人肝癌转移亚克隆细胞系及其建立方法技术

本发明专利技术公开了一种人肝癌转移亚克隆细胞系及其建立方法，所述人肝癌转移亚克隆细胞系是用下述方法建立的：将人肝癌细胞Ｈ７４０２单细胞悬液接种于ＳＣＩＤ鼠；确认转移部位为肺脏；原代培养；传代培养，当细胞传代到第三代以后，将培养液中的胎牛血清浓度降为１０％，细胞生长良好，形态逐渐均一，即建立了一种来源于亲本人肝癌细胞Ｈ７４０２的肝癌转移亚克隆细胞系，并与亲本细胞形成配对关系，为肝癌细胞转移的研究提供新的实验材料；可用于筛选肝癌转移相关基因；可用于筛选肝癌转移相关蛋白；可用于筛选抗肿瘤转移药物；可用于肿瘤转移分子机理的研究；可用于进行肿瘤转移ＤＮＡ疫苗的研究。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种人肝癌转移亚克隆细胞系，其特征是所述人肝癌转移亚克隆细胞系与亲本细胞系Ｈ７４０２形成配对关系，所述人肝癌转移亚克隆细胞系是用下述方法建立的：　　　　（１）接种ＳＣＩＤ鼠：将对数生长期的人肝癌细胞Ｈ７４０２单细胞悬液，细胞数量为１～４Ｘ１０↑［７］／０．２ｍｌ接种于经Ｃｓ↑［１３７］γ射线照射过的ＳＣＩＤ鼠腋背部皮下；　　　　（２）确认转移部位：将荷瘤ＳＣＩＤ鼠处死，对各个组织的病理切片进行显微镜下观察，确定其转移部位为肺脏；　　　　（３）原代培养：在接种人肝癌细胞Ｈ７４０２后５５－６７天，将荷瘤ＳＣＩＤ鼠处死，无菌解剖，取出肺脏，进行原代培养，方法如下：用ｐＨ７．２的Ｄ－Ｈａｎｋｓ生理缓冲液漂洗组织块３次，去除血液、脂肪、神经组织、结缔组织和坏死组织；将肺组织剪切成０．５－１．５ｍｍ↑［３］小块；接种细胞培养瓶中，使瓶底向上，在３７℃孵箱内，空气中含体积百分比为５％的ＣＯ↓［２］条件下培养；２－４小时后，向培养瓶内加入８－１０ｍｌ内含２０％胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养液，静置培养，原代培养每３天换液一次，待从组织块生长出大量的贴壁细胞，去除已漂浮的组织块和残留的血细胞；　　　　（４）传代培养：将去掉组织的细胞进行细胞传代培养，具体步骤如下：移去原代培养的培养瓶内的细胞培养液，向培养瓶中加入２ｍｌ质量体积百分比为０．２５％胰蛋白酶溶液，置３７℃孵箱中２－３分钟，观察到细胞出现回缩、细胞间隙增大，吸除胰蛋白酶溶液，加入８－１０ｍｌ内含２０％胎牛血清ＲＰＭＩ１６４０培养液，使之形成细胞悬液，计数，接种于新的培养瓶，当细胞传代到第三代时，加入的ＲＰＭＩ１６４０培养液内含胎牛血清为１０％，细胞生长良好，形态逐渐均一，即建立了一种来源于亲本人肝癌细胞Ｈ７４０２的肝癌转移亚克隆细胞系。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：叶丽虹，张晓东，秦宵然，朱惠芳，王洪辉，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]