罗布麻DNA解旋酶基因APDH1序列及其克隆与应用制造技术

本发明专利技术涉及罗布麻ＤＮＡ解旋酶基因ＡＰＤＨ１的克隆、重组、耐盐性功能分析及其转基因耐盐碱棉花的选育，属于分子生物学和生物技术领域。利用抑制差减杂交技术，构建盐胁迫和正常条件下罗布麻ｍＲＮＡ正向差减ｃＤＮＡ文库，对从差减文库中筛选的阳性ｃＤＮＡ克隆进行酶切、ＰＣＲ与逆向Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交鉴定、ＤＮＡ测序以及核苷酸序列同源性比较，获得一系列盐诱导表达的ｃＤＮＡ序列，其中有一段序列为ＤＮＡ解旋酶基因的中间片段。然后进行３′和５′末端快速扩增获得编码罗布麻ＤＮＡ解旋酶全长ｃＤＮＡ，将其命名为ＡＰＤＨ１。进一步，构建正义表达载体，转化棉花。获得的转基因棉花植株可以在０．４５％的盐碱地正常出苗、开花和吐絮，而非转基因棉花则不能出苗或者在生长过程中死亡。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种克隆的罗布麻ＤＮＡ解旋酶基因ＡＰＤＨ１，其特征在于它具有下述所示的核苷酸序列：１ａｔｔｃｔｔｇｔｇｃｇａａａａｃｃｔｔｔｃｔｔａｔｃｃａｃｃｔｔａｔｃｔａｔａｔｃｔｃｔｃｃａｔｃｃｔｃａａｃａｔｔａｔ６１ａｇｃｔｃｇｇｔｃａａｃａａｇｃａｔｇｇｃｃａｃａａｃｔａｃｔｔｃｇｇｇｇｃｃｇｇｃｔａａｔｃｇｔａｇｇｇｇａａｃｃｇｔ１２１ａａｔｃｇａｃｇａｔａａｇｃｔｇｇｔｃｔｔｔｇａａａｃｇａｃｃｇａａｇｇａｇｔｃｇａｇｇｃｃａｔｔａｃｃｔｃｃｔｔｃａａ１８１ｔｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔａａａａｇａｇｇａｔｔｔａｃｔｃｃｇｔｇｇｔａｔｃｔａｔｇｃｔｔａｃｇｇａｔｔｃｇａａａａｇｃｃ２４１ｔｔｃｃｇｃｔａｔａｃａａｃａｇｃｇａｇｃｇｇｔａａｔｇｃｃｔａｔｃａｔａｃａｇｇｇｔｃｇａｇａｔｇｔａａｔｔｇｃａｃａ３０１ａｇｃｔｃａａａｇｔｇｇｔａｃｇｇｇｔａａｇａｃｃａｇｃａｔｇａｔｔｇｃｃｃｔｔａｃａｇｔａｔｇｃｃａｇｇｔａｇｔｔｇａ３６１ｔａｃｔｔｃｇｇｔｇｃｇｔｇａａｇｔｃｃａａｇｃａｔｔａａｔａｃｔｇｔｃａｃｃｔａｃｔａｇａｇａｇｃｔｇｇｃｇａｃｔｃａ４２１ｇａｃａｇａａａａｇｇｔａａｔｔｃｔｇｇｃａａｔｔｇｇｔｇａｔｃａｔａｔａａａｔａｔｔｃａａｇｃｔｃａｔｇｃａｔｇｃａｔ４８１ａｇｇｔｇｇｃａａｔｔｃｔｇｔｃｇｇｔｇａａｇａｔａｔａｃｇｇａａａｃｔａｇａｇｃａｔｇｇｔｇｔａｃａｃｇｔｃｇｔｃａｇ５４１ｔｇｇａａｃｔｃｃａｇｇｃｃｇｔｇｔｇｔｇｔｇａｃａｔｇａｔｔａａａａｇｇｃｇａａｇｔｔｔｇｃｇａａｃｔｃｇａｇｃａａｔ６０１ｃａａｇｔｔａｃｔｔａｔｔｃｔｃｇａｔｇａａａｇｔｇａｔｇａａａｔｇｔｔａｇｇｃａｇａｇｇｔｔｔｃａａａｇａｔｃａｇａｔ６６１ａｔａｔｇａｔｇｔｃｔａｃａｇａｔａｔｃｔｇｃｃｔｃｃｇｇａｃｃｔａｃａｇｇｔａｔｇｃｔｔｇａｔａｔｃａｇｃｔａｃｃｃｔ７２１ｔｃｃａｃａｔｇａａａｔｔｃｔｃｇａｇａｔｇａｃｔｔｃｃａａｇｔｔｔａｔｇａｃｔｇａａｃｃｔｇｔｃａａｇａｔｃｃｔａｇｔ７８１　ｇａａａｃｇａｇａｔｇａａｔｔｇａｃｔｃｔｇｇａｇｇｇｇａｔｃａａｇｃａｇｔｔｃｔｔｔｇｔａｇｃｃｇｔａｇａｇａａｇｇａ８４１ａｇａｔｔｇｇａａｇｔｔｔｇａｔａｃａｃｔｃｔｇｔｇａｃｃｔｃｔａｔｇａｃａｃａｃｔｃａｃａａｔａａ　ｃａｃｔｇｇｃｇｇｔ９０１ｇａｔａｔｔｔｔｇｃａａｔａｃｇａａｇｃｇｔａａｇｇｔｃｇａｃｔｇｇｔ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：沈法富，韩秀兰，于元杰，尹承佾，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：37[]