用于治疗肿瘤的免疫缀合物制造技术

一种包含细胞因子和肿瘤靶向部分（ＴＴＭ）的缀合物以及药学上可接受的赋形剂的药用组合物，其中所述细胞因子的用量不会诱导负反馈机制。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

用于治疗肿瘤的免疫缀合物。
技术介绍
某些细胞因子的抗肿瘤活性是众所周知的，并已有描述。某些细胞因子已经用于人体治疗。例如，IL-2和IFN-γ等细胞因子已经在患有不同类型肿瘤的患者体内显示出有效抗肿瘤活性，所述肿瘤类型例如肾转移癌、毛细胞白血病、卡波西肉瘤、黑素瘤、多发性骨髓瘤(multiple mieloma)等。其它细胞因子如IFNβ、肿瘤坏死因子(TNF)α、TNFβ、IL-1、IL-4、IL-6、IL-12、IL-15和集落刺激因子(CFS)已经显示出对某些类型的肿瘤的确切抗肿瘤活性。一般而言，细胞因子的全身毒性大大限制了它们的治疗应用。例如，最初发现TNF能够诱导某些肿瘤出血性坏死并发现它在体外对不同肿瘤系的细胞毒性效应，但后来证明它具有强烈的促炎活性，在过量产生的条件下，对人体有危险。因为全身毒性是药理学上活性数量的细胞因子在人体内应用的基本问题，新的衍生物和治疗策略目前正在评价之中，目标在于降低这类生物学效应物的毒性效应，同时又保持其治疗功效。一些新方法涉及a)开发能够将TNF传递给肿瘤并能增加局部浓度的融合蛋白。例如，已经产生了由TNF和肿瘤特异性抗体组成的融合蛋白；b)开发保持其抗肿瘤活性并且具有降低全身毒性的TNF突变体。因此，已经制备了能选择性识别唯一受体的突变体；c)应用能降低TNF的某些毒性效应而不影响其抗肿瘤活性的抗TNF抗体。所述抗体在文献中已有描述；d)应用具有较长半寿期的TNF衍生物(例如与聚乙二醇缀合的TNF)。最近，能够选择性靶向肿瘤部位的TNF衍生物的制备方法已有报道。例如，描述了这样一种融合蛋白所述融合蛋白或者是通过将抗运铁蛋白受体mAb重链基因与TNF基因融合而得到，或者是TNF与针对肿瘤相关TAG72抗原的单克隆抗体的“铰链”区的融合蛋白，或者是Fv-TNF融合蛋白。EP 251 494公开了用于诊断剂或治疗剂的给药系统，所述系统包含如下组分一种与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白缀合的抗体、一种能够与所述缀合抗体复合的试剂和一种由缀合了生物素的诊断剂或治疗剂组成的化合物；所述组分可以序贯给药或适当延迟给药，以便使所述治疗剂或诊断剂通过生物素-链霉抗生物素在所述抗体识别的靶细胞表面相互作用而定位。所述治疗剂或诊断剂包含金属螯合物，尤其是放射性核素和低分子量抗肿瘤药(例如顺铂、多柔比星等)的螯合物。EP 496 074公开了一种方法，所述方法提供生物素化抗体、抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白和生物素化诊断剂或治疗剂的序贯给药。虽然一般性提到了细胞毒性剂(如蓖麻毒蛋白)，但主要公开了放射性标记化合物的应用。WO 95/15979公开了用于在细胞靶上定位高毒性剂的方法，所述方法基于给予包含与配体或抗配体缀合的特异性靶分子的第一缀合物，接着给予由与抗配体或配体结合的毒性剂组成的第二缀合物。WO 99/13329公开了用于将分子靶向肿瘤血管生成性血管的方法，所述方法基于所述分子与NGR受体的配体缀合。许多分子已经显示作为可能的候选分子，但是只有多柔比星有具体描述。公开了NGR受体的配体作为细胞因子的载体不能用于诱导免疫应答。在WO 01/61017中，其专利技术人描述了他的令人吃惊的发现可以通过与氨肽酶-N受体(CD13)的配体偶联来显著改进某些细胞因子的治疗指数并增强其免疫治疗特性。CD13是150kDa跨膜糖蛋白，在不同物种中高度保守。它在正常细胞以及骨髓瘤细胞系、血管生成内皮和某些上皮细胞表面表达。CD13受体通常鉴定为“NGR”受体，因为其肽配体共享氨基酸“NGR”基序。然而，还需要进一步改进用于治疗和诊断癌症的药用组合物和方法。专利技术概述将药物传递并渗透到瘤细胞中是肿瘤化疗疗效的关键。目前，我们已发现靶向给予皮克剂量的细胞因子令人吃惊地增强了化疗药物的渗透。更具体地讲，我们已经发现将极低剂量的细胞因子给予肿瘤和肿瘤相关环境(包括肿瘤血管系统)提供了避免负反馈机制并保留其改变药物渗透屏障能力的新方法。因此，本专利技术提供了用于增加化疗药物的治疗指数的令人吃惊的新策略。在一个优选的实施方案中，我们已经发现，使用由TNF和CNGRC(一种靶向肿瘤新血管的肽)偶联达到的血管靶向，使多柔比星的疗效提高了8-10倍，而没有毒性增加的证据。同样，血管靶向增强了一种不同的化疗药物—美法仑的功效。用3-5ng/kg靶向TNF(腹膜内)观察到与化学疗法的协同作用，比非靶向TNF的LD50低106倍，而且比非靶向TNF所需的剂量低105倍。另外，我们也发现，将低剂量的TNF靶向给予肿瘤血管不能诱导可溶性TNF受体释放到循环中。我们还发现RGD-TNF和IFNγ-NGR在皮克范围内是有活性的。我们还证明NGR-TNF增强了顺铂的效果。这些结果表明，将微量细胞因子给予肿瘤血管提供了一个避免负反馈机制并且保留其改变药物渗透屏障能力的新方法。以所述方式进行的血管靶向提供了一个用于增加化疗药物治疗指数的新策略。专利技术声明按照本专利技术的一个方面，提供一种药用组合物，所述药用组合物包含细胞因子和肿瘤靶向部分(TTM)的缀合物以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，其中所述细胞因子的用量不会诱导负反馈机制。因此，所述细胞因子的用量不会诱导可溶性细胞因子受体脱落。优选所述缀合物的用量能提供0.5-500ng/kg的剂量范围，更优选1-50ng/kg的剂量范围，最优选5-15ng/kg的剂量范围。在一个实施方案中，所述细胞因子是炎性细胞因子。在另一个实施方案中，所述细胞因子是化疗细胞因子。优选所述细胞因子选自TNF，例如TNFα、TNFβ，IFNα、IFNβ、IFNγ，IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-15，EMAP II、血管内皮生长因子(VEGF)、PDGF、PD-ECGF或趋化因子。在一个更优选的实施方案中，所述细胞因子是TNF-α、TNF-β或IFN-γ，最优选TNF-α或TNF-β。在一个实施方案中，所述TTM是结合配偶体，例如针对肿瘤细胞表面分子的配体或抗体，所述肿瘤细胞表面分子例如受体、标记或其它胞外组分。在另一个实施方案中，所述TTM是肿瘤血管靶向部分(TVTM)，而且可以是结合配偶体，例如针对肿瘤血管细胞表面分子的配体或抗体，所述肿瘤血管细胞表面分子例如受体、标记或其它胞外组分。在一个实施方案中，所述TTM是抗体或其片段。在另一个实施方案中，所述TTM是配体或其片段。在一个优选的实施方案中，所述TTM是含有NGR或RGD基序的肽，或者是HIV-tat、膜联蛋白V、骨桥蛋白、纤连蛋白、I型或IV型胶原蛋白、透明质酸或肝配蛋白(Ephrin)，或者是结合配偶体，例如抗癌胚纤连蛋白的抗体；或者是上述任何组分的片段。在一个更优选的实施方案中，所述TTM包含NGR基序。在一个最优选的实施方案中，所述TTM是CNGRCVSGCAGRC、NGRAHA、GNGRG、环状CVLNGRMEC、线状或环状CNGRC。在另一个优选的实施方案中，所述TTM是含有RGD基序的肽。在一个实施方案中，所述TTM靶向VEGFR、ICAM1、ICAM2或ICAM3、PECAM-1、CD13、VCAM-1、选择蛋白、Act RII、ActRIIB、ActRI、ActRIB、CD44、氨肽酶A本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药用组合物，所述药用组合物包含细胞因子和肿瘤靶向部分（ＴＴＭ）的缀合物以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，其中所述细胞因子的用量不会诱导负反馈机制。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：A科尔蒂，F库尔尼斯，
申请(专利权)人：莫尔梅德股份有限公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]