人源化抗-LT-β-R抗体制造技术

本发明专利技术提供了抗ＬＴ－β－Ｒ的人源化抗体以及它们的应用方法。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术主要涉及特异性针对淋巴毒素β受体(LT-β-R)的人源化抗体。
技术介绍
淋巴毒素β受体(本文称为LT-β-R)是肿瘤坏死因子家族的一员，已知其在免疫系统的发育、以及包括滤泡树突状细胞在内的免疫系统多种细胞和多种基质细胞的功能维持方面发挥作用(Matsumoto等，Immunol.Rev.156137(1997)。LT-β-R的已知配体包括LTα1/β2以及另一种称为LIGHT的配体(Mauri等Immunity 821(1998))。有文献表明，LT-β-R的活化包括一些癌细胞系的体内凋亡性死亡(PCT/US96/01386)。用激动型LT-β-R激活剂，如特异性人源化抗LT-β-R抗体进行的治疗，将因此可用于治疗或减缓受试者(如，人)中瘤形成(neoplasia)的进展、严重程度或影响。专利技术简述本专利技术提供了人源化抗淋巴毒素β受体(LT-β-R)的抗体以及应用这些抗体治疗或缓解受试者(如，人)中瘤形成的进展、严重程度或影响的方法。具体地，本专利技术涉及特异性结合LT-β-R(如人LT-β-R)的人源化抗体。这种抗体包含由SEQ ID NO1中氨基酸残基24-34，50-56和89-97所限定的轻链互补决定区，和/或由SEQ ID NO2中氨基酸残基31-35，50-66和99-109限定的重链互补决定区，并且在其轻链中包含下列的至少1种(例如，1，2，3，4，或5种)残基K3，W41，I46，Q69和Y71；或在其重链中包含下列至少1种(例如1，2，3，4，或5种)残基F37，T40，A49，M89和V93(按照Kabat编号原则进行编号)。本专利技术的人源化抗体可包含由SEQ ID NO8的氨基酸残基1-107所限定的轻链可变区序列和/或由SEQ ID NO16的氨基酸残基1-120所限定的重链可变区序列。所述人源化抗体还可包含与由细胞系E46.4(ATCC专利保藏物PTA-3357)或细胞系E77.4(ATCC专利保藏物3765)产生的抗体相同的重链和/或轻链多肽序列。在另一实施方案中，本专利技术的人源化抗体充分保留了亲本抗体的结合特性。在一个实施方案中，本专利技术的人源化抗体以一定的功能性亲和力与LT-β-R结合，所述亲和力是，例如，约1pM-约10pM，或者，约10pM-约20pM，或者，约20pM-约30pM，或者，约30pM-约40pM，或者，约40pM-约50pM，或者，约50pM-约60pM，或者，约60pM-约70pM，或者，约70pM-约80pM，以及，或者，约80pM-约90pM，所述功能性亲和力按照实施例8所述用FACS进行测定。在另一实施方案中，本专利技术的人源化抗体与免疫毒素(例如，蓖麻毒蛋白A链和假单胞菌毒素)相连。本专利技术的人源化抗体还可与化疗药物(例如，阿霉素(Adriamycin)，5FU，长春花碱，放线菌素D，依托泊苷(Etoposide)，顺铂(Cisplatin)，氨甲蝶呤和阿霉素(Doxorubicin))或与放射性同位素相连。本专利技术还涉及一种联合疗法，其中例如，本专利技术的与免疫毒素相连的人源化抗体和本专利技术的与化疗药物相连的人源化抗体联合使用。本专利技术还涉及一种适于对哺乳动物(即人)给药的组合物，所述哺乳动物具有过度表达LTβR的肿瘤，所述组合物包含a)人源化抗LTβR抗体，单独或与免疫毒素或与化疗药物相连，和b)细胞毒因子，每种均以通过对哺乳动物给药而有效减小肿瘤体积的量存在。细胞毒因子可以包含例如，TNF-α，TNF-β，IL-1，INF-γ，IL-2。或者，细胞毒因子可以是一种化疗药物。该化疗药物可以包含例如，阿霉素，5FU，长春花碱，放线菌素D，依托泊苷，顺铂，氨甲蝶呤和阿霉素。本专利技术的抗体可以是，例如，任何同种型和亚型的完整抗体(即具有两条全长轻链和两条全长重链)(例如IgM，IgD，IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgE，IgA1和IgA2)；或者，它可以是完整抗体的抗原结合片段(例如，Fab，F(ab’)2，和Fv)。本专利技术涉及的还有，一种组合物，该组合物包含可药用载体；一种分离的核酸，该核酸包含编码SEQ ID NO8的序列；一种分离的核酸，该核酸包含编码SEQ IDNO16的序列；一种分离的核酸，该核酸包含编码抗体轻链的序列，该抗体由细胞系E46.4(ATCC专利保藏物PTA-3357)或细胞系E77.4(ATCC专利保藏物3765)产生；一种分离的核酸，该核酸包含编码抗体重链的序列，该抗体由细胞系E46.4(ATCC专利保藏物PTA-3357)或细胞系E77.4(ATCC专利保藏物3765)产生；一种分离的核酸，该核酸包含编码SEQ ID NO8的1-107残基的序列；和一种分离的核酸，该核酸包含编码SEQ ID NO16的1-120残基的序列。本专利技术中涉及的还有，产生人源化抗LTβR抗体的细胞系的细胞，所述细胞系包括，例如，细胞系E46.4(ATCC专利保藏物PTA-3357)和细胞系E77.4 (ATCC专利保藏物3765)。在一个实施方案中，所述细胞系产生约250mg/L-约300mg/L所述抗体，或者，所述细胞系产生约300mg/L-约350mg/L所述抗体，或者，所述细胞系产生约350mg/L-约400mg/L所述抗体，或者，所述细胞系产生约400mg/L-约450mg/L所述抗体，或者，所述细胞系产生约450mg/L-约500mg/L所述抗体，或者，所述细胞系产生约500mg/L-约550 mg/L所述抗体，或者，所述细胞系产生约550mg/L-约600mg/L所述抗体。所述细胞系产生的抗体的浓度可以是补料分批培养10天后所测定的收获物的滴度。本专利技术还提供了一种治疗或缓解受试者(例如，人)中瘤形成的进展、严重程度或影响的方法，该方法包括以有效量的本专利技术抗体对受试者给药。组合物的有效量可以以一或多剂量给药。在另一实施方案中，本专利技术提供了一种治疗或缓解受试者(例如，人)中瘤形成的进展、严重程度或影响的方法，该方法包括以有效量的本专利技术抗体和细胞毒素因子对受试者给药。细胞毒素因子可包括例如，TNF-α，TNF-β，IL-1，INF-γ，IL-2。或者，细胞毒素因子可以是化疗药物。化疗药物可包括例如，阿霉素，5FU，长春花碱，放线菌素D，依托泊苷，顺铂，氨甲蝶呤和阿霉素。附图说明图1显示对于WiDr细胞的细胞毒活性。mCBE11(鼠)(钻石形)，huCBE11#2(人源化抗LT-β-R抗体，含第二种轻链(VL#2)和第二种重链(VH#2))(圆形)，huCBE11#4(人源化抗LT-β-R抗体，含第三种轻链(VL#3)和第四种重链(VH#4))(星形)。图2显示IL-8对A375细胞的激动作用(agonism)。mCBE11(钻石形)，huCBE11#2(人源化抗LT-β-R抗体，含第二种轻链(VL#2)和第二种重链(VH#2))(圆形)，huCBE11#4(人源化抗LT-β-R抗体，含第三种轻链(VL#3)和第四种重链(VH#4))(星形)。图3显示肿瘤体积相对于给药天数。mCBE11(三角形)，huCBE11#4(人源化抗LT-β-R抗体，含第三种轻链(VL#3)和第四种重链(VH#4))(圆形)，未经治疗(方形)。图4本文档来自技高网...

【技术保护点】
人源化抗淋巴毒素β受体（ＬＴ－β－Ｒ）的抗体，其轻链互补决定区由ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１中氨基酸残基２４－３４，５０－５６和８９－９７限定，其重链互补决定区由ＳＥＱ　　ＩＤ　　　ＮＯ：２中氨基酸残基３１－３５，５０－６６和９９－１０９限定，并且该抗体在其轻链中包含下列的至少１种残基：Ｋ３，Ｗ４１，Ｉ４６，Ｑ６９和Ｙ７１；或在其重链中包含下列的至少１种残基：Ｆ３７，Ｔ４０，Ａ４９，Ｍ８９和Ｖ９３（按照Ｋａｂａｔ编号原则进行编号）。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：埃伦加伯，保罗莱恩，乔斯W塞尔丹哈，
申请(专利权)人：比奥根公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]