仔猪大肠杆菌K88ac-ST1-LTB三价基因工程菌苗及制备方法技术

仔猪大肠杆菌Ｋ８８ａｃ－ＳＴ↓［１］－ＬＴ↓［Ｂ］三价基因工程菌苗及制备方法，其特征是采用聚合酶链反应和基因突变技术，从大肠杆菌Ｃ８３９０２质粒中扩增出Ｋ８８ａｃ、ＳＴ↓［１］和ＬＴ↓［Ｂ］基因，通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化，构建了含Ｋ８８ａｃ－ＳＴ↓［１］－ＬＴ↓［Ｂ］融合基因表达载体的基因工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＫＳＴ３ＬＴ５），该菌株表达的有效抗原成份在菌体内部，能达到缓慢连续释放的作用，且解决了ＳＴ↓［１］的抗原性难题，克服了目前市场上使用的大肠杆菌菌苗的缺点，从而达到更有效地预防由产肠毒素性大肠杆菌引起的仔猪黄、白痢的目的。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用于预防仔猪大肠杆菌腹泻的Ｋ８８ａｃ－ＳＴ↓［１］－ＬＴ↓［Ｂ］三价基因工程菌苗，其特征是基因工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＫＳＴ３ＬＴ５）：１）受体菌为大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）２）重组表达质粒ｐＸＫＳＴ３ＬＴ５－Ｏｒｉ －－Ｐ↓［Ｔ７］－－Ｋ８８ａｃ ｇｅｎｅ－－ＳＴ↓［１］－ＳＴ↓［１］－ＳＴ↓［１］ ｇｅｎｅ－－ＬＴ↓［Ｂ］ ｇｅｎｅ－－Ｋａｎ ｇｅｎｅ－它含有大肠杆菌复制子Ｏｒｉ，Ｐ↓［Ｔ７］是Ｔ７ ＲＮＡ聚合酶／启动子表达系统，受体菌ＢＬ２１（ ＤＥ３），外源目的基因为Ｋ８８ａｃ、ＳＴ↓［１］和ＬＴ↓［Ｂ］基因，抗性筛选基因为卡那霉素Ｋａｎ基因；Ｋ８８ａｃ保护性抗原基因是Ｋ８８ａｃ全基因的第２５０位至第５７９位，该基因表达的抗原包含了Ｋ８８ａｃ全抗原的绝大部分抗原决定簇；ＳＴ↓［１］基因为３′端含有２个编码半胱氨酸残基Ｃｙｓ的ＴＧＴ被突变成编码丝氨酸残基Ｓｅｒ的ＡＧＴ的突变基因，串联在一起的３个ＳＴ↓［１］突变基因所表达的ＳＴ↓［１］突变肠毒素已失去了ＳＴ↓［１］肠毒素本身的生物学毒性；ＬＴ↓［Ｂ］抗原基因为具有良好的抗原性的全基因，基因工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＫＳＴ３ＬＴ５）表达的有效抗原Ｋ８８ａｃ－ＳＴ↓［１］－ＬＴ↓［Ｂ］融合蛋白以包含体形式存在于菌体内部，且Ｋ８８ａｃ和ＬＴ↓［Ｂ］在保留原有抗原性基础上，赋予了原本不具有抗原性的ＳＴ↓［１］具有了抗原性。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：卫广森，许崇波，
申请(专利权)人：卫广森，许崇波，
类型：发明
国别省市：21[中国|辽宁]