【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种构建并筛选生态安全型重组根瘤菌的方法，其特征包括如下步骤：（１）根瘤菌必需基因突变株的筛选：以费氏中华根瘤菌为出发菌，采用定位诱变将发光酶标记基因ｌｕｘＡＢ插入ｐｕｒＬ基因后克隆到不能在根瘤菌细胞内复制的自杀质粒上，经转化导入根 瘤菌株后从野生型出发菌中筛选获得稳定的嘌呤合成酶基因缺陷的ＰｕｒＬ↑［－］突变株；（２）必需基因ｐｕｒＬ结构基因的克隆：根据已报道的ｐｕｒＬ基因的编码区５’和３’端序列再加上与拟用克隆载体的克隆位点相适合的限制性内切酶位点设计并合成 出一对引物，从供试菌基因组中扩增出ｐｕｒＬ基因的结构基因，经与同样双酶切并能在根瘤菌和大肠杆菌细胞内均能复制的穿梭载体连接后转化大肠杆菌，筛选获得含有ｐｕｒＬ结构基因重组质粒的转化子，从中分离出以ｐｕｒＬ基因为报告基因的启动子探针载体； （３）诱导表达ｐｕｒＬ基因的克隆：根据费氏中华根瘤菌共生条件下诱导表达的ｆｉｘＫ基因启动子区的ＤＮＡ序列、ｐｕｒＬ结构基因和穿梭载体的要求设计并人工合成出含有相应双酶切位点的诱导型启动子序列，用于与经同样双酶切的（２）步骤中所构建的启动 子探针载体连接，...
【技术特征摘要】
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