一种用于检测肿瘤抗原的蛋白芯片试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及肿瘤抗原水平检测领域，特别涉及一种用于检测肿瘤抗原的蛋白芯片试剂盒及其检测方法。一种用于检测肿瘤抗原的蛋白芯片试剂盒，包括抗体一以及显示所述抗体一的物质，和/或抗体二以及显示所述抗体二的物质；抗体一的抗原为TKTL1，抗体二的抗原为DNASE1L1；蛋白芯片试剂盒还包括带有醛基修饰的载玻片。本发明专利技术采用蛋白芯片技术针对血液中的TKTL1(转酮酶‑样1)和DNASE1L1(脱氧核糖核酸酶1‑样1)进行检测，只需要使用微量的样品，在较短的时间内，就可以得到所需的数据，同时灵敏度和可靠性更好，操作更为简单。

A protein chip kit for detection of tumor antigen and its detection method

The present invention relates to the field of detection of tumor antigen level, in particular to a protein chip kit for detecting tumor antigen and its detection method. A protein chip kit for the detection of tumor antigens, including antibody and display the antibody substances and / or antibody two and display the material two antibody; antigen antibody for a TKTL1 antigen antibody for two DNASE1L1 slides; protein chip kit also includes aldehyde modified. The invention adopts the protein chip technology for TKTL1 in the blood (transketolase 1) and DNASE1L1 (1 deoxyribonuclease 1) were detected, only need to use small samples, in a relatively short period of time, you can get the required data at the same time, the sensitivity and reliability of the operation is more better simple.

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测肿瘤抗原的蛋白芯片试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及肿瘤抗原水平检测领域，具体而言，涉及一种用于检测肿瘤抗原的蛋白芯片试剂盒及其检测方法。
技术介绍
单核/巨噬细胞是人类免疫系统细胞的重要组成部分。人类外周血细胞可以主要分为无核细胞(主要为血红细胞)和有核细胞(白细胞等)。单核细胞约占有核细胞总数的5％左右，由髓系造血祖细胞分化而来，是免疫系统中抗原递呈细胞(APC细胞)的重要组分。其在人体循环系统内成熟分化并实现免疫学功能可以大致分为以下步骤：毛细血管中的单核细胞→透过血管壁进入血管外组织→发现异源性物质(细菌、病原体、肿瘤细胞等)，分化为成熟的巨噬细胞→吞噬并消化，将抗原递呈到特定的细胞表面分子上→经由淋巴管回流到外周血→完成抗原递呈激活杀伤性免疫细胞。作为机体抗击外来病原侵袭和清楚自身非正常细胞机制的哨兵，巨噬细胞是免疫系统形成免疫应答的重要环节，作用重大。在正常人体内每时每刻都有向着肿瘤化(永生化、非正常凋亡)发展的细胞产生，正常的机体免疫机制可以通过上述过程，将其及时清除。但随着肿瘤细胞的演化，生成了躲避免疫杀伤的机制，或者机体总体免疫力的下降，形成免疫逃逸，最终在患者体内形成肿瘤包块。由此可见无论健康人群还是癌症患者体内巨噬细胞对于肿瘤化细胞的吞噬作用，都是无时无刻不在进行的。针对单核/巨噬细胞内肿瘤来源物质(包括蛋白质、核算、脂类等)的观测，可以为我们提供一个监控体内肿瘤发生、发展的崭新视角，其应用前景必然非常广泛。单核/巨噬细胞作为有核细胞的重要组分，现有技术一般是通过其表面抗原分子CD14和CD16进行检测的，目前可以买到成熟的抗体。主要的临床应用集中在血细胞组成检测和造血系统肿瘤(如：粒/单核细胞性白血病)方面的检测中，为临床诊断提供重要参考。就目前专利和文献检索来看，将肿瘤抗原与实体肿瘤的监控联系还有待进一步研究。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种用于检测肿瘤抗原的蛋白芯片试剂盒，该试剂盒采用蛋白芯片技术针对血液中的TKTL1(转酮酶-样1)和DNASE1L1(脱氧核糖核酸酶1-样1)进行检测，进而获知血液中肿瘤抗原的水平。本专利技术的第二目的在于提供一种肿瘤抗原的检测方法，该方法采用蛋白芯片技术进行检测，只需要使用微量的样品，在较短的时间内，就可以得到所需的数据，同时灵敏度和可靠性更好，操作更为简单。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种用于检测肿瘤抗原的蛋白芯片试剂盒，包括抗体一以及显示所述抗体一的物质，和/或抗体二以及显示所述抗体二的物质；所述抗体一的抗原为TKTL1，所述抗体二的抗原为DNASE1L1；所述蛋白芯片试剂盒还包括带有醛基修饰的载玻片。肿瘤细胞与正常体细胞的差异，最主要在两个方面：1.物质代谢：肿瘤细胞由于其增殖快并且不受正常细胞周期调控，往往表现出对能量物质(葡萄糖等)的饥渴式的需求，但由于其代谢机制的变异，物质代谢特别是能量代谢效率往往远低于正常体细胞，例如，不能对葡萄糖进行完全有效的代谢利用，而是一种浪费式的消耗。而肿瘤细胞在此代谢过程中所需要的酶类物质，其表达量与正常体细胞也存在巨大的差异，可以将其作为肿瘤细胞检测的突破点。2.细胞凋亡：肿瘤细胞区别于正常体细胞的另一个特点就是永生化，肿瘤细胞是不受正常细胞周期调控的。细胞凋亡机制已经有了较为清晰的研究，肿瘤细胞不凋亡，那必然导致调控细胞凋亡或者在细胞凋亡过程中起到关键作用的因子、信号物质或者酶的表达量出现明显异常，这同样可以作为肿瘤细胞检测的突破点。TKTL1(转酮酶-样1)和DNASE1L1(脱氧核糖核酸酶1-样1)分别对应于以上两点，其在巨噬细胞内的降解产物是本专利技术检测技术的两个目标被检物，简要介绍如下：TKTL1：主要调节糖代谢途径中的非氧化途径，在多种肿瘤中高表达，其表达量与肿瘤的发展阶段、侵袭和转移以及预后有密切关系。对肿瘤患者的营养搭配及后续的治疗等方面有着重要的提示作用。DNASE1L1：在细胞凋亡过程中起重要作用，但在肿瘤细胞中，正常的凋亡机制失效，DNASE1L1活性受到抑制，但其大量表达并在肿瘤细胞中积累。其表达量可作为鉴别肿瘤细胞或凋亡机制异常细胞的指标。本专利技术针对TKTL1和DNASE1L1采用蛋白芯片技术进行检测，来判断血液中肿瘤抗原的水平。进一步地，所述显示所述抗体一的物质为标记在所述抗体一上的荧光标记，所述显示所述抗体二的物质为标记在所述抗体二上的荧光标记；或者所述抗体一为两种不同种属来源的抗体一，所述显示所述抗体一的物质为带有荧光标记的并与任一种抗体一配对的二抗；所述抗体二为两种不同种属来源的抗体二，所述显示所述抗体二的物质为带有荧光标记的并与任一种抗体二配对的二抗。其中，抗体一的二抗和抗体二的二抗可以为相同也可以为不同。进一步地，抗体一为anti-TKTL1，所述抗体二为anti-DNASE1L1。anti-TKTL1与anti-DNASE1L1为市售产品，这两种抗体可以产自各种动物，如常用的小鼠、大鼠、兔子、猴子等等。如anti-TKTL1可以购买自sigma，货号HPA000505，rabbitpolyclonal；anti-DNASE1L1可以购买自sigma，货号HPA072635，rabbitpolyclonal；相应地，二抗可以为购买自abcam驴抗兔的PE多克隆抗体，其货号为ab7007。如上述的一样，本专利技术中也可以省略掉二抗，这通过将anti-TKTL1和anti-DNASE1L1进行荧光标记实现。进一步地，所述蛋白芯片试剂盒还包括裂解液A、裂解液B、封闭液、细胞洗涤缓冲液中的任意一种或几种；所述裂解液A含有以下浓度的各成分：10±0.5mMTris-HCl(pH7.4-7.6)、10±0.5mMNaH2PO4、130±5mMNaCl、1％±0.05％TritonX-100以及10±0.5mMNa4P2O7；所述裂解液B含有以下浓度的各成分：150±5mMNaCl、0.1％±0.005％TritonX-100、1±0.05mMEDTA、20±0.1mMHEPES以及10％±0.5％甘油；所述封闭液为含有体积百分数为0.8％-1.2％BSA的PBS。进一步地，所述荧光标记为PE、CY5、CY7、per-CP以及TRITC中的任一种。荧光标记是为了定量相应的抗体的含量。本专利技术还提供了一种肿瘤抗原的检测方法，采用上述的蛋白芯片试剂盒检测血液中的白细胞裂解物中的TKTL1和DNASE1L1来获知肿瘤抗原的信息。该方法采用蛋白芯片技术进行检测，只需要使用微量的样品，在较短的时间内，就可以得到所需的数据，同时灵敏度和可靠性更好，操作更为简单。进一步地，所述白细胞裂解物通过以下方法制备：取血液样品，采用所述的裂解液A裂解红细胞，去除除白细胞外的所有成分；得到的白细胞采用所述的裂解液B进行裂解，得到白细胞裂解物。本专利技术通过将血液样品的红细胞裂解，进而去除除白细胞外的所有成分，得到白细胞，此处所述的去除除白细胞外的所有成分也只是尽量去除。得到的白细胞裂解得到待测物。白细胞可以吞噬肿瘤细胞，通过对血液中的白细胞裂解物进行特异性检测，增加检测的准确性和特异性。优选地，所述裂解液A与所述血液样品的体积比为15-20:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测肿瘤抗原的蛋白芯片试剂盒，其特征在于，包括抗体一以及显示所述抗体一的物质，和/或抗体二以及显示所述抗体二的物质；所述抗体一的抗原为TKTL1，所述抗体二的抗原为DNASE1L1；所述蛋白芯片试剂盒还包括带有醛基修饰的载玻片。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测肿瘤抗原的蛋白芯片试剂盒，其特征在于，包括抗体一以及显示所述抗体一的物质，和/或抗体二以及显示所述抗体二的物质；所述抗体一的抗原为TKTL1，所述抗体二的抗原为DNASE1L1；所述蛋白芯片试剂盒还包括带有醛基修饰的载玻片。2.根据权利要求1所述的蛋白芯片试剂盒，其特征在于，所述显示所述抗体一的物质为标记在所述抗体一上的荧光标记，所述显示所述抗体二的物质为标记在所述抗体二上的荧光标记；或者所述抗体一为两种不同种属来源的抗体一，所述显示所述抗体一的物质为带有荧光标记的并与任一种抗体一配对的二抗；所述抗体二为两种不同种属来源的抗体二，所述显示所述抗体二的物质为带有荧光标记的并与任一种抗体二配对的二抗；优选地，抗体一为anti-TKTL1，所述抗体二为anti-DNASE1L1。3.根据权利要求1所述的蛋白芯片试剂盒，其特征在于，所述蛋白芯片试剂盒还包括裂解液A、裂解液B、封闭液、细胞洗涤缓冲液中的任意一种或几种；所述裂解液A含有以下浓度的各成分：10±0.5mMTris-HCl(pH7.4-7.6)、10±0.5mMNaH2PO4、130±5mMNaCl、1％±0.05％TritonX-100以及10±0.5mMNa4P2O7；所述裂解液B含有以下浓度的各成分：150±5mMNaCl、0.1％±0.005％TritonX-100、1±0.05mMEDTA、20±0.1mMHEPES以及10％±0.5％甘油；所述封闭液为含有体积百分数为0.8％-1.2％BSA的PBS。4.根据权利要求1-3任一项所述的蛋白芯片试剂盒，其特征在于，所述荧光标记为PE、CY5、CY7、per-CP以及TRITC中的任一种。5.一种肿瘤抗原的检测方法，其特征在于，采用权利要求1-4任一项所述的蛋白芯片试剂盒检测血液中的白细胞裂解物中的TKTL1和DNASE1L...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭驰，杜朝阳，张小俊，
申请(专利权)人：北京金沐医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11