一株治疗金黄色葡萄球菌感染的噬菌体制造技术

本发明专利技术涉及筛选出的金黄色葡萄球菌噬菌体，用作活性治疗物质杀灭细菌或抑制细菌生长，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于治疗细菌感染，特别是如金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)感染的噬菌体，及其治疗方法和组合物。
技术介绍
细菌的多重抗生素耐药性已成为细菌感染性疾病的治疗难题。尤其是近年来医院内和社区获得性耐药菌感染大幅升高(National Nosocomial InfectionsSurveillance(NNIS)report，data summary from October 1986-April 1996，issued May 1996.Am J Infect Control.1996；24380-8.)。其中金黄色葡萄球菌，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA)已成为这类感染的主要原因之一。因此需要寻求抗生素之外的替代方法来克服细菌耐药性。噬菌体是细菌的病毒，能特异性地感染细菌，多数噬菌体能烈解宿主菌，或者以其它机制来抑制或破坏特定的菌株。正是利用噬菌体的特异性烈解感染细菌，而不影响患者组织或正常菌群这一特性，噬菌体治疗提供了克服抗生素耐药性细菌感染的治疗前景(Smith，H.W.，a.H.，M.B.J.of Gen.Microbiol.，1982，128((Pt 2))p.307-318；Merril，C.R.，et al，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1996，93(8)p.3188-3192)。噬菌体治疗的有效性在大肠杆菌(Smith，同上)，伤寒沙门氏菌(Merril，同上)和金黄色葡萄球菌(Shigenobu Matsuzaki，et al，J.of Infec.Dis.2003，187p.613-624)感染的相应动物模型研究中得到证实。本专利技术以新分离出的金黄色葡萄球菌噬菌体，并对临床分离的金黄色葡萄球菌，包括多重耐药性菌株进行离体和动物在体模型研究，实现本专利技术。
技术实现思路
本专利技术已经研究噬菌体治疗抗生素耐药菌的潜在性。特别是，本专利技术已经确定能烈解金黄色葡萄球菌，尤其是烈解MRSA的特异性烈性噬菌体。本专利技术尤其证明该噬菌体可用于广谱烈解临床分离出的多重抗生素耐药性金黄色葡萄球菌。本专利技术涉及筛选出的金黄色葡萄球菌噬菌体，用作活性治疗物质显著地治疗细菌性感染疾病，更适宜治疗抗生素耐药性细菌感染疾病。本专利技术也涉及分离和纯化该金黄色葡萄球菌噬菌体。进而，本专利技术提供一种治疗细菌感染性疾病的方法，尤其是治疗抗生素耐药性细菌感染的方法，以一种动物组合给药给予动物需要的筛选出的金黄色葡萄球菌噬菌体。本专利技术也提供一种减少细菌毒力，尤其是减少抗生素耐药性细菌毒力的方法，以一种从属于组合给药给予筛选出的有效剂量的金黄色葡萄球菌噬菌体。本专利技术也提供组合给药方式杀灭或抑制细菌生长。使用该方法的媒介可以是食品，制造食品的物质，动物饲料，医学设备，皮肤，外科灌输，或金属，塑料，搪瓷器，瓷器，或玻璃表面。该媒介可以是惰性载体，也可以常规杀菌的方式加以使用。本专利技术也提供一种新的由一种或多种分离并纯化的金黄色葡萄球菌噬菌体制备的杀菌剂，用于消毒或杀灭致病性细菌，以保护任何需要，包括但不限于食品，制造食品的物质，食物制备区域，动物饲料，外科灌输，金属，塑料，搪瓷器，瓷器，或玻璃表面，医学设备和仪器，皮肤。本专利技术所涉及金黄色葡萄球菌噬菌体，phi006，能融合性烈解临床分离出的58.70％金黄色葡萄球菌，并能抑制29.35％金黄色葡萄球菌生长，尤其包括MRSA。本专利技术所涉及的陈述，组合物，杀菌剂，和方法对抵抗致病菌有用，尤其是多重耐药菌。例如，适合抵抗像金黄色葡萄球菌。本陈述和方法对于抵抗对如万古霉素糖肽敏感性降低的葡萄球菌尤其有用。本专利技术中具体的葡萄球菌也是甲氧西林耐药性的。在本说明书和具体实施方法中，使用常规分子生物学和微生物学技术和操作。如Sambrook，Fritsch，和Maniatis，(1989)分子克隆实验室手册(第2版，冷泉港实验室，冷泉港，纽约)；Parker，M.T.(1972)微生物学方法7B卷(纽约和伦敦学术出版社)中所述。本专利技术方法中所使用的噬菌体是能直接或间接破坏细菌的噬菌体株。相适应的噬菌体可以包括烈性噬菌体，溶源性而后变为烈性的噬菌体(即，噬菌体遗传改造为烈性噬菌体)，和能产生对细菌有害物质的非烈性噬菌体。本专利技术中首选烈性噬菌体。本专利技术中陈述和方法中所使用的噬菌体属于金黄色葡萄球菌噬菌体，特别是本专利技术所使用噬菌体，phi006，能烈解大约58.70％的金黄色葡萄球菌，和抑制29.35％的金黄色葡萄球菌。噬菌体可以籍修饰使该噬菌体能延迟被宿主防御系统灭活，宿主防御系统灭活表现为使噬菌体数量减少，或/和使噬菌体杀灭感染的细菌能力降低。修饰噬菌体可以籍连续通过噬菌体，或噬菌体遗传工程选择性修饰噬菌体株，使修饰噬菌体在体内保留比野生型噬菌体更长的时间(U.S.Pat.Nos.5,811,0935,766,892，5,688,501.)。该噬菌体能与其它抗菌剂联合使用。能与噬菌体联合使用的适当抗菌剂包括，但不限于抗生素和化学疗法制剂。此类制剂包括青霉素，头孢菌素，糖肽类(如万古霉素，替考拉宁)，该噬菌体能在适当培养基的适当细菌中生长(此处为SA006)。烈解物经处理制成无活菌和无像细胞壁类的毒性物质的制剂。例如，烈解物可用如过滤的常规方法除菌，使用超滤纯化除去细菌细胞壁。如陈述中描述该噬菌体可以密封包装于安瓿或其它包装形式用于给药。并以检测噬菌体稀释液与特异性的标准菌株共同接种产生的烈解斑数量确定制剂的近似滴度，同时每批均检测残存细菌。具体的为噬菌体制剂的最低浓度介于108至109pfu。此噬菌体制剂可用于注射，也可对其进行浓缩(如冻干)，随后再重新悬浮于诸如生理盐水的缓冲液中。该噬菌体制剂还应用诸如豚鼠的实验动物测定毒性，以确保不含残存的细菌表面碎片。据此，该噬菌体制剂可以确立其组成或原则，以一种适合活体给药的生物学相容形式给药于动物体或人体。“适合活体给药的生物学相容形式”是指活性物质的给药形式，其治疗效应超过其毒性效应。该活性物质可以给药于动物，包括人，宠物动物，家畜，渔业，动物园动物，和水上公园动物。本专利技术确立的治疗性活性给药剂量定义为一种在用量和必要时间间期取得预期效果的有效剂量。例如，一种物质的治疗性活性剂量可以依据诸如个体疾病状态，年龄，性别，体重因素而变化。用量范围可调节到给出最佳治疗反应。例如，每天可给几个分开的用量，或该用量可按治疗情况的需要指征适当地减少。该用量可以在106至108pfu/千克/天，最好是108至1011pfu/千克/天。噬菌体给药可以直至完全消灭致病性细菌。该活性物质可以用便利的方式给药，诸如注射(皮下注射，静脉注射，等)，口服，肺部气雾剂，鼻腔喷雾，肌肉注射，腹腔注射，阴道灌注，直肠灌注，局部注射，腰椎穿刺，和直接敷用。依据给药途径，此活性物质可被以保护层(如肠衣片或丸剂)避免酶，酸和其它天然条件下的灭活作用。该噬菌体亦可组合成一种气雾剂形式，特别适合于气雾吸入给药至肺。在此所描述的药用形式可配制成药物学允许的可用于人或动物的制剂形式，诸如有效量的活性物质与药物学许可的载体混合组成。技术成熟的赋形剂可用作传输载本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离并纯化的金黄色葡萄球菌噬菌体用于治疗或预防细菌感染。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何俭，
申请(专利权)人：何俭，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]