人CD22特异性抗体及其治疗和诊断应用制造技术

本发明专利技术公开了含有至少一个ＣＤＲ的抗体分子，所述ＣＤＲ源自对人ＣＤ２２具有特异性的小鼠单克隆抗体。本发明专利技术也公开了一种其中所述ＣＤＲ中至少一个为修饰ＣＤＲ的ＣＤＲ移植抗体。本发明专利技术还公开了编码所述抗体分子的链的ＤＮＡ序列、载体、转化宿主细胞以及所述抗体分子在治疗由表达ＣＤ２２的细胞介导的疾病中的用途。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种对B淋巴细胞抗原(CD22)的抗原决定簇具有特异性的抗体分子。本专利技术也涉及所述抗体分子的治疗用途和制备所述抗体分子的方法。在天然抗体分子中，有两条重链和两条轻链。每条重链和每条轻链在其N-末端有一个可变区。每个可变区由4个构架区(FR)和交互的3个互补性决定区(CDR)组成。通常可变区的残基按照Kabat等专利技术的系统编号。该系统是美国健康与人类服务部NIH USA的Kabat等于1987年在“Sequence of Proteins of Immunological Interest”中提出(在下文简称为“Kabat等(参见上文)”)。除非另有说明，否则在本说明书中使用该编号系统。Kabat残基命名经常与氨基酸残基的线性编号不一致。无论是构架区还是CDR，实际的线性氨基酸序列可能比严格的Kabat编号含有较少或额外的氨基酸，这些较少或额外的氨基酸对应于基本可变区结构中截短的或插入的结构组分。对于给定的抗体，通过与具有“标准”Kabat编号序列的抗体序列中的同源残基比对，可确定残基的正确Kabat编号。根据Kabat编号，重链可变区的CDR位于残基31-35(CDR-H1)、残基50-65(CDR-H2)和残基95-102(CDR-H3)中。根据Kabat编号，轻链可变区的CDR位于残基24-34(CDR-L1)、残基50-56(CDR-L2)和残基89-97(CDR-L3)中。欧洲专利申请EP-A-0239400描述了CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)的构建，该申请公开了一种其中使用长的寡核苷酸通过定点诱变将小鼠单克隆抗体的CDR移植到人免疫球蛋白可变区的构架区的方法。CDR决定抗体的抗原结合特异性并且是可变区的构架区上携带的相对短的肽序列。最早有关通过CDR移植的人源化(humanising)单克隆抗体的工作，是在识别合成抗原例如NP的单克隆抗体上进行。然而，Verhoeyen等(Science，239，1534-1536，1988)和Riechmann等(Nature，332，323-324，1988)分别描述了其中通过CDR移植使识别溶菌酶的小鼠单克隆抗体和识别人T细胞上的抗原的大鼠单克隆抗体人源化的实例。Riechmann等发现在CDR移植物中，单独CDR的转移(如Kabat等定义(Kabat等(参见上文)和Wu等，J.Exp.Med.，132，211-250，1970)不足以提供令人满意的抗原结合活性。已发现许多构架残基必须改变以便使它们与供体构架区的那些残基相对应。国际专利申请号WO90/07861描述了用于选择需要改变的构架残基的建议标准。已公开了许多讨论CDR移植抗体的综述，包括Vaughan等(NatureBiotechnology，16，535-539，1998)。恶性淋巴瘤是一类变化较多的肿瘤。大多数情况发生在老年人中。目前在美国有200,000位至250,000位患者患有非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkins Lymphoma)(NHL)。在美国该病是增长第二快的癌症，以每年新增约55,000例的速度增加。该病的发生率增长已不能简单地通过老龄人口增长和暴露在已知危险因素中来解释。淋巴瘤的分类比较复杂，近十年已有进展。在1994年采用了修订的欧洲-美国淋巴瘤(REAL)分类法。该分类法将B细胞淋巴瘤(最常认定的)、T细胞淋巴瘤和不能分类的原发性淋巴瘤归入公认的亚型。在平常的实践中，依据它们的一般组织学外观而将NHL分为低度、中度和高度的分类法充分反映了它们的临床特征。NHL主要影响淋巴结，但在个别患者中，肿瘤可累及其它解剖学部位，例如肝、脾、骨髓、肺、肠和皮肤。该疾病通常表现为无痛的淋巴结肿大。结外淋巴瘤(extranodal lymphoma)最常见影响肠，尽管实际上每种器官的原发性淋巴瘤已有记载。全身症状包括发热、盗汗、乏力和体重减轻。直到最近，完全根据疾病解剖学范围的Anm Arbor分类系统成为NHL治疗的主要决定因素。通过结合另外的预后指征，包括年龄、血清乳酸脱氢酶水平和表现情况，可提炼这些信息。即便如此，Ann.Arbor分类系统的知识与肿瘤的组织学和免疫学亚型一起仍然是治疗的主要决定因素。低度NHL具有无痛的病程，患者平均存活8-10年。目前可采用的治疗对存活几乎没有影响，尽管局部疾病的放疗和全身症状的化疗改善了患者的生活质量。组合化疗可预备用于复发的疾病。中度疾病和尤其高度疾病非常具有攻击性并易于扩散。该级别的疾病需要紧急治疗。在患有非常严重疾病的患者中，放射治疗可为治疗的有效组成。已采用许多不同的化疗方案，并且可在超过一半的患者中获得长期无病的幸存者。对于患有复发性或顽固性疾病的患者，最初采用干细胞支持的大剂量治疗，但是现在在一线治疗中逐渐发现一个空间用于患有低危险性疾病的患者。在近年，采用渐趋攻击性治疗方法的趋势，必须平衡许多NHL患者中一般老年患者和相对体弱的患者，并且需要使治疗毒性与每位患者疾病的个体预后相配。需要更有效并且更易耐受的改进的治疗。最新采用的药物包括逐渐加至组合中的新细胞毒性药物，并采用基于抗体的治疗。非霍奇金淋巴瘤包括各种各样的B细胞淋巴瘤。因此，B细胞抗原是抗体治疗的合适靶。CD22为135kDa膜糖蛋白，并且属于称为唾液酸粘附素的唾液酸结合蛋白家族。其在B细胞发育早期的细胞质中检测到，与IgD同时出现在细胞表面，并且存在于大多数成熟B细胞上。表达随B细胞活化而增加。CD22随终末分化而丧失，一般报道在浆细胞上并不存在。因此，该内化抗原存在于前B细胞和成熟B细胞的表面，而在干细胞或浆细胞上不存在。在人类中存在两种CD22同种型。其主要形式(CD22β)在胞外区含有7个免疫球蛋白样(Ig样)结构域。CD22α变异体缺乏Ig样结构域4并可具有截短的胞质结构域。已表明阻断CD22粘着至单核细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞和红细胞上的抗体在第1或第2Ig样结构域内结合。一旦连接B细胞抗原受体并与Lyk、Syk和磷脂酰肌醇3-激酶缔合，CD22的胞质结构域则酪氨酸被磷酸化。CD22的功能是负调节B细胞活化的阈值。它通过与带有适当唾液酸糖缀合物(sialoglycoconjugates)的细胞相互作用也可介导细胞粘着。CD22在包括NHL、急性成淋巴细胞性白血病(B-ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)和尤其是急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)在内的大多数B细胞白血病和淋巴瘤中表达。现有技术已描述了抗CD22的单克隆抗体。WO 98/41641描述了在VH44和VL100上具有半胱氨酸残基的重组抗CD22抗体。WO96/04925描述了抗CD22抗体LL2的VH区和VL区。US 5686072描述了抗CD22和抗CD19免疫毒素的组合。WO 98/42378描述了裸抗CD22抗体在治疗B细胞恶性肿瘤中的用途。最近，许多基于抗体的疗法或者被许可，例如Rituxan(一种未标记的CD20特异性嵌合人γ1(+mγ1V区))，或者对该疾病正在进行临床试验。对临床医师和患者来说，这些依赖或者补体介导或者ADCC介导的B细胞的杀伤或放射性核素(例如131I或90Y)的使用，已涉及到制备和使用的难题本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对人ＣＤ２２具有特异性的抗体分子，所述抗体分子包含其中可变区包含ＣＤＲ的重链，所述ＣＤＲ具有如下给出的序列中的至少一种：对于ＣＤＲ－Ｈ１在图１中的Ｈ１（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）；对于ＣＤＲ－Ｈ２在图１中的Ｈ２（ＳＥＱＩＤＮＯ ：２），或Ｈ２’（ＳＥＱＩＤ　ＮＯ：１３）或Ｈ２”（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）或Ｈ２’”（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）；或对于ＣＤＲ－Ｈ３在图１中的Ｈ３（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：AG波普勒维尔，SP蒂克尔，HM拉迪曼，
申请(专利权)人：细胞技术研究及开发有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]