玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱‑串联质谱检测方法。本发明专利技术首先以乙腈作为提取溶剂，采用优化后的QuEChERS法(萃取和净化步骤中的净化剂为PSA、C18和GCB共3种)提取玉米中的种菌唑，取得较高的加标回收率；然后采用超高效液相色谱‑串联质谱法(UPLC‑ESI

Mass spectrometric method for ultra high performance liquid chromatography myclobutanil residues in corn series

【技术实现步骤摘要】
玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法
本专利技术涉及一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，属于农药残留检测

技术介绍
种菌唑为日本吴羽化学公司于20世纪90年代初开发的新款三唑类杀菌剂，其杀菌谱较广，兼具内吸、保护及治疗作用，广泛用于控制水稻、玉米和其他作物的种子病害，对水稻恶苗病、胡麻斑病和稻瘟病具有较好的防治效果。种菌唑是角甾醇生物合成抑制剂，广谱系统杀菌剂，具有内吸传导和触杀保护活性的效果。其用量低、活性高，对单子叶和双子叶植物使用安全、高效，因此被大量的应用于玉米耕种中。虽然种菌唑在玉米收获前大部分被分解，但是仍有少量杀菌剂残留。我国未制定它的最大残留限量，欧盟规定种菌唑在玉米、棉花中的最大允许限量(MRL)值为0.01mg/kg。目前国内外报道的种菌唑分析方法不多，主要的分析方法有关于酒、牛奶等的高效液相色谱法(李岩,史娜,王胜翔.种菌唑原药的高效液相色谱分析方法研究[J].农药科学与管理,2010,31:37-39)和气相色谱-质谱联用法(Lazartiguesetal.Multiresiduemethodforthedeterminationof13pesticidesinthreeenvironmentalmatrices：water,sedimentsandfishmuscle[J].Talanta,2011,85(3):1500-7)，液相色谱-飞行时间质谱法(Amelinetal.IdentificationandDeterminationof492ContaminantsofDifferentClassesinFoodandFeedbyHigh-ResolutionMassSpectrometryUsingtheStandardAdditionMethod[J].JournalofAOACInternational2016，99:1600-1618)。但是至今有关于在玉米中进行种菌唑分析的方法未进行报道。玉米中种菌唑检测，首先要考虑的是怎么从玉米中提取种菌唑。在提取杀菌剂时既要考虑选择性，又要考虑灵敏性。近来，QuEChERS(快速，简易，净化，高效，安全)前处理方法在2003年已经被广泛应用到农药残留分析方法中，特别是蔬菜，水果、牛奶和水等的复杂基质中。QuEChERS方法用乙腈提取，用固相分散剂净化(乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)是常用的固相分散剂)，主要用来除去极性有机酸、极性颜料、糖类和脂肪酸。由于玉米中含有甘油三酯，还有糖类、纤维、氨基酸、无机盐、酸、脂溶性成分等复杂成分。它与蔬菜、水果的不同之处在于它含有油脂，而大部分的杀菌剂是脂溶性的，在去除油基质的同时也会将大部分的杀菌剂除掉，使得提取率大大降低。尽管在农药分析中高效的色谱仪器发展迅速，但是前处理仍然很重要。由于少量的杂质也能污染仪器，所以提取完后还要进行净化。如何对玉米中种菌唑进行有效的提取净化是当前要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术克服了上述现有技术的不足，提供了一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。本专利技术首先采用优化后的QuEChERS法(萃取和净化步骤中的净化剂为PSA、C18和GCB共3种)提取玉米中的种菌唑，取得较高的加标回收率；然后采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-ESI+-MS/MS)测定玉米中种菌唑，方法简便、灵敏、选择性高，可为农产品安全监测和环境行为评价提供科学的技术手段。本专利技术的技术方案为：一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征是，包括以下步骤：1)样品前处理以乙腈作为提取溶剂，采用QuEChERS法，以乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)、石墨化炭黑(GCB)、C18粉末作为净化剂进行净化；具体步骤如下：将鲜玉米粒粉碎、匀浆后，准确称取1.00g样品置于离心管中，加入5ml乙腈溶解样品；离心，取上清液加入PSA、GCB和C18充分混合；离心，取上清液过微孔滤膜，待测；PSA、C18和GCB的用量分别优选0.025、0.020和0.020g/mL。2)定性检测得到的待测液采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪进行定性和/或定量分析；所述超高效液相色谱仪器参数条件如下：色谱柱：AgilentZORBAXEclipsePlusC18色谱柱(50mm×2.1mm，1.8μm)；柱温：35℃，样品室温度20℃；进样体积：1.0μL；流动相A：0.2％甲酸水，流动相B：甲醇；流速：0.3mL/min，梯度洗脱，梯度洗脱程序如下表1所示：表1梯度洗脱质谱条件如下：电喷雾电离正离子模式，ESI+；毛细管电压：4KV；离子源温度：110℃；脱溶剂气温度：375℃；锥孔反吹氮气流量：8L/min；脱溶剂气流量：11L/min。扫描模式为多反应监测扫描(MRM)，其定性离子对、定量离子对及其他反应条件见表2。表2种菌唑的ESI--MS/MS条件参数优选的，所述步骤1)为：将样品进行粉碎、匀浆机匀浆后，准确称取1.00g样品，置于50mL离心管中，加入5mL乙腈，涡旋振荡2min；于4000r/min条件下离心5min；取上清液3mL转移至10mL离心管中，加入0.075gPSA和0.060gGCB，0.060gC18涡旋振荡2min；于4000r/min下离心5min，取上清液1mL过0.22μm微孔滤膜，待测。进一步的，本专利技术采用基质匹配的标准曲线Y＝1388X+3604对玉米中种菌唑进行定量。本专利技术的有益效果是：(1)为了解种菌唑在玉米中的最终残留，合理评估其持效期，本专利技术比较了液液萃取、固相萃取以及QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、safe)3种样品前处理方法对玉米中吡种菌唑添加回收率的影响。结果表明：采用QuEChERS法提取时回收率较高，所需有机溶剂少，时间短，重复性好，具有一定优势；净化步骤中添加的PSA、C18和GCB主要用于去除萃取物中的杂质，但对检测目标成分也有吸附作用，因而其具体用量需根据实际样品的性质确定。本专利技术进一步通过实验证明：当PSA、C18和GCB的用量分别为0.025、0.020和0.020g/mL时，样品萃取与净化效果较好。(2)本专利技术采用安捷伦Technologies1290超高效液相色谱系统以及AgilentZORBAXEclipsePlusC18超高压色谱柱，同时对超高效液相色谱-质谱检测参数(如流动相、定性离子对、定量离子对)进行优化，提高了分离效率，缩短了样品分析周期(目标峰保留时间4.8min，单个样品检测时间6.0min)，适合于玉米中种菌唑的快速分析。该方法的添加回收率不低于87％，线性范围为1～100μg/L，定量限为0.01mg/kg；方法简便、灵敏度高、选择性好。附图说明图1为种菌唑解离示意图；图2为种菌唑一级质谱图；图3为种菌唑二级质谱图；图4为不同流动相下种菌唑的离子峰色谱图；图5为10μg/L种菌唑基质配标总离子峰和选择性离子峰色谱图；图6为QuEChERS(QuE)、液液萃取(LLE)和固相萃取(SPE)对玉米中种菌唑添加回收率的影响柱形图；图7为种菌唑空白样品的总离子峰和选择性离子峰色谱图。具体实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱‑串联质谱检测方法，其特征是，包括以下步骤：1)样品前处理将鲜玉米粒粉碎、匀浆后，准确称取1.00g样品置于离心管中，加入5ml乙腈溶解样品；离心，取上清液加入PSA、GCB和C18充分混合；离心，取上清液过微孔滤膜，待测；所述PSA、C18和GCB的用量分别为0.025、0.020和0.020g/mL；其中PSA为乙二胺‑N‑丙基硅烷，GCB为石墨化炭黑；2)定性检测得到的待测液采用超高效液相色谱‑三重四级杆串联质谱仪进行定性和/或定量分析。

【技术特征摘要】
1.一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征是，包括以下步骤：1)样品前处理将鲜玉米粒粉碎、匀浆后，准确称取1.00g样品置于离心管中，加入5ml乙腈溶解样品；离心，取上清液加入PSA、GCB和C18充分混合；离心，取上清液过微孔滤膜，待测；所述PSA、C18和GCB的用量分别为0.025、0.020和0.020g/mL；其中PSA为乙二胺-N-丙基硅烷，GCB为石墨化炭黑；2)定性检测得到的待测液采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪进行定性和/或定量分析。2.如权利要求1所述的一种玉米中种菌唑残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征是，超高效液相色谱仪器参数条件如下：色谱柱：AgilentZORBAXEclipsePlusC18色谱柱，50mm×2.1mm，1.8μm；柱温：35℃，样品室温度20℃；进样体积：1.0μL；流动相A：0.2％甲酸水，流动相B：甲醇；流速：0.3mL/min，梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：。3.如权利要求2所述的一种玉米中种菌唑残留...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁京芸，赵善仓，董崭，王磊，蔡达，范丽霞，
申请(专利权)人：山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37