碳水化合物和多元醇用于溶解蛋白晶体制造技术

本发明专利技术涉及一种从培养液中回收目的蛋白的方法，包括：在回收过程中，向培养液中加入一种分子式为Ｃ↓［ｎ］Ｈ↓［２ｎ＋２］Ｏ↓［ｎ］的多元醇，其中ｎ为４－８，和／或一种碳水化合物，和／或其衍生物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种避免在回收过程中形成蛋白结晶/非晶形(amorphous)沉淀的方法。
技术介绍
在发酵过程中，一些蛋白的产量超过了它的溶解度限制，也就是说，它们在培养液中以部分沉淀的形式存在。这种沉淀可以是结晶形的，也可以是非晶形沉淀。虽然，在发酵过程中，一些蛋白的产量低于它的溶解度限制，但是，由于在回收过程中，需要对目的蛋白进行浓缩，而使得其浓度超过了它的溶解度限制，因此很可能形成部分蛋白结晶。此外，为了在下游过程中节约用水以及满足消费者对高浓度产品的需求，人们都倾向于使用较高浓度的酶溶液处理。因此，需要格外注意使蛋白保持在溶液中或使已经沉淀的蛋白重新溶解在溶液中，否则蛋白的回收产量将会降低。本专利技术的目的就是提供一种简单而有效的方案来解决上述问题。专利技术简述本专利技术惊奇地发现，在回收过程中，通过向培养液中加入碳水化合物和/或多元醇和/或其衍生物可以提高蛋白的有效溶解性，进而简单而又有效地阻止培养液中蛋白沉淀或蛋白结晶的形成。本专利技术还提供了一种简单而有效地溶解蛋白沉淀或结晶的方法。本专利技术特别要求一种从培养液中回收目的蛋白的方法，包括在回收过程中，向培养液中加入一种分子式为CnH2n+2On的多元醇，其中n为4-8，和/或一种碳水化合物，和/或其衍生物；以及一种从培养液中回收目的蛋白的方法，包括使目的蛋白在超过其溶解度限制时仍然存在于溶液中的回收步骤，包括通过先于该回收步骤或在该步骤结束后立即向培养液中加入一种碳水化合物，和/或一种多元醇和/或其衍生物。专利技术详述本专利技术涉及一种新的、非常有效的避免或降低形成蛋白结晶或沉淀的方法。本专利技术惊奇地发现，在回收过程中，通过向培养液中加入碳水化合物和/或多元醇和/或其衍生物可以降低蛋白结晶/沉淀，进而有效地阻止了培养液中蛋白结晶/沉淀的形成。可以采用一种更为简单的回收方法来提高蛋白产量，在该方法中避免了回收过程中蛋白结晶/沉淀的形成。在本专利技术的优选实施方案中，应用上述方法进行酶的回收，特别是水解酶(按照生物化学国际命名委员会推荐的酶的命名法，属于EC 3类)。在特别优选实施方案中，优选采用下述水解酶蛋白酶合适的蛋白酶包括动物、植物或微生物来源的蛋白酶，优选微生物来源的蛋白酶，还包括了经过化学修饰或蛋白工程(包括取代、插入，和/或缺失)产生的蛋白酶突变体。蛋白酶可以是酸性蛋白酶、丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶，优选碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶类蛋白酶。碱性蛋白酶的实例可以是枯草杆菌蛋白酶，特别是那些来源于杆菌属(Bacillus)的蛋白酶，例如枯草杆菌蛋白酶Novo，枯草杆菌蛋白酶Carlsberg，枯草杆菌蛋白酶309，枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168(描述于WO 89/06279)。胰蛋白酶类蛋白酶的实例可以是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属(Fusarium)蛋白酶，描述于WO 89/06270和WO 94/25583。有用的蛋白酶的实例是描述于WO 92/19729，WO 98/20115，WO98/20116和WO 98/34946中的变异体，特别是在位置27，36，57，76，87，97，101，104，120，123，167，170，194，206，218，222，224，235和274处发生一个或多个位点取代的变异体。优选的商业蛋白酶包括AlcalaseTM，SavinaseTM，PrimaseTM，DuralaseTM，EsperaseTM，RelaseTM和KannaseTM(Novozymes A/S)，MaxataseTM，MaxacalTM，MaxapemTM，ProperaseTM，PurafectTM，Purafect OxPTM，FN2TM和FN3TM(Genencor国际公司)。脂酶合适的脂酶包括细菌或真菌来源的脂酶，也包括了经过化学修饰或蛋白工程(包括取代、插入，和/或缺失)产生的脂酶突变体。可以采用的脂酶有来源于腐质霉属(Humicola)(与Thermomyces同义)的脂酶，例如描述于EP 258 068和EP 305 216的来源于H.Lanuginosa(T.Lanuginosus)的脂酶或描述于WO 96/13580的来源于H.insolens的脂酶；假单胞菌属(Pseudomonas)脂酶，例如来源于P.alcaligenes或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)的脂酶(EP 218 272)，来源于葱头假单胞菌(P.cepacia)的脂酶(EP 331 376)，来源于司徒茨氏假单胞菌(P.stutzeri)的脂酶(GB 1,372,034)，来源于荧光假单胞菌(P.fluorescens)，假单胞菌菌株(Pseudomonas sp.)株系的SD 705(WO 95/06720和WO 96/27002)，来源于P.wisconsinensis的脂酶(WO 96/12012)；杆菌属脂酶，例如来源于枯草芽孢杆菌(B.subtilis)的脂酶(Dartois等，1993，Biochemica et Biophysica Acta，1131，253-360)，来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)(JP 64/744992)或短小芽孢杆菌(B.pumilus)的脂酶(WO 91/16422)。其它实例还可以采用描述于WO 92/05249，WO 94/01 541，EP 407 225，EP 260 105，WO 95/35381，WO 96/00292，WO 95/30744，WO 94/25578，WO 95/14783，WO 95/22615，WO 97/04079和WO 97/07202中的脂酶的变异体。优选的商业脂酶包括LipolaseTM，Lipolase UltraTM和LipexTM(NovozymesA/S)。淀粉酶合适的淀粉酶(α和/或β-淀粉酶)包括细菌或真菌来源的淀粉酶，也包括了经过化学修饰或蛋白工程(包括取代、插入，和/或缺失)产生的淀粉酶突变体。淀粉酶包括了，例如详细描述于GB 1,296,839的来源于杆菌属，如来源于地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)特殊株系的α-淀粉酶。可以采用的淀粉酶实例有描述于WO 94/02597，WO 94/18314，WO96/23873和WO 97/43424的变异体，特别是在位置15，23，105，106，124，128，133，154，156，181，188，190，197，202，208，209，243，264，304，305，391，408和444处发生一个或多个位点取代的变异体。商业淀粉酶有DuramylTM，TermamylTM，FungamylTM，NatalaseTM，Termamyl LCTM，Termamyl SCTM，Liquizyme-XTM和BANTM(Novozymes A/S)，RapidaseTM和PurastarTM(Genencor国际公司)。纤维素酶合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的纤维素酶，也包括了经过化学修饰或蛋白工程(包括取代、插入，和/或缺失)产生的突变体。合适的纤维素酶包括了来源于芽孢杆菌属、假单胞菌属(Pseudomonas)、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从培养液中回收目的蛋白的方法，包括：在回收过程中，向培养液中加入一种式为Ｃ↓［ｎ］Ｈ↓［２ｎ＋２］Ｏ↓［ｎ］的多元醇，其中ｎ为４－８，和／或一种碳水化合物，和／或其衍生物。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯文德卡斯加尔德，基肖尔拉尼，迈克尔赫斯，小托马斯钱伯斯，
申请(专利权)人：诺维信公司，诺维信北美公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]