神经系统发育相关蛋白及其编码序列和用途技术方案

一种分离的多肽，其特征在于，该多肽选自下组：　　　　（ａ）具有ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２或３氨基酸序列的多肽；　　　　（ｂ）将ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２或３氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有促进ＰＣ－１２细胞形成突触的功能的由（ａ）衍生的多肽。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及新的编码人神经系统发育相关蛋白hOLF50的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。
技术介绍
分泌蛋白是一类功能非常重要的蛋白，在多细胞生物的生长、发育、细胞分化增殖、凋亡、细胞通讯、信号转导中发挥着重要作用。人体中分泌蛋白占人类蛋白质组的十分之一，它们参与了信号途径、血液凝固、免疫防御、癌症发生等多种过程，如消化酶、胞外基质与血浆中的很多主要因子，以及激素、神经肽、细胞因子等都是分泌蛋白。一些分泌蛋白具有潜在的临床应用价值，并已在实际上得到了广泛的应用，如生长激素、干扰素和白细胞介素等。分泌蛋白是由信号肽(signal peptide)介导，进入内质网，然后分泌到细胞外。蛋白质分子中的信号肽研究开始于20世纪60年代，这方面的工作是在研究分泌蛋白的基础上进行的，当时的研究旨在了解，在核糖体上合成的新生肽链是通过何种途径被分泌到细胞外的。德裔美国科学家布洛贝尔(G.Blobel)，因对蛋白质分子中信号肽的开创性研究，获得了1999年度诺贝尔生理学或医学奖。布洛贝尔的信号肽假说提出在一些新生肽链的N末端，有一段长度不等的肽段，通常由20～30个氨基酸残基组成。它们的存在，决定了含有这类肽段的新生肽链能被分泌到细胞外，而在已被分泌到细胞外的成熟蛋白质中，则不再含有这类肽段。含有这类肽段的肽链通常被些与细胞外相通的细胞器(包括内质网、高尔基体和溶酶体等)内的信号，因而也被称为信号肽。正在合成的新生肽链中的信号肽和信号肽识别颗粒(SRP)结合，然后SRP和其受体结合，以及核糖体和核糖体受体结合。当信号肽将新生肽链引导进入内质网腔内后，在信号肽酶复合物的作用下，已完成使命的信号肽被切除，被切除信号肽的肽链在内质网腔和高尔基体内，进一步经过各种类型的翻详后加工，包括肽链的折叠、一些残基的修饰(例如糖基化等)、前体的激活等，最终成为有特定结构和功能的蛋白质，并被定位到机体中的特定部位行使其功能。分泌蛋白唯一共有的最普遍的特征就是氨基端的信号肽，信号肽在各个蛋白中都不相同，但有一些较类似的性质。起始的甲硫氨酸后是一些多为亲水的带正电荷的残基，该区为n区，然后是7-15个残基的疏水区h区，该区富含亮氨酸、丙氨酸和缬氨酸，最后的c区包含信号肽蛋白酶的剪切位点。在剪切位点的-1和-3多倾向为丙氨酸或其他带短侧链的氨基酸，而在-4和-6位则为有助于剪切的脯氨酸。鉴于神经系统发育相关蛋白与某些细胞的正常发育相关，因此本领域迫切需要开发新的神经系统发育相关蛋白。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的人神经系统发育相关蛋白hOLF50蛋白以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的hOLF50多肽，它包含具有SEQID NO2或3氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽选自下组(a)具有SEQ ID NO2或3氨基酸序列的多肽；(b)将SEQ ID NO2或3氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有促进PC-12细胞形成突触的功能的由(a)衍生的多肽。更佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2或3氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性(a)编码上述人hOLF50多肽的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO2或3所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中286-1686位的核苷酸序列；(b)具有SEQ ID NO1中391-1686位的核苷酸序列；(c)具有SEQ IDNO1中1-2741位的核苷酸序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。在本专利技术的第四方面，提供了制备具有人hOLF50蛋白活性的多肽的方法，该方法包含(a)在适合表达人hOLF50蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有人hOLF50蛋白活性的多肽。在本专利技术的第五方面，提供了与上述的人hOLF50多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-2741个核苷酸。在本专利技术的第六方面，提供了模拟、促进、拮抗人hOLF50多肽活性的化合物，以及抑制人hOLF50多肽的表达的化合物。还提供了筛选和/或制备这些化合物的方法。较佳地，该化合物是人hOLF50多肽的编码序列或其片段的反义序列。在本专利技术的第七方面，提供了检测样品中是否存在hOLF50蛋白的方法，它包括将样品与hOLF50蛋白的特异性抗体接触，观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在hOLF50蛋白。在本专利技术的第八方面，提供了一种检测与人hOLF50多肽异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，该方法包括检测编码所述多肽的核酸序列中是否存在突变。在本专利技术的第九方面，提供了本专利技术多肽和编码序列的用途。尤其是本专利技术的的hOLF50蛋白可用于在体外和体内促进神经细胞的生长，还可用制备促进神经细胞生长的组合物。在本专利技术的第十方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本专利技术的人hOLF50多肽或其激动剂、拮抗剂以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗神经系统方面的病症。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明下列附图用于说明本专利技术的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本专利技术范围。图1A显示了本专利技术hOLF50基因的核苷酸(SEQ ID NO1)；其中基因全长为2741bp；编码区是286到1686。图1B显示了本专利技术的人hOLF50蛋白的全长氨基酸序列(SEQ ID NO2)。该蛋白全长为467个氨基酸，pI＝6.68，Mw＝54KDa。其中，信号肽为第1-35位(黑体区域)，去除了信号肽的成熟蛋白示于SEQ ID NO3。OLF结构域位于第210-460位(下划线区域)。N-糖基化位点用方框内标出，共有7个，位置分别是第85，169，270，289，376，413，455位。图2显示了对hOLF50进行PCR扩增的电泳图。图3显示了对hOLF50进行Western印迹的结果。图4显示了对hOLF50进行Northern印迹的结果。图5显示了hOLF50在CHO细胞中的表达结果，分子量约为60KDa。图6显示了hOLF50在大肠杆菌中的表达结果，GST-hOLF50的N端片段的融合蛋白的分子量约为60KDa。图7显示了hOLF50对神经细胞PC-12生长的促进作用，其中空白对照为不加入任何物质；阴性对照为加入CHO细胞培养液，hOLF50培养上清液为表达hOLF50的CHO的培养上清液。具体实施例方式本专利技术首次从人中分离出了一个神经系统发育相关蛋白-hOLF50蛋白，并证明了它本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曾令春，韩泽广，
申请(专利权)人：上海人类基因组研究中心，
类型：发明
国别省市：