本发明专利技术提供一种实验动物,该实验动物承载使用毛乳头细胞和表皮细胞、相对于这些细胞的外源黑素细胞重建的毛囊。这样的实验动物可用于评价对生毛和毛色的深浅产生影响的因素。(*该技术在2022年保护过期,可自由使用*)
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及承载毛囊重建系统的实验动物、制备该系统的细胞系以及该系统的应用。
技术介绍
可使针对特定目的的动物反应稳定再现的多种多样的嵌合动物或转基因动物主要是作为特定疾病的模型、或者为了阐明特定疾病的病因而开发的。例如为了测定毛发的重建,开发了一起移植了毛芽(作为特殊的角质形成细胞簇存在于新生幼小鼠皮肤中的毛囊前身细胞)和毛发诱生性毛乳头细胞(来自大鼠的须毛)的裸鼠(Lichti等,J.InvestDermatol 101124-129,1993)。在移植了来自新生幼小鼠毛芽的培养角质形成细胞和毛乳头细胞的小鼠中,通过对其移植区域的组织学分析,检测出完全组织化了的上皮以及毛囊的重建(Kamimura等,J.Invest Dermatol 109534-540,1997)。显示所述重建毛囊可用于对体内诱生毛发可信性的功能性测定。另一方面,与诱生毛发可以相提并论的有毛色。多数情况下,毛色被视为由黑素导致,该黑素由存在于毛母质附近的黑素细胞产生、再转运到形成毛的细胞中。变成白发的主要原因可能是上述黑素细胞不再产生黑素,或即使产生黑素也只是极少量,或者黑素细胞减少甚至消失。但是,考虑到毛发周期,经过过渡期(毛生长停止,毛囊缩短以及形成杵状毛)和休止期,毛囊中剧减或消失的黑素细胞在下一个生长期如何补充并恢复毛色(来自哪里)等问题尚未明确。因此,提供评价恢复毛色的手段,换言之,提供对某种特定的手段能否发挥防止白发或抗白发作用的体内评价系统,这是有价值的。本专利技术的目的就在于提供所述评价系统。本说明书中所述“抗白发性”或“抗白发作用”是可对例如以选自促进黑素细胞生长、促进游走能力、促进分化能力、增进生存能力、黑素产生能力等中的一种以上活性来评价的白发化进行抑制的特性,是通过毛色显示这些活性的性质。专利技术的公开本专利技术人为了实现上述目的进行了研究,证实上述毛囊得到重建,并发现所述重建的毛囊加入同种或不同种任意的外源黑素细胞都可重建,且这样重建的毛囊的黑素细胞可保持活性状态。从而,本专利技术提供用于重建毛囊的系统,所述毛囊由毛乳头细胞和表皮细胞、以及相对于这些细胞的外源黑素细胞组合构成。本专利技术的一个实施形式可提供将上述系统移植到受体动物,使其承载上述重建毛囊的嵌合动物。本专利技术的另一个实施形式还提供某种特定手段活化黑素细胞的能力进行评价的方法,其特征在于以上述嵌合动物为受试动物,将该受试动物用某种特定手段处理,监测这样处理过的受试动物重建毛囊中黑素细胞的活性,将相对于未经处理的对象的该活性变化程度与该手段活化黑素细胞的能力之间建立相关关系。附图简述附图说明图1是显示例II-2中制备的嵌合小鼠的背部状态的照片,以该照片作为附图。图中的数字分别表示试验编号。图2表示在例III的几种因子作用下,本专利技术的嵌合小鼠的再生毛中黑素含量变化的图表。实施专利技术的最佳形式本说明书中,“毛乳头细胞(真皮乳头dermal papillae)”(以下可称为DP)只要遵循本专利技术的目的,可作为表示包含毛囊最下部的毛乳头细胞及其周围的细胞和组织的广泛概念的细胞使用。这样的组织有含有毛乳头细胞的真皮。以来自小鼠的细胞为例,将多能聚糖启动子的下游连接适当的报道基因(例如LacZ基因、绿色荧光蛋白(GFP)的结构基因)构成表达载体,导入小鼠,生成转基因小鼠(Ver-LacZ),该转基因小鼠生出的新生幼小鼠(在出生后4天以内使用)中,以报道基因的表达为标志可获得上述细胞。另外按照常规方法从皮肤中获得的真皮通常含有毛乳头细胞,因此含有毛乳头细胞的真皮可直接作为本专利技术的毛乳头细胞使用。但并不局限于此。而“表皮细胞”是构成皮肤的表皮或上皮的大部分的细胞,由邻接真皮的一层基底细胞产生。以小鼠为例,所述表皮细胞可优选使用来自新生幼鼠(或胎鼠)的表皮细胞,也可以是角质形成细胞形式的细胞培养物。所述细胞可以按照公知的方法由所需供体动物的皮肤制备。上述毛乳头细胞或含毛乳头细胞的真皮细胞和表皮细胞只要可移植到受体动物上即可,无关供体动物的种类,均可使用,但优选来自与受体动物同种的动物。受体动物为小鼠时,上述两种细胞可以均来自小鼠,也可来自不相同的小鼠系,对此并无特别限定。因此,毛乳头细胞或含有毛乳头细胞的真皮细胞可以由容易确认的上述任意的转基因小鼠(Ver-LacZ系统)中获得,而表皮细胞可使用从例如选自具白化病(具有酪氨酸酶遗传性缺陷)性质的ICR系和黑素细胞缺损系(例如Wsh/Wsh小鼠)的小鼠中获得的细胞。根据本专利技术,由于使用来自所述具白化或黑素细胞缺损性的动物的表皮细胞,可更容易地监测后述的外源黑素细胞的动向,因而优选。另外,上述转基因小鼠也可以是来自选自ICR系和黑素细胞缺损系的小鼠。本说明书的“外源黑素细胞”中的“外源”是指来源与毛乳头细胞或表皮细胞的来源不同。因此,黑素细胞不仅包含来自与毛乳头细胞或表皮细胞的来源不同的不同种动物的细胞,还包含即使是同种同系,但来自与采集毛乳头细胞或表皮细胞的个体不同的个体的细胞。这意味着,即使毛乳头细胞或表皮细胞制备物中混有原有的黑素细胞,在该黑素细胞以外追加的黑素细胞必须包含在目标系中。但是,毛乳头细胞或表皮细胞来自小鼠时,黑素细胞优选小鼠以外的动物,例如来自人,但并不局限于此。使用上述优选的组合,则可以在重建毛囊中无关黑素细胞的分化状态而追踪黑素细胞的分布(例如使用抗人黑素细胞抗体或人的特异性抗体或人的特异性基因序列或人黑素细胞的特异性基因序列)。本专利技术的特征在于在由毛乳头细胞(小鼠)、表皮细胞(小鼠)和黑素细胞(人)构成的所谓嵌合重建毛囊中,黑素细胞可保持其活性(例如黑素产生活性)。另外,本专利技术还具备的特征是在后述的评价方法中,可对可作用于人黑素细胞的手段进行研究。本专利技术中可使用的黑素细胞只要是遵循本专利技术的目的,具有黑色素产生能力即可,可以是来自任意种的动物,但如上所述,为了发挥上述特征,优选来自人的黑素细胞。黑素细胞可以按照公知的方法从适当的组织例如表皮、包皮等中制备。还可以使用市售的商品细胞。例如来自人的培养黑素细胞可以从Cascade公司或kurabo公司购入NHEM细胞。如上所述,上述毛乳头细胞和表皮细胞优选来自与受体动物同种的动物,可达到本专利技术目的的所述动物具体有小鼠、大鼠。本专利技术的“用于重建毛囊的系统”由上述毛乳头细胞和表皮细胞以及外源黑素细胞组合构成。所述“组合构成的……系统”不仅指含有全套上述各细胞的情况,也包含以今后成套使用为目的、各细胞分别保存的情况,例如分别装入不同容器的形式。因此只要是为了重建上述系统的目的而使用,均在本专利技术的范围内。另外,“重建毛囊”是指在受体动物中,可作为支持生毛或育毛的器官发挥作用的重建毛囊(或嵌合毛囊)。这样的器官包含毛乳头细胞、毛母细胞、毛囊上皮类细胞·组织(例如根鞘)、脂腺、包被毛囊的结缔组织等。本专利技术可提供将上述系统移植到适当的受体动物时承载重建毛囊的嵌合动物。由于所述嵌合动物的毛囊内具有活性的(优选来自不同种动物)的黑素细胞,因此可用于对影响黑素细胞的机能或黑素细胞的活性的手段(包括药物和环境等)进行评价。受体动物的来源并不局限于移植到该动物的系统中所含各细胞的来源,优选免疫系统受到抑制的动物。另外,只要是可用作实验动物的种,并遵循本专利技术的目的,可以是任何动本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于重建毛囊的系统,该系统由毛乳头细胞或含有毛乳头细胞的真皮细胞和表皮细胞、相对于这些细胞的外源黑素细胞的组合而构成。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员:出田立郎,常长诚,
申请(专利权)人:株式会社资生堂,
类型:发明
国别省市:JP[日本]
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