本发明专利技术提供了治疗缺血疾病的方法，其包括投药血管生成素－１（Ａｎｇ１）或编码Ａｎｇ１的载体的步骤。本发明专利技术还提供了用于治疗缺血疾病的试剂盒，其包括Ａｎｇ１。构建了表达Ａｎｇ１的载体，并且将其单独投药给心肌梗塞急性期大鼠的心肌，从而在心肌中局部表达Ａｎｇ－１。结果，观察到明显的效果诸如梗塞后死亡率下降，心肌中的血管数增加，心急梗塞灶缩小，以及心功能改善。不必要投药Ａｎｇ－１的血管生成作用所需要的ＶＥＧＦ。当将Ａｎｇ－１－表达病毒载体投药给患有动脉结扎诱导的重症肢体缺血的模型动物时，进一步观察到显著的治疗效果。Ａｎｇ１基因治疗作为缺血疾病诸如缺血性心脏病和肢体缺血的安全有效的治疗法是非常好的。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及利用血管生成素(angiopoietin)-1(Ang1)或编码Ang1的载体+治疗缺血疾病的方法。本专利技术还涉及缺血疾病治疗试剂盒，所述试剂盒包括Ang1或编码Ang1的载体。
技术介绍
急性损伤或动脉堵塞导致的缺血有时导致肢指脱落(loss of finger)，机能障碍或导致死亡的严重疾病。由于社会环境的改变以及老龄化社会的到来，缺血性心脏病诸如急性心肌梗塞和重症心绞痛尤其迅速增加，现在已经占生活习惯相关疾病的主要部分。手术再血管化方法诸如经皮经腔冠状动脉成型术(PTCA)和冠状动脉旁路移植术(coronary artery bypassgraft)(CABG)主要地被用于治疗急性心肌梗塞。这种常规治疗方法与促进再血管化的遗传改造技术的联用使得心脏功能积极改善并且减少卧床时间成为可能。美国首先进行了治疗性血管生成的临床试验，由于血管内皮生长因子(VEGF)基因和蛋白质的强血管内皮增殖刺激活性，所述试验利用血管内皮生长因子(VEGF)基因和蛋白质，来治疗冠状动脉缺血(Losordo，D.W.，等(1998)Circulation.982800-2804；Rosengart，T.K.，等(1999)Circulation.100468-474；Lathi，K.G，等(2001)Anesth Analg.9219-25；Symes，J.F.，等(1999)Ann Thorac Surg.68830-836；discussion 836-837)和重症肢体缺血(Baumgartner，I.，等(1998)Circulation.971114-1123；Isner，J，M.，等(1998)JVasc Surg.28964-973；discussion 973-965；Baumgartner，I.，等(2000)AnnIntern Med.132880-884)。现在，VEGF基因治疗的缺血性心脏病仅仅适用于严重心绞痛，并且不包括急性心肌梗塞。发现在急性缺血诸如心肌梗塞中，梗死后短时间内，在局部心肌、外周血白细胞，单核细胞以及巨噬细胞中，VEGF生成增加，导致循环VEGF水平极高(Xu，X.，等(2001)J ThoracCardiovasc Surg.121735-742；Li，J.，等(1996)Am J Physiol.270H1803-1811；Ladoux，A.and C.Frelin.(1993)Biochem Biophys Res Commun.1951005-1010；Seko Y，等Clin Sci 92，453-454，1997；Banai S，等Cardiovasc Res.28，1176-1179，1994；Berse B，等Mol Biol Cell，3，211-220，1992；Taichman NS，J leukoc Biol，62，397-400，1997)。虽然VEGF生成增加的生理意义还没被完全理解，认为VEGF通过保护并修复缺血位点的血管而促进缺血的快速恢复(Banai S，等Cardiovasc Res.28，1176-1179，1994)。然而，过量投药VEGF使脆弱血管以及未成熟的血管增多(Thurston，G，等(1999)Science.2862511-2514)，并诱导投药部位的血管瘤形成(Schwarz，E.R.，等(2000)J AmColl Cardiol.351323-1330)。此外，Matsuno等最近报道心急梗塞中的高水VEGF可加重肺水肿并由此增加急性心肌梗塞的死亡率(Matsuno H等Blood 100，2487，2002)。
技术实现思路
本专利技术提供了利用Ang1或编码Ang1的载体治疗缺血疾病的方法。本专利技术还提供用于治疗缺血疾病的试剂盒，其包括Ang1或编码Ang1的载体。具有强血管生成诱导活性的VEGF165在心肌梗塞急性期由腺病毒载体在局部心肌内表达。然后在存活大鼠的梗死的心脏中证实了血管生成诱导活性。然而，证实了在梗塞后4-5天的急性期，死亡率增加。死亡大鼠的活检显示明显的胸膜积液(4ml-5ml)(数据省略)。由于VEGF增加毛细血管通透性，研究了VEGF165投药对心肌梗塞后的肺内血管通透性的影响。结果，血管通透性明显增加(数据省略)。Matsuno等报道了心肌梗塞后α1-抗纤溶酶(antiplasmin)敲除小鼠中高水平VEGF的诱导，以及由此导致的肺水肿死亡率的增加。在本专利技术人进行的上述试验中，根据心肌梗塞后的高VEGF水平，可推定VEGF165过表达增加肺中血管的通透性并诱导肺水肿，从而增加死亡率。本专利技术人的焦点在利用血管生成素-1(Ang1)来开发更安全有效的心肌梗塞基因疗法。Ang1是Tie-2受体的配体以及重要的血管生成因子，其与VEGF协同作用并参与血管生成、血管成熟和稳定(Davis，S.，等(1996)Cell.871161-1169；Sato，T.N.，等(1995)Nature.37670-74)。据报道共同投药Ang1和VEGF增加缺血动物模型中的再血管化(Jones，M.K.，等(2001)Gastroenterology.1211040-1047；Chae，J.K.，等(2000)。Arterioscler ThrombVasc Biol.202573-2578)。本专利技术人已经报道在阻塞性动脉硬化症模型中，联用Ang1和VEGF基因进行基因治疗增加VEGF的血管生成活性，同时减少诸如VEGF所致血管通透性增加引起的肺水肿等副作用(Ito Y.，等，Molecular Therapy，5(5)，S162，2002；WO02/100441)。本专利技术中，本专利技术人研究了将Ang1单独投药给缺血心脏的治疗效果。通常认为单独的Ang1不刺激血管内皮增殖，事实上，由于急性缺血诸如心肌梗塞中内源性VEGF水平极高的状态，在Ang1转基因小鼠中，血管直径增加而血管密度不增加(Thurston，G.，J.Anat.200575-580(2002))。然而，本专利技术人认为血管生成效应可通过单独投药Ang1获得，这是。具体地，本专利技术人构想出这样一种策略在心肌梗塞急性期利用Ang1，与体内活跃生成的VEGF协同来增加血管生成，从而促进再血管化，同时可降低增加的VEGF生成所伴随的毒性。Ang1拮抗性地抑制炎性细胞因子诱导的血管通透性增加和血液凝固，所述炎性细胞因子诸如VEGF，IL-1和TNF，它们与心肌梗塞的加重有关(Thurston，G.(2002)J Anat.200575-580；Thurston，G.，等(2000)Nat Med.6460-463；Thurston，G.，等(1999)Science.2862511-2514)。本专利技术人预测Ang1投药可防止心肌梗塞急性期中活跃产生的炎性细胞因子所引起的血管通透性增加以及血液凝固加速。因此，本专利技术人制备了表达Ang1基因的腺病毒载体，并将所述载体经心肌内投药给大鼠心肌梗塞模型。本专利技术人研究了血管生成效应，梗塞区域缩小效应，心脏功能的改善以及死亡率的降低。动脉结扎诱导的心肌梗塞使得梗塞位点及其周围区域的血管密度明显下降。此外，还显示心肌梗塞后本文档来自技高网...
【技术保护点】
缺血性心脏病的治疗方法，其包括投药血管生成素－１或编码血管生成素－１的载体的步骤。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：滨田洋文，伊藤克礼，高桥一泰，森川雅之，
申请(专利权)人：株式会社载体研究所，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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