智利小植绥螨生殖系统透射电镜观察方法技术方案

本发明专利技术涉及智利小植绥螨生殖系统透射电镜观察方法，其特征是先获取智利小植绥螨生殖系统，再制备其透射样本的方法，具体操作包括：先获得交配中的智利小植绥螨雌螨、雄螨，再通过乳酸浸泡、脱水、干燥处理，最后获取智利小植绥螨生殖系统；然后制备生殖系统透射样本，先后操作顺序包括固定、脱水、包埋、固化、切片、染色和观察7个步骤。本发明专利技术利用十分简易巧妙的方法首次获得智利小植绥螨生殖系统，并首次实现在透射电镜下观察生殖系统超微结构的目的，生殖系统的获得能为透射电镜下观察其结构提供原材料，而透射电镜的观察结果又有利于生殖机理的研究。

The observation method of Phytoseiulus persimilis reproductive system TEM

【技术实现步骤摘要】
智利小植绥螨生殖系统透射电镜观察方法
本专利技术涉及智利小植绥螨生殖系统透射电镜观察方法，属于智利小植绥螨生物学基础研究领域。
技术介绍
智利小植绥螨生殖具有特殊性，雌螨若不交配则不会产卵，并且认为所有的后代均由受精卵发育而来；而雌螨是二倍体，雄螨为单倍体。这一结果被认为是智利小植绥螨的特殊的生殖方式决定的，即假产雄孤雌生殖。然而，这一结论在论证时还有自相矛盾的地方，除此以外，无论是刚刚产下的卵还是剖腹卵，染色体均有单倍体存在。显然，染色体若丢失或异质化，也一定是发生于卵产下前，甚至是卵细胞刚发育前后。因此，对智利小植绥螨的受精卵发育过程进行研究是弄清其生殖机理的一个关键点，要研究受精卵的发育过程，就需要将其生殖系统（受精卵的发育结构）解剖出来进行研究。通过对解剖出来的不同发育时期的智利小植绥螨生殖系统进行透射电镜观察，可以从超微水平观察智利小植绥螨受精卵发育的过程，为明确雌螨在性别决定过程中起的作用提供参考。但由于智利小植绥螨的个体太小比较脆弱、体内被不透明的体液充满、无法对其生殖系统进行准确定位、稍不小心就会导致虫体破碎，现有资料又没有相关如何解剖及如何观察其生殖系统的报道，因此如何获得和进行透射电镜观察智利小植绥螨生殖系统，有待解决。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供智利小植绥螨生殖系统透射电镜观察方法，应用本方法可以将智利小植绥螨的生殖系统单独分离出来，并在透射电镜下进行超微观察，这能为进一步明确智利小植绥螨生殖系统提供参考。本专利技术是先获取智利小植绥螨生殖系统，再制备其透射样本的方法，具体操作步骤为：（1）智利小植绥螨生殖系统获取：是先获得交配中的智利小植绥螨雌螨、雄螨，再通过乳酸浸泡、脱水、干燥处理，最后获取智利小植绥螨生殖系统，具体操作为：1）交配中雌雄螨的获取：在显微镜下，从智利小植绥螨饲养种群内，挑出卵单独饲养至成螨后进行雌雄螨配对，根据不同需要将处于交配过程中不同时间的雌雄个体连同饲养装置一起放置于超低温冰箱（-80℃）或液氮中，从而获得不同交配时期的雌雄螨；2）乳酸浸泡：取出交配中的智利小植绥螨雌雄螨后，用细毛笔将雌雄螨放置到载玻片上，再用0号昆虫针和细毛笔将雌雄个体分开，最后将雌雄螨分别挑入到盛有乳酸的指形管中，常温放置3-4天；3）脱水：从指形管中取出雌螨或雄螨或将两者一起放入70％的酒精中，再进行梯度脱水，酒精的浓度依次为80％、90％、100％，具体是操作是先用胶头滴管将上层酒精吸出，然后再加入下一梯度的酒精，如此循环直到100％的酒精；4）干燥：将所取雌螨、雄螨样品置于样品台上，利用真空干燥仪进行干燥2～3小时；5）生殖系统获取：经过干燥后的虫体在体视显微镜下可以清楚地看到在所取智利小植绥螨雌螨、雄螨样品周围部分呈透明色，只留下中间一块橙色的部位即为智利小植绥螨的生殖系统，最后在显微镜下用0号昆虫针将螨体的背板轻轻揭掉，取出橙色部分即成功分离出的智利小植绥螨生殖系统；（2）生殖系统透射样本的制备，先后操作顺序包括固定、脱水、包埋、固化、切片、染色和观察7个步骤，具体为：1）固定：将取下的生殖系统放入浓度为3.5%戊二醛的固定液中，为了使固定效果更好，可向戊二醛中加入吐温100（1L:600uL）和氯化钠（1L:0.9g），固定48小时，然后用浓度为0.1mol/l、PH值为7.2的磷酸缓冲液冲洗（10分钟/次），冲洗3小时，再用锇酸固定2小时，最后用磷酸缓冲液冲洗3-4遍；2）脱水：冲洗后，需要对生殖系统进行梯度脱水，分别放在30%、50%、70%、80%、90%、100%的酒精中进行脱水，每个梯度脱水5分钟，再用丙酮脱水15分钟，4-5次；3）包埋：留少许丙酮溶液，加入树脂溶液，将样品和树脂充分混合，浸泡12小时，然后将生殖系统整齐地放入树脂模具中摆正姿态，赶走树脂内气泡；4）固化：赶走气泡后，将模具放入35度烤箱中烘烤2-3周；5）切片：再利用超薄切片机切片50-60nm；6）染色：用醋酸铀和柠檬酸铅染色1小时左右；7）观察：在透射电镜下对切片观察、拍照。本专利技术利用十分简易巧妙的方法首次获得智利小植绥螨生殖系统，并首次实现在透射电镜下观察生殖系统超微结构的目的，生殖系统的获得能为透射电镜下观察其结构提供原材料，而透射电镜的观察结果又有利于生殖机理的研究。具体实施方式实施例智利小植绥螨生殖系统透射电镜观察方法本专利技术是先获取智利小植绥螨生殖系统，再制备其透射样本的方法，具体操作步骤为：（1）智利小植绥螨生殖系统获取：是先获得交配中的智利小植绥螨雌螨、雄螨，再通过乳酸浸泡、脱水、干燥处理，最后获取智利小植绥螨生殖系统，具体操作为：1）交配中雌雄螨的获取：在显微镜下，从智利小植绥螨饲养种群内，挑出卵单独饲养至成螨后进行雌雄螨配对，根据不同需要将处于交配过程中不同时间的雌雄个体连同饲养装置一起放置于超低温冰箱（-80℃）或液氮中，从而获得不同交配时期的雌雄螨；2）乳酸浸泡：取出交配中的智利小植绥螨雌雄螨后，用细毛笔将雌雄螨放置到载玻片上，再用0号昆虫针和细毛笔将雌雄个体分开，最后将雌雄螨分别挑入到盛有乳酸的指形管中，常温放置3-4天；3）脱水：从指形管中取出雌螨或雄螨或将两者一起放入70％的酒精中，再进行梯度脱水，酒精的浓度依次为80％、90％、100％，具体是操作是先用胶头滴管将上层酒精吸出，然后再加入下一梯度的酒精，如此循环直到100％的酒精；4）干燥：将所取雌螨、雄螨样品置于样品台上，利用真空干燥仪进行干燥2～3小时；5）生殖系统获取：经过干燥后的虫体在体视显微镜下可以清楚地看到在所取智利小植绥螨雌螨、雄螨样品周围部分呈透明色，只留下中间一块橙色的部位即为智利小植绥螨的生殖系统，最后在显微镜下用0号昆虫针将螨体的背板轻轻揭掉，取出橙色部分即成功分离出的智利小植绥螨生殖系统；（2）生殖系统透射样本的制备，先后操作顺序包括固定、脱水、包埋、固化、切片、染色和观察7个步骤，具体为：1）固定：将取下的生殖系统放入浓度为3.5%戊二醛的固定液中，为了使固定效果更好，可向戊二醛中加入吐温100（1L:600uL）和氯化钠（1L:0.9g），固定48小时，然后用浓度为0.1mol/l、PH值为7.2的磷酸缓冲液冲洗（10分钟/次），冲洗3小时，再用锇酸固定2小时，最后用磷酸缓冲液冲洗3-4遍；2）脱水：冲洗后，需要对生殖系统进行梯度脱水，分别放在30%、50%、70%、80%、90%、100%的酒精中进行脱水，每个梯度脱水5分钟，再用丙酮脱水15分钟，4-5次；3）包埋：留少许丙酮溶液，加入树脂溶液，将样品和树脂充分混合，浸泡12小时，然后将生殖系统整齐地放入树脂模具中摆正姿态，赶走树脂内气泡；4）固化：赶走气泡后，将模具放入35度烤箱中烘烤2-3周；5）切片：再利用超薄切片机切片50-60nm；6）染色：用醋酸铀和柠檬酸铅染色1小时左右；7）观察：在透射电镜下对切片观察、拍照。本文档来自技高网...

【技术保护点】
智利小植绥螨生殖系统透射电镜观察方法，其特征是先获取智利小植绥螨生殖系统，再制备其透射样本的方法，具体操作步骤为：（1）智利小植绥螨生殖系统获取：是先获得交配中的智利小植绥螨雌螨、雄螨，再通过乳酸浸泡、脱水、干燥处理，最后获取智利小植绥螨生殖系统，具体操作为：1）交配中雌雄螨的获取：在显微镜下，从智利小植绥螨饲养种群内，挑出卵单独饲养至成螨后进行雌雄螨配对，根据不同需要将处于交配过程中不同时间的雌雄个体连同饲养装置一起放置于超低温冰箱（‑80℃）或液氮中，从而获得不同交配时期的雌雄螨；2）乳酸浸泡：取出交配中的智利小植绥螨雌雄螨后，用细毛笔将雌雄螨放置到载玻片上，再用0号昆虫针和细毛笔将雌雄个体分开，最后将雌雄螨分别挑入到盛有乳酸的指形管中，常温放置3‑4天；3）脱水：从指形管中取出雌螨或雄螨或将两者一起放入70％的酒精中，再进行梯度脱水，酒精的浓度依次为80％、90％、100％，具体是操作是先用胶头滴管将上层酒精吸出，然后再加入下一梯度的酒精，如此循环直到100％的酒精；4）干燥：将所取雌螨、雄螨样品置于样品台上，利用真空干燥仪进行干燥2～3小时；5）生殖系统获取：经过干燥后的虫体在体视显微镜下可以清楚地看到在所取智利小植绥螨雌螨、雄螨样品周围部分呈透明色，只留下中间一块橙色的部位即为智利小植绥螨的生殖系统，最后在显微镜下用0号昆虫针将螨体的背板轻轻揭掉，取出橙色部分即成功分离出的智利小植绥螨生殖系统；（2）生殖系统透射样本的制备，先后操作顺序包括固定、脱水、包埋、固化、切片、染色和观察7个步骤，具体为：1）固定：将取下的生殖系统放入浓度为3.5%戊二醛的固定液中，为了使固定效果更好，可向戊二醛中加入吐温100（1L:600uL）和氯化钠（1L:0.9g），固定48小时，然后用浓度为0.1mol/l、PH值为7.2的磷酸缓冲液冲洗（10分钟/次），冲洗3小时，再用锇酸固定2小时，最后用磷酸缓冲液冲洗3‑4遍；2）脱水：冲洗后，需要对生殖系统进行梯度脱水，分别放在30%、50%、70%、80%、90%、100%的酒精中进行脱水，每个梯度脱水5分钟，再用丙酮脱水15分钟，4‑5次；3）包埋：留少许丙酮溶液，加入树脂溶液，将样品和树脂充分混合，浸泡12小时，然后将生殖系统整齐地放入树脂模具中摆正姿态，赶走树脂内气泡；4）固化：赶走气泡后，将模具放入35度烤箱中烘烤2‑3周；5）切片：再利用超薄切片机切片 50‑60nm；6）染色：用醋酸铀和柠檬酸铅染色1小时左右；7）观察：在透射电镜下对切片观察、拍照。...

【技术特征摘要】
1.智利小植绥螨生殖系统透射电镜观察方法，其特征是先获取智利小植绥螨生殖系统，再制备其透射样本的方法，具体操作步骤为：（1）智利小植绥螨生殖系统获取：是先获得交配中的智利小植绥螨雌螨、雄螨，再通过乳酸浸泡、脱水、干燥处理，最后获取智利小植绥螨生殖系统，具体操作为：1）交配中雌雄螨的获取：在显微镜下，从智利小植绥螨饲养种群内，挑出卵单独饲养至成螨后进行雌雄螨配对，根据不同需要将处于交配过程中不同时间的雌雄个体连同饲养装置一起放置于超低温冰箱（-80℃）或液氮中，从而获得不同交配时期的雌雄螨；2）乳酸浸泡：取出交配中的智利小植绥螨雌雄螨后，用细毛笔将雌雄螨放置到载玻片上，再用0号昆虫针和细毛笔将雌雄个体分开，最后将雌雄螨分别挑入到盛有乳酸的指形管中，常温放置3-4天；3）脱水：从指形管中取出雌螨或雄螨或将两者一起放入70％的酒精中，再进行梯度脱水，酒精的浓度依次为80％、90％、100％，具体是操作是先用胶头滴管将上层酒精吸出，然后再加入下一梯度的酒精，如此循环直到100％的酒精；4）干燥：将所取雌螨、雄螨样品置于样品台上，利用真空干燥仪进行干燥2～3小时；5）生殖系统获取：经过干燥后的虫体在体视显微镜下可以清楚地看到在所取智利小植绥螨雌螨、雄螨样品周围部...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜晓环，王伯明，
申请(专利权)人：首伯农北京生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11