氨的定量方法、定量试剂、定量试剂盒、测试片和氨定量装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及氨的定量方法、定量试剂、定量试剂盒、测试片和氨定量装置。具体而言，本发明专利技术涉及一种氨的定量方法，所述方法包括：进行第一反应，其中含氨的测试液与三磷酸腺苷和L‑谷氨酸在谷氨酰胺合成酶的存在下反应以产生磷酸；进行第二反应，其中产生的磷酸与丙酮酸在丙酮酸氧化酶的存在下反应；和测定由所述第二反应消耗或产生的组分，以将氨定量，其中不进行由丙酮酸激酶介导的由二磷酸腺苷产生三磷酸腺苷的反应。

Quantitative methods for ammonia, quantitative reagents, quantitative kits, test tablets and ammonia quantitative devices

The invention relates to the quantitative method, quantitative reagent, quantitative reagent box, test piece and ammonia quantitative device for ammonia. Specifically, the invention relates to a method for quantitative analysis of ammonia, the method comprises the following steps: the first reaction, the ammonia containing the test liquid and ATP and L glutamate glutamine synthetase in the presence of the reaction to produce phosphoric acid; second, the phosphate and pyruvate produced pyruvate oxidase reaction in the presence of; and measured by the second reaction consume or produce components to ammonia quantitatively, which does not by pyruvate kinase mediated by adenosine monophosphate produces ATP response two.

【技术实现步骤摘要】
氨的定量方法、定量试剂、定量试剂盒、测试片和氨定量装置
本专利技术涉及氨的定量方法、定量试剂、定量试剂盒、测试片和氨定量装置。
技术介绍
氨定量方法的已知实例包括化学测定方法和酶测定方法。主要使用的化学测定方法是靛酚方法。酶测定方法的实例包括使用谷氨酸脱氢酶的方法，以及使用谷氨酰胺合成酶、氨基甲酸酯激酶和/或氨基甲酰磷酸合成酶等的方法。已提出的使用谷氨酰胺合成酶的酶测定方法的实例包括以下方法，其中使谷氨酸合成酶在氨、三磷酸腺苷(ATP)和L-谷氨酸的存在下起作用，并使激酶对产生的ADP和激酶底物磷化合物起作用，然后将产生的激酶反应产物定量以将氨定量(参见例如专利文献1)。更具体地，专利文献1公开了通过以下四步反应将氨定量的方法。(1)使谷氨酰胺合成酶在氨、ATP和L-谷氨酸的存在下起作用以产生L-谷氨酰胺、二磷酸腺苷(ADP)和磷酸。(2)使丙酮酸激酶在产生的ADP和磷酸烯醇丙酮酸的存在下起作用以产生ATP和丙酮酸。(3)使丙酮酸氧化酶在产生的丙酮酸、产生的磷酸和氧的存在下起作用以产生乙酰磷酸、二氧化碳和过氧化氢。(4)使过氧化物酶在产生的过氧化氢、酚和4-氨基安替比林的存在下起作用以产生醌色素。基于500nm吸光度的增加水平，将氨定量。现有技术文献[专利文献][专利文献1]日本专利申请特开(JP-A)号S62-3800
技术实现思路
本专利技术要解决的问题在专利文献1描述的氨的定量方法中，通过如上所述的四步反应将氨定量。在存在大量反应途径的情况下，需要大量的试剂，这是有问题的。由于专利文献1描述的氨的定量方法中使用昂贵的磷酸烯醇丙酮酸，所以测定成本高，这是有问题的。因此，需要一种廉价且简单地将氨定量的方法。本专利技术的目的是提供能够廉价且简单地将氨定量的氨的定量方法、定量试剂、定量试剂盒、测试片和氨定量装置。问题的解决手段更具体而言，所述目的可通过以下手段实现。<1>本专利技术的一个实施方式是氨的定量方法，所述方法包括：进行第一反应，其中含氨的测试液与三磷酸腺苷和L-谷氨酸在谷氨酰胺合成酶的存在下反应以产生磷酸；进行第二反应，其中产生的磷酸与丙酮酸在丙酮酸氧化酶的存在下反应；和测定由所述第二反应消耗或产生的组分，以将氨定量，其中不进行由丙酮酸激酶介导的由二磷酸腺苷产生三磷酸腺苷的反应。<2>本专利技术的一个实施方式是如<1>所述的氨的定量方法，其中所述第一反应还包括镁离子(Mg2+)或锰离子(Mn2+)中的至少一种作为催化剂以产生磷酸。<3>本专利技术的一个实施方式是如<1>或<2>所述的氨的定量方法，其中所述第二反应还包括存在作为辅酶的焦磷酸硫胺素和黄素腺嘌呤核苷酸。<4>本专利技术的一个实施方式是如<1>至<3>中任一项所述的氨的定量方法，其中所述第二反应产生过氧化氢，并且所述测定步骤包括测定产生的过氧化氢。<5>本专利技术的一个实施方式是如<4>所述的氨的定量方法，其中所述测定产生的过氧化氢的步骤包括进行显色反应或电化学反应。<6>本专利技术的一个实施方式是一种定量试剂，其包含丙酮酸、三磷酸腺苷、L-谷氨酸和酶，其中所述酶由谷氨酰胺合成酶和丙酮酸氧化酶组成。<7>本专利技术的一个实施方式是一种定量试剂盒，其包含：含有氢供体的第一试剂；和含有偶联剂的第二试剂，其中丙酮酸、三磷酸腺苷、L-谷氨酸、谷氨酰胺合成酶、丙酮酸氧化酶和过氧化物酶分别独立地包含在所述第一试剂或所述第二试剂的至少一个中，并且其中所述第一试剂和所述第二试剂中的酶仅由谷氨酰胺合成酶、丙酮酸氧化酶、过氧化物酶或其任意组合组成。<8>本专利技术的一个实施方式是一种测试片，其包含丙酮酸、三磷酸腺苷、L-谷氨酸和酶，其中所述酶由谷氨酰胺合成酶和丙酮酸氧化酶组成。<9>本专利技术的一个实施方式是一种氨定量装置，进行第一反应，其中含氨的测试液与三磷酸腺苷和L-谷氨酸在谷氨酰胺合成酶的存在下反应以产生磷酸；进行第二反应，其中产生的磷酸与丙酮酸在丙酮酸氧化酶的存在下反应；和测定由所述第二反应消耗或产生的组分，以将氨定量，其中不进行由丙酮酸激酶介导的由二磷酸腺苷产生三磷酸腺苷的反应。<10>本专利技术的一个实施方式是一种氨定量装置，其包含：反应部，在其中设置含有氨、丙酮酸、三磷酸腺苷、L-谷氨酸、谷氨酰胺合成酶和丙酮酸氧化酶的测试对象，其中，在所述测试对象中，作为第一反应，氨与三磷酸腺苷和L-谷氨酸在谷氨酰胺合成酶的存在下反应以产生磷酸，并且作为第二反应，产生的磷酸与丙酮酸在丙酮酸氧化酶的存在下反应；和测定部，在其中测定于所述反应部中消耗或产生的组分，其中在所述反应部中不进行由丙酮酸激酶介导的由二磷酸腺苷产生三磷酸腺苷的反应。<11>本专利技术的一个实施方式是如<10>所述的氨定量装置，其中：所述测试对象还含有过氧化物酶、氢供体和偶联剂；在所述反应部中：所述第二反应产生过氧化氢，并且作为第三反应，产生的过氧化氢与所述氢供体和所述偶联剂在所述过氧化物酶的存在下反应以产生色素；并且在所述测定部中，测定于所述反应部中产生的色素。根据本专利技术的一个实施方式，可以提供能够廉价且简单地将氨定量的氨的定量方法、定量试剂、定量试剂盒、测试片和氨定量装置。附图说明图1是示出实施例1中氨的量与560nm吸光度的增加量之间关系的图。图2是示出实施例2中氨的浓度与K/S值之间关系的图。图3是说明本专利技术一个实施方式的定量装置100的示意性构造图。具体实施方式下面描述作为本专利技术的一个实施方式的氨的定量方法、定量试剂、定量试剂盒、测试片和氨定量装置。在本说明书中，使用“从...至...”表示的各数值范围分别意指包括“至”前后描述的值作为下限和上限的范围。在本说明书中，“含氨的测试液”意指含有氨或铵离子中的至少一种的测试液，而“氨浓度”和“氨的量”分别意指氨和铵离子的总浓度和总量。在本说明书中，L-谷氨酸、磷酸、丙酮酸和乙酰磷酸可以是盐。[氨的定量方法]本专利技术的一个实施方式是氨的定量方法，所述方法包括：进行第一反应，其中含氨的测试液与三磷酸腺苷(ATP)和L-谷氨酸在谷氨酰胺合成酶的存在下反应以产生磷酸；进行第二反应，其中产生的磷酸与丙酮酸在丙酮酸氧化酶的存在下反应；和测定由所述第二反应消耗或产生的组分，其中不进行由丙酮酸激酶介导的由二磷酸腺苷(ADP)产生三磷酸腺苷的反应。在本实施方式的定量方法中，可通过测定经两步反应消耗或产生的组分来将测试液中所含的氨(氨和铵离子的总计)定量，所述两步反应包括由谷氨酰胺合成酶介导的反应(第一反应)和由丙酮酸氧化酶介导的反应(第二反应)。在氨定量的常规已知方法中，除了由谷氨酰胺合成酶介导的反应和由丙酮酸氧化酶介导的反应之外，还进行由丙酮酸激酶介导的反应。因此，通过包含至少三个步骤的反应将测试液中所本文档来自技高网...

【技术保护点】
氨的定量方法，所述方法包括：进行第一反应，其中含氨的测试液与三磷酸腺苷和L‑谷氨酸在谷氨酰胺合成酶的存在下反应以产生磷酸；进行第二反应，其中产生的磷酸与丙酮酸在丙酮酸氧化酶的存在下反应；和测定由所述第二反应消耗或产生的组分，以将氨定量，其中不进行由丙酮酸激酶介导的由二磷酸腺苷产生三磷酸腺苷的反应。

【技术特征摘要】
2016.08.05 JP 2016-154872;2017.06.15 JP 2017-118041.氨的定量方法，所述方法包括：进行第一反应，其中含氨的测试液与三磷酸腺苷和L-谷氨酸在谷氨酰胺合成酶的存在下反应以产生磷酸；进行第二反应，其中产生的磷酸与丙酮酸在丙酮酸氧化酶的存在下反应；和测定由所述第二反应消耗或产生的组分，以将氨定量，其中不进行由丙酮酸激酶介导的由二磷酸腺苷产生三磷酸腺苷的反应。2.如权利要求1所述的氨的定量方法，其中所述第一反应还包括镁离子(Mg2+)或锰离子(Mn2+)中的至少一种作为催化剂以产生磷酸。3.如权利要求1或2所述的氨的定量方法，其中所述第二反应还包括存在作为辅酶的焦磷酸硫胺素和黄素腺嘌呤核苷酸。4.如权利要求1或2所述的氨的定量方法，其中所述第二反应产生过氧化氢，并且所述测定步骤包括测定产生的过氧化氢。5.如权利要求4所述的氨的定量方法，其中所述测定产生的过氧化氢的步骤包括进行显色反应或电化学反应。6.一种定量试剂，其包含丙酮酸、三磷酸腺苷、L-谷氨酸和酶，其中所述酶由谷氨酰胺合成酶和丙酮酸氧化酶组成。7.一种定量试剂盒，其包含：...

【专利技术属性】
技术研发人员：胜木幸治，船本武宏，村上正树，
申请(专利权)人：爱科来株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP