡＡＴＧＴＴＴＧＣＴＡＧＡＣＡＣＴＴＴＴＴＴＡＡＴＡＧＧＧＣＣＧＧＴＡＣＴＧＴＧＧＧＧＧＡＡＣＣＴＧＴ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：程浩，郑树，张苏展，吴金民，周凯，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第二医院，浙江大学医学院附属邵逸夫医院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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