嵌合的免疫原性组合物及其编码核酸制造技术

本发明专利技术提供新的编码嵌合多肽的嵌合核酸，体外和体内表达这些多肽的构建体，分离的嵌合多肽，药物组合物和制备和使用这些组合物的方法。这些组合物和方法特别有用于刺激或增强选择的抗原的免疫原性或者刺激或增强对该抗原特异性的细胞免疫应答。本发明专利技术的核酸包括包括热激蛋白（ＨＳＰ）的羧基末端片段，Ｆｌｔ－３配体（ＦＬ），假单孢杆菌外毒素Ａ（ＥＴＡｄＩＩ）的胞质转运结构域，或者粒细胞—巨噬细胞—集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）序列的第一多肽结构域，和包括抗原性多肽的第二多肽结构域。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一般地涉及免疫学和药物。本专利技术提供了使用嵌合分子，包括热激蛋白(HSP)，Flt-3配体(FL)，或者假单孢杆菌属外毒素A(Pseudomonas exotoxin A)的胞质转运结构域(cytoplasmic translocationdomain)(ETA dII)，和抗原性多肽，例如与肿瘤相关的抗原或者病原体衍生的抗原以便增强抗原-特异性免疫应答，例如细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答的组合物和方法。因此，本专利技术的一个实施方案涉及DNA疫苗。背景抗原特异性免疫治疗最近成为控制癌症的一个途径，因为它能够产生抗致瘤细胞的特异免疫性而不攻击正常细胞。DNA接种不同于传统接种之处在于编码抗原的DNA(不是抗原本身)被注射给受治者。抗原的产生，即疫苗中DNA编码的抗原的表达，在接种的个体的体内发生。但是，传统的DNA疫苗具有局限性。例如，大多数DNA疫苗的主要缺点是它们的效价。概述本专利技术提供编码一种嵌合多肽的核酸，所述嵌合多肽包括包括热激蛋白(HSP)的羧基末端片段，Flt-3配体(FL)，假单孢杆菌属外毒素A的胞质转运结构域(ETA dII)，或者粒细胞-巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)序列的第一多肽结构域，和包括抗原性多肽的第二多肽结构域。该嵌合核酸的融合蛋白产物也可以具有几个结构域，包括HSP结构域的羧基末端片段，FL结构域，ETA dII结构域，或者GM-CSF结构域以任何顺序的任何组合。也可以加上其它结构域，例如为了有助于纯化所述融合蛋白或者原位鉴定所述多肽等等的结构域。在可供选择的实施方案中，编码第一多肽结构域的核酸是5′端连接编码第二多肽结构域的核酸，和，编码第二多肽结构域的核酸是5′端连接编码第一多肽结构域的核酸。因此，这种嵌合核酸的融合蛋白产物可以具有或者氨基末端或者羧基末端与第一多肽结构域连接的抗原性多肽；各个结构域的任何顺序都是可接受的，即使所述嵌合核酸编码两个以上的结构域。在一个实施方案中，热激蛋白(HSP)的羧基末端片段具有陪伴蛋白活性，例如肽陪伴蛋白活性。热激蛋白(HSP)(或者其核酸编码序列)可以来自任何生物体，包括，例如，人或细菌HSP。HSP可以包括热激蛋白70(HSP 70)，例如来自分枝杆菌属，例如人结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)的HSP70。所述热激蛋白(HSP)可以包括SEQ ID NO9的残基312-625所示的序列，或者SEQ ID NO9的大约残基517至大约残基625给出的序列，或者其功能等价物。在可供选择的实施方案中，Flt-3配体多肽(或者其核酸编码序列)来自任何生物体，包括，例如，人或细菌。Flt-3配体多肽可以包括SEQ ID NO25的大约残基1至大约残基189给出的序列。在可供选择的实施方案中，胞质转运结构域(或者其核酸编码序列)来自任何生物体，包括，例如，人或细菌。胞质转运结构域可以来自毒素，例如来自细菌，例如，假单孢杆菌属的毒素，例如假单孢杆菌属外毒素A(ETA dII)，例如包括SEQ ID NO3的大约残基247至大约残基417给出的序列的ETA dII。假单孢杆菌属外毒素A(ETA dII)的胞质转运结构域也可以包括SEQ ID NO3的大约残基253至大约残基364给出的序列。在可供选择的实施方案中，GM-CSF序列(或者其核酸编码序列)来自任何生物体，包括，例如，人或细菌。所述GM-CSF序列可以是GM-CSF片段，例如含有二硫键的片段。GM-CSF片段可以包括SEQ ID NO1的大约残基18至大约残基22，或者大约残基34至大约残基41，或者大约残基38至大约残基48，或者大约残基52至大约残基61，或者大约残基94至大约残基115，或者大约残基95至大约残基111给出的序列。在一个实施方案中，抗原性多肽包括I类MHC-结合肽表位。所述I类MHC-结合肽表位的长可以是大约8个氨基酸残基至大约11个，或者大约15个，或者大约25个，或者大约50个氨基酸残基之间。抗原性多肽可以来自任何病原体或微生物。在可供选择的实施方案中，抗原性多肽来自病毒，例如人病毒，例如，人乳多空病毒。所述乳多空病毒可以是人乳头瘤病毒(HPV)，例如人乳头瘤病毒-16(HPV-16)。所述抗原性多肽可以包括人乳头瘤病毒E6多肽或者人乳头瘤病毒E7多肽。所述病毒也可以是慢病毒，例如人免疫缺陷型病毒(HIV)，例如HIV-1。所述抗原性多肽来自其中的其它病原体包括疟疾，牛病毒性腹泻病毒，巨细胞病毒，脑炎病毒，肝炎病毒，单纯疱疹病毒或者流感病毒，这些只是其中的几种。抗原性多肽也可以是肿瘤特异性或者与肿瘤相关的多肽。所述肿瘤特异性或者与肿瘤相关的多肽可以包括在肿瘤细胞表面上表达的抗原。所述肿瘤特异性或者与肿瘤相关的多肽可以是突变体p53，MAGE-1或者MAGE-3。在一个实施方按中，所述核酸编码进一步包括包括胞质转运多肽结构域(cytoplasmic translocation polypeptide domain)的第三多肽结构域的嵌合多肽。因此，本专利技术提供编码一种嵌合多肽的核酸，所述嵌合多肽包括包括热激蛋白(HSP)的羧基末端片段，Flt-3配体(FL)，假单孢杆菌属外毒素A(ETA dII)的胞质转运结构域，或者粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)序列(或者其任何组合)的第一多肽结构域，和包括抗原性多肽的第二多肽结构域，和包括胞质转运多肽结构域的第三多肽结构域。如上所述，这些结构域可以以任何顺序存在于嵌合核酸或者多肽中。胞质转运多肽结构域可以来自任何来源，例如，人，细菌等等。胞质转运多肽结构域可以包括假单孢杆菌属外毒素A(ETA)的胞质转运结构域。假单孢杆菌属外毒素A(ETA)的胞质转运结构域可以包括SEQ IDNO3的大约残基253至大约残基364给出的序列。胞质转运多肽结构域可以包括病原体毒素的胞质转运结构域，所述毒素例如细菌毒素，例如，来自白喉(Diptheria)，梭状芽孢杆菌属，Botulinum，芽孢杆菌属，耶尔森氏菌属，霍乱弧菌(Vibrio cholerae)，或者百日咳博德特氏杆菌(Bordetella pertussis)。编码第三多肽结构域的核酸位于编码第一或者第二结构域的核酸5′端，或者位于编码第一或者第二结构域的核酸之间，或者位于编码第一或者第二结构域的核酸的3′端。所述核酸可以进一步包括调控核酸序列，例如转录(例如启动子或者增强子)或者翻译调控序列。本专利技术提供一种表达盒(例如质粒，载体，病毒)，其包括本专利技术的嵌合核酸，包括例如编码一种嵌合多肽的核酸，所述嵌合多肽包括包括热激蛋白(HSP)的羧基末端片段，Flt-3配体(FL)，或假单孢杆菌属外毒素A(ETA dII)的胞质转运结构域的第一多肽结构域；和包括抗原性多肽的第二多肽结构域。所述表达盒至少包括启动子和编码序列。所述启动子可以是组成型的，可诱导型的，组织特异性的，等等。所述表达盒还可以包括胞质转运结构域的编码序列。所述表达盒还可以包括自主复制RNA复制子，例如Sindbis病毒自主复制RNA载体，例如，自主复制RNA载体SINrep5。本专利技术提供了包括编码一种嵌合多肽的核酸的转化细胞，所述嵌合多肽包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种编码嵌合多肽的核酸，所述嵌合多肽包括：第一多肽结构域，包括热激蛋白（ＨＳＰ）的羧基末端片段，Ｆｌｔ－３配体（ＦＬ），假单孢杆菌属外毒素Ａ的胞质转运结构域（ＥＴＡ ｄⅡ），或者粒细胞－巨噬细胞－集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）序列，和 第二多肽结构域，包括抗原性多肽。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：吴泽柱，黄建富，
申请(专利权)人：约翰霍普金斯大学医学院，
类型：发明
国别省市：US[美国]