用生物技术合成的一种乙型干扰素ＩＦＮ－β－ｃｎ，其特征在于含有如下碱基序列和氨基酸序列，其中第４７位氨基酸的密码子的第一个碱基是Ａ： ａｔｇ ａｇｃ ｔａｃ ａａｃ ｔｔｇ ｃｔｔ ｇｇａ ｔｔｃ ｃｔａ ｃａａ ａｇａ ａｇｃ ａｇｃ ａａｔ ｔｔｔ ｃａｇ ４８ Ｍｅｔ ｓｅｒ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｇｌｎ １ ５ １０ １５ ｔｇｔ ｃａｇ ａａｇ ｃｔｃ ｃｔｇ ｔｇｇ ｃａａ ｔｔｇ ａａｔ ｇｇｇ ａｇｇ ｃｔｔ ｇａａ ｔａｃ ｔｇｃ ｃｔｃ ９６ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｌｅｕ ２０ ２５ ３０ ａａｇ ｇａｃ ａｇｇ ａｔｇ ａａｃ ｔｔｔ ｇａｃ ａｔｃ ｃｃｔ ｇａｇ ｇａｇ ａｔｔ ａａｇ ｃａｇ ａｔｇ ｃａｇ １４４ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｎ ３５ ４０ ４５ ｃａｇ ｔｔｃ ｃａｇ ａａｇ ｇａｇ ｇａｃ ｇｃｃ ｇｃａ ｔｔｇ ａｃｃ ａｔｃ ｔａｔ ｇａｃ ａｔｇ ｃｔｃ ｃａｇ １９２ Ｇｌｎ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｎ ５０ ５５ ６０ ａａｃ ａｔｃ ｔｔｔ ｇｃｔ ａｔｔ ｔｔｃ ａｇａ ｃａａ ｇａｔ ｔｃａ ｔｃｔ ａｇｃ ａｃｔ ｇｇｃ ｔｇｇ ａａｔ ２４０ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｒｐ Ａｓｎ ６５ ７０ ７５ ８０ ｇａｇ ａｃｔ ａｔｔ ｇｔｔ ｇａｇ ａａｃ ｃｔｃ ｃｔｇ ｇｃｔ ａａｇ ｇｔｃ ｔａｔ ｃａｔ ｃａｇ ａｔａ ａａｃ ２８８ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ａｓｎ ８５ ９０ ９５ ｃａｔ ｃｔｇ ａａｇ ａｃａ ｇｔｃ ｃｔｇ ｇａａ ｇａａ ａａａ ｃｔｇ ｇａｇ ａａａ ｇａａ ｇａｔ ｔｔｃ ａｃｃ ３６６ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｈｒ １００ １０５ １１０ ａｇｇ ｇｇａ ａａａ ｃｔｃ ａｔｇ ａｇｃ ａｇｔ ｃｔｇ ｃａｃ ｃｔｇ ａａａ ａｇａ ｔａｔ ｔａｔ ｇｇｇ ａｇｇ ３８４ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ａｒｇ １１５ １２０ １２５ ａｔｔ ｃｔｇ ｃａｔ ｔａｃ ｃｔｇ ａａｇ ｇｃｃ ａａｇ ｇａｇ ｔａｃ ａｇｔ ｃａｃ ｔｇｔ ｇｃｃ ｔｇｇ ａｃｃ ４３２ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｔｈｒ １３０ １３５ １４０ ａｔａ ｇｔｃ ａｇａ ｇｔｇ ｇａａ ａｔｃ ｃｔａ ａｇｇ ａａｃ ｔｔｔ ｔａｃ ｔｔｃ ａｔｔ ａａｃ ａｇａ ｃｔｔ ４８０ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｌｅｕ １４５ １５０ １５５ １６０ ａｃａ ｇａｔ ｔａｃ ｃｔｃ ｃｇａ ａａｃ ｔｇａ ５０１ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｎ １６５。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于一种用基因工程技术生产的人IFN-β-cn干扰素蛋白及其突变体。
技术介绍
在急性病毒感染过程中，机体有不同的防御机制，包括细胞免疫、体液免疫以及干扰素系统、发热等非特异性因子。但干扰素系统是目前所知的机体防御反应中出现最早的，在感染的几小时内就起作用，所以称其为第一线防御系统。大多数病毒或多或少地都对干扰素的抗病毒作用敏感，因而干扰素的抗病毒作用是广谱的。当干扰素系统在急性病毒感染时被激活后，动物可以在1～3周时间内对其他病毒的重复感染有抵抗。保护性抗体比干扰素的出现要晚得多，一般在病毒感染发生后3天或更迟些时间出现于血清中，它是特异性地由病毒抗原所引起的，它也特异性地对相关抗原起作用。抗体通过与病毒结合使其转变为非感染性而发挥抗病毒作用。但是，由于抗体仅在血清和细胞外液中存在，故它对在细胞内繁殖的病毒作用不大(Samuel C.，Clinical Microbiology Review，2001，14778-809)。干扰素不是直接与靶分子发挥作用，而首先要与靶细胞表面的特异性受体相结合，通过信号传递，引发一系列特定的生化反应，刺激细胞内多种效应蛋白质分子合成。其中某些新合成的蛋白质可以抑制病毒繁殖，从而发挥干扰素的功能。这些杀病毒蛋白包括RnaseL、PKR，MxProtein、ISG56、ADAR1/2、P200家族和RANTES。而其它新合成的蛋白质可以提高机体免疫能力。它们包括MHC I/II、Interleukin-15和iNOS(Grandvaux N，et.al.，Current Opinion in Infectious Disease，2002，15259-267)。干扰素是一种糖蛋白。目前所知，人的干扰素主要有α、β、γ、ω、г五个型号。其中，α、β、γ三种型号为主要的干扰素，因此，科学家对它们研究较多(Michael D.，BioTechniques，2001，33S58-S65)。一般认为，两种主要的病毒干扰素，即IFN-α和IFN-β，利用相同的信号传递网络，引发一系列特定的生化反应，刺激细胞合成相同效应分子来对抗病毒。但是，近期研究结果显示，IFN-α和β的信号传递网络和所诱导的效应分子也不完全相同。IFN-β的抗病毒功能经过多年的研究已经得到证实(Samuel C.，Clinical Microbiology Review，2001，14778-809)。如果将老鼠体内的IFN-β基因切除，这样的老鼠就对病毒失去抵抗力量，尽管体内的所有IFN-α基因都正常。因此，IFN-β是机体防御病毒的必需部分，它的功能是IFN-α所无法取代的(Deonarain R，et.al.，J.Virology，2000，743404-3409)。其它研究也证明，IFN-α和IFN-β是干扰素防御系统中重要的组成部分，但它们功能和作用机制有区别。在用纤维肉瘤细胞所作的实验中，有20多个效应蛋白质分子只能由IFN-β，而不是IFN-α，刺激细胞合成(Der SD，et.al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1998，9515623-15628)。其中之一是PKR，一种激酶，它的功能是抑制病毒蛋白合成且导致病毒感染细胞自杀。另一个例子为HIF-1α，它属于转录因子，其功能是导致病毒感染细胞自杀。β-R1基因的表达也是由IFN-β控制的。它是一种趋化因子，其功能为调节体内免疫细胞的移动(Loetscher P，et.al.，J.Bio.Chem.，2001，2762986-2991)。在作用机制方面，IFN-β是通过受体α/βL传递信息的；而IFN-α主要是通过受体α/βS传递信息的(Platanias LC，et.al.，J.Bio.Chem.，1996，27123630-23633)。鉴于IFN-α和IFN-β的功能和作用机制有区别，且它们虽为防御病毒必需部分，但相互间又无法取代，这两个干扰素对不同的病毒有不同的敏感性。比如，美国USAMRIID(U.S.Army Medical Research Institute of InfectiousDiseases)发现IFN-β能抑制SARS病毒繁殖，而其它干扰素却不能。IFN-β已在临床上应用于下列几方面●治疗多发性硬化症，可以减少复发，延缓残废进程(美国FDA网页http//www.fda.gov/cber/products.htm)。●治疗病毒感染，包括丙型肝炎及相关肝癌(Alam J，CurrentOpinion in Biotechnology，1995，6688-691)。●治疗肿瘤，包括尖锐湿疣，脑癌和黑素瘤(Alam J，CurrentOpinion in Biotechnology，1995，6688-691)。人体基因具有人种差异性，即不同人种间其基因序列会有差异。这种差异在生物治疗上有重要意义，考虑到基因产品的生物活性，致免疫性及负作用，生物治疗最好用源自同种人种的基因产品，然而，在已有技术中尚无源自中国人的IFN-β基因的人工合成制品及其突变体，也未见与此相关的报道。
技术实现思路
本专利技术要解决至今尚无源自中国人的IFN-β基因的人工合成制品及其突变体，以致于在治疗相关疾病中存在治疗效果欠佳的问题，为此提供本专利技术的一种新的乙型干扰素IFN-β-cn及其突变体，本干扰素是用基因工程技术克隆了源自中国人的IFN-β基因，如此而命名为IFN-β-cn。本专利技术采用的技术方案其特殊之处在于其所含碱基序列及所推测的氨基酸序列为atg agc tac aac ttg ctt gga ttc cta caa aga agc agc aat ttt cag 48Met ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln1 5 10 15tgt cag aag ctc ctg tgg caa ttg aat ggg agg ctt gaa tac tgc ctc 96Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu20 25 30 aag gac agg atg aac ttt gac atc cct gag gag att aag cag atg cag 144Lys Asp Arg Met Ash Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Met Gln35 40 45cag ttc cag aag gag gac gcc gca ttg acc atc tat gac atg ctc cag 192Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln50 55 60aac atc ttt gct att ttc aga caa gat tca tct agc act ggc tgg aat 240Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Glu Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn6本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘美星，莫一平，
申请(专利权)人：浙江大学生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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