从紫草种子中提取超氧化物歧化酶的方法技术

本发明专利技术公开一种从紫草种子中提取超氧化物歧化酶的方法，依次包括如下步骤：将紫草种子废渣、水、氯化铜、氯化锌、氯化钙按重量比为１∶１．８～２．２∶０．０３～０．０４∶０．０２５～０．０３∶０．０００９～０．００１的比例混合并浸泡２４～３２小时；提取上清液；热变上清液；用大超滤器过滤上清液得滤液１；在滤液１中加入酶保活剂后用小超滤器过滤；用赛氏过滤器加压过滤，冻干过滤液。其关键是在提取步骤中，加入了触酶活剂及保酶活剂，并且选择了合适的上清液热变温度，使其提取物－超氧化物歧化酶活性高，酶活性为３７５０单位／毫克，酶比活性１９５０单位／毫克蛋白。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种超氧化物歧化酶(SOD)的提取方法。尤其是一种。
技术介绍
医学研究结果已经表明人体代谢过程中产生的活性氧自由基不仅可以导致人体衰老，还可以引起各种疾病，超氧化物歧化酶则是清除活性氧自由基的最好物质之一，为此，超氧化物歧化酶已被广泛用于医疗保健、化妆等产品中。以往，超氧化物歧化酶都是从牛、猪等动物的血液中提取，为了避免因血液带毒而引起交叉感染等问题，目前国际上已有规定禁止从动物血液中提取超氧化物歧化酶，所以，人们都在寻求从植物体内提取超氧化物歧化酶的技术。迄今为止，人们发现紫草种子(种子皮)中含有大量的超氧化物歧化酶成分，也公开了从紫草种子中提取超氧化物歧化酶的技术。如专利申请号为99122570、名称为“紫草种子超氧化物歧化酶及其提取方法”的专利申请技术。该专利申请技术的提取方法为“a.将原料置于浸泡罐中，用1∶2的水浸泡24小时；b.将浸泡液用离心机离心；c.放入分离罐中分离加入添加剂沉淀2小时；d.取出上清液加热40-80℃；e.再离心；f.取出上清液进入大超滤器超滤；g.超滤后的上清液再离心，取出上清液用空压机加压，进入赛氏过滤器过滤；h.取出过滤液进入小超滤器，剩1公斤取出液进入冻干机；i.经24小时冻干后取出冻干粉，以20万U/单位装瓶，密封为成品入库保管。”由于该方法中只在分离过程中加入了添加剂(沉淀剂)，整个提取过程没有任何触酶活及保酶活的步骤，并且上清液热变温度为40～80℃，使其提取物酶活性低(酶活性650单位/毫克，酶比活350单位/毫克)。
技术实现思路
本专利技术为了解决现有技术所存在的从紫草种子中提取的超氧化物歧化酶活性低的问题，提供一种从紫草种子中提取的超氧化物歧化酶活性高的提取方法。本专利技术的技术解决方案是一种，依次包括如下步骤 a.将紫草种子废渣、水、氯化铜、氯化锌、氯化钙按重量比为1∶1.8～2.2∶0.03～0.04∶0.025～0.03∶0.0009～0.001的比例混合并浸泡24～32小时；b.提取上清液；c.热变上清液；d.用大超滤器过滤上清液得滤液1；e.在滤液1中加入酶保活剂后用小超滤器过滤；f.用赛氏过滤器加压过滤；g.冻干过滤液。所述的酶保活剂为兆糖。所述的提取上清液为用离心机两次离心过滤。所述的热变上清液为将上清液加热至40～70℃。本专利技术同现有技术相比，其关键是在提取步骤中，加入了触酶活剂及保酶活剂，并且选择了合适的上清液热变温度，使其提取物——超氧化物歧化酶活性高，酶活性为3750单位/毫克，酶比活性1950单位/毫克蛋白。附图说明图1为本专利技术实施例的工艺流程图。具体实施例方式下面将结合附图说明本专利技术的具体实施方式。如图1所示实施例1为首先将100公斤榨过油的紫草种子废渣、220公斤水、3公斤氯化铜、2.5公斤氯化锌、0.09公斤氯化钙进行混合、浸泡24小时；用离心机进行离心以滤去废渣，提取上清液；对所得到的上清液加热至40℃进行热变；用大超滤器过滤上清液得滤液1；在滤液1中加入兆糖，然后再用小超滤器过滤；再用赛氏过滤器加压过滤。最后用冻干机将过滤液冻干。实施例2为将50公斤榨过油的紫草种子废渣、90公斤水、2公斤氯化铜、1.5公斤氯化锌、0.05公斤氯化钙进行混合、浸泡32小时；用离心机进行离心滤去废渣，提取上清液，此步骤重复两次；对所得到的上清液加热至70℃进行热变；用大超滤器过滤上清液得滤液1；在滤液1中加入兆糖，然后再用小超滤器过滤；再用赛氏过滤器加压过滤。最后用冻干机将过滤液冻干。权利要求1.一种，依次包括如下步骤a.将紫草种子废渣、水、氯化铜、氯化锌、氯化钙按重量比为1∶1.8～2.2∶0.03～0.04∶0.025～0.03∶0.0009～0.001的比例混合并浸泡24～32小时；b.提取上清液；c.热变上清液；d.用大超滤器过滤上清液得滤液(1)；e.在滤液(1)中加入酶保活剂后用小超滤器过滤；f.用赛氏过滤器加压过滤；g.冻干过滤液。2.根据权利要求1所述的，其特征在于所述的酶保活剂为兆糖。3.根据权利要求1或2所述的，其特征在于所述的提取上清液为用离心机两次离心过滤。4.根据权利要求1或2所述的其特征在于所述的热变上清液为将上清液加热至40～70℃。全文摘要本专利技术公开一种,依次包括如下步骤:将紫草种子废渣、水、氯化铜、氯化锌、氯化钙按重量比为1∶1.8～2.2∶0.03～0.04∶0.025～0.03∶0.0009～0.001的比例混合并浸泡24～32小时;提取上清液;热变上清液;用大超滤器过滤上清液得滤液1;在滤液1中加入酶保活剂后用小超滤器过滤;用赛氏过滤器加压过滤,冻干过滤液。其关键是在提取步骤中,加入了触酶活剂及保酶活剂,并且选择了合适的上清液热变温度,使其提取物——超氧化物歧化酶活性高,酶活性为3750单位/毫克,酶比活性1950单位/毫克蛋白。文档编号C12N9/08GK1376783SQ02117768公开日2002年10月30日 申请日期2002年5月17日 优先权日2002年5月17日专利技术者王锁春 申请人:大连长青珍稀植物研究所, 大连北方药物研究所, 王锁春本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从紫草种子中提取超氧化物歧化酶的方法，依次包括如下步骤：ａ．将紫草种子废渣、水、氯化铜、氯化锌、氯化钙按重量比为１∶１．８～２．２∶０．０３～０．０４∶０．０２５～０．０３∶０．０００９～０．００１的比例混合并浸泡２４～３２小时； ｂ．提取上清液；ｃ．热变上清液；ｄ．用大超滤器过滤上清液得滤液（１）；ｅ．在滤液（１）中加入酶保活剂后用小超滤器过滤；ｆ．用赛氏过滤器加压过滤；ｇ．冻干过滤液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王锁春，
申请(专利权)人：大连长青珍稀植物研究所，大连北方药物研究所，王锁春，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]