本发明专利技术提供了调节禽类中原生殖细胞（ＰＧＣ）数和／或发育的方法。在一个实施方案中，本发明专利技术提供了一种在禽类胚胎中调节原生殖细胞数的方法，包括用与原生殖细胞相关的抗原免疫雌性禽，从而该雌性禽产生的卵包含足够高浓度的特异于该抗原的抗体，以调节该卵内禽类胚胎中存在的内源性ＰＧＣ数。本发明专利技术还提供了产生嵌合禽类的方法，增加众多卵中雄性禽的比例的方法，产生禽类配子的方法，及增强核酸在禽类中种系传递的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及调节禽类中原生殖细胞(primordial germ cell)数的方法。更特别地，本专利技术涉及与原生殖细胞相关抗原结合的抗体在禽类胚胎发生期间调节原生殖细胞发育中的应用。可以将供体原生殖细胞给予经本专利技术方法处理的禽类所产的卵内存在的禽类胚胎以产生嵌合禽类。
技术介绍
嵌合体是包含衍生自一个以上合子的细胞的复合生物体。实验性嵌合体已经用于在发育期间研究细胞之间的相互作用及进行细胞结局和谱系分析(McLaren，Mammalian Chimeras.Cambridge UniversityPress，Cambridge，England，United Kingdom，1976)。使用分离自非常早期胚胎的细胞产生嵌合体可产生这样的生物体，该生物体发育成具有部分由所述分离的细胞的后代构成的体细胞组织的完全互补体。如果起始材料包括早期生殖细胞或其前体，则所得嵌合体可产生供体和受体基因型双方的配子。另外，嵌合体可以是种内嵌合体(即含有衍生自同一物种的两或多个合子的细胞)或种间嵌合体(即含有衍生自至少两个不同物种的合子的细胞)。通过用希望的供体PGC在生殖腺中进行种群恢复而产生种系嵌合体的效率可以通过减少受体生物体中的PGC数而增强。已经不同程度地成功利用了许多减少PGC的方案。持续暴露于3.4和1.8R/hr剂量水平的γ辐射(0.3-3.4R/hr，60Co，20天)导致卵母细胞的完全破坏(Mraz & Woody，Radiation Res 5463-68，1973)。然而，在0.9R/hr或更高水平孵化频率降低。为降低内源性PGC数进行持续低水平γ射线的应用受限，这是由于可以同时暴露的卵的数目相对较少、需要较长的暴露时间及辐射自身的潜在致畸作用所致。也已经尝试了短期暴露于γ射线源(Carsience et al.，Development117669-75，1993；Thoraval et al.，Poultry Sci 731897-1905，1994；Maeda et al.，Poultry Sci 77905-07，1998)。在这些研究中，在即将注射X期胚盘细胞或透明区细胞之前将未孵育的卵暴露于500-700rads。在短期γ辐射之后，种系嵌合现象的迹象是高度可变的。这种不一致结果的基础归因于“供体细胞被注射进不适当的位置…”(Carsience et al.，Development 117669-75，1993)。也已经描述了尝试使用紫外(UV)光使受体胚胎不育(Reynaud，JEmbryol Exp Morphol 21485-507，1969；Reynaud，J Roux＇s ArchDevelBiol 17985-110，1976；Aige-Gil & Simkiss，Br Poul Sci 32427-438，1991)。Aige-Gil & Simkiss断定“照射生殖新月区、特别是在4期孵育时照射不可能不诱导明显异常”。不育的程度看起来与发育异常正相关，因此限制了UV光作为降低内源性PGC的工具的实际应用。种系嵌合体的产生对人类及对各种禽物种自身均产生一定的潜在有益作用。种系嵌合体可用作具有希望特性的配子的来源，其然后可与育种程序一起使用以增加禽基因库。更简便地生产特定禽物种的配子的能力对禽兽医和家禽生产领域是有益的。对于濒于灭绝的物种如鸣鹤而言，能够提供现成的雄性精子是非常有益的。对于商业禽类如火鸡而言，希望更迅速而经济地产生雄性精子。对于产肉禽群而言，希望具有增加禽群中雄性禽比率的方式。如此，需要获得禽精子的新方式。因此，人们长期及持续需要增加禽类中种系嵌合体产生的效率的方式。本专利技术致力于本领域中的这种及其它需要。概述本专利技术提供了调节禽胚胎中原生殖细胞数的方法。在一个实施方案中，所述方法包括用与原生殖细胞相关的抗原免疫一个雌性禽，从而该雌性禽产生的卵包含足够高浓度的特异于该抗原的抗体，以调节该卵内存在的禽胚胎中内源性PGC数。在一个实施方案中，所述雌性禽选自由鸡、火鸡、鸭、鹌鹑、及沙丘鹤组成的一组。在另一个实施方案中，所述雌性禽是鸡。在一个实施方案中，所述抗原包含选自如下一组的一个多肽表位SSEA-1，VASA，EMA-1，germ cell-less，dead end，nanos，stella，fragilis，及DAZL。在一个实施方案中，所述免疫步骤导致禽胚胎中原生殖细胞数减少。在另一个实施方案中，所述免疫步骤导致禽胚胎中原生殖细胞数增加。本专利技术还提供了一种调节禽胚胎中原生殖细胞发育的方法。在一个实施方案中，所述方法包括用与原生殖细胞相关的抗原免疫一个雌性禽，从而由该雌性禽产生的卵包含足够高浓度的特异于该抗原的抗体，以调节该卵内存在的禽胚胎中PGC的发育。在一个实施方案中，所述抗原包含选自如下一组的一个多肽表位SSEA-1，VASA，EMA-1，germ cell-less，dead end，nanos，stella，fragilis及DAZL。在一个实施方案中，所述雌性禽选自由鸡、火鸡、鸭、鹌鹑、和沙丘鹤组成的一组。在另一个实施方案中，所述雌性禽是鸡。在一个实施方案中，所述免疫步骤导致禽胚胎中原生殖细胞的发育抑制。在另一个实施方案中，所述免疫步骤导致禽胚胎中原生殖细胞的发育增强。本专利技术还提供了一种产生嵌合禽的方法。在一个实施方案中，所述方法包括(a)用与原生殖细胞相关的抗原免疫一个雌性禽；(b)该雌性禽产卵，其中卵中包含足够高浓度的特异于该抗原的抗体，以调节该卵内存在的受体胚胎中PGC发育、PGC数或其组合；及(c)将供体PGC经卵内给予受体胚胎以产生嵌合禽。在一个实施方案中，所述抗原包含选自如下一组的一个多肽表位SSEA-1，VASA，EMA-1，germ cell-less，dead end，nanos，stella，fragilis，及DAZL。在一个实施方案中，供体PGC来自与受体胚胎相同的禽物种。在另一个实施方案中，供体PGC来自与受体胚胎不同的禽物种。在一个实施方案中，所述方法进一步包括孵育所述嵌合禽至孵化。在本专利技术方法的一个实施方案中，所述雌性禽选自由鸡、火鸡、鸭、鹌鹑、和沙丘鹤组成的一组。在一个实施方案中，供体PGC来自选自由鸡、火鸡、鸭、鹌鹑、和鸣鹤组成的一组的禽胚胎。在另一个实施方案中，供体PGC携带一对雄性决定(Z)染色体。在另一个实施方案中，供体PGC选自由生殖腺PGC、血PGC及生殖新月区(germinal crescent)PGC组成的一组。在另一个实施方案中，供体PGC携带一个雌性决定(w)染色体。在一个实施方案中，所述给予是通过卵内注射进行的。在一个实施方案中，当受体胚胎在大约IX期(根据Eyal-Giladi & Kochav分期系统)及大约30期(根据Hamburger & Hamilton分期系统)之间时给予供体PGC。在另一个实施方案中，当受体胚胎在14期(根据Hamburger& Hamilton分期系统)之后时给予供体PGC。在另一个实施方案中，所述给予步骤是通过将胚盘细胞注射到受体胚胎进行的，并且其中胚盘细本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种调节禽胚胎中原生殖细胞数的方法，所述方法包括用与原生殖细胞相关的抗原免疫雌性禽类，从而该雌性禽产生的卵包含足够高浓度的特异于该抗原的抗体，以调节该卵中存在的禽胚胎中内源性ＰＧＣ数。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：詹姆斯N派蒂特，塞缪尔劳埃德帕杜，
申请(专利权)人：北卡罗来纳州大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。