一种女贞子多酚及其生产方法技术

本发明专利技术提供了一种新的女贞子多酚，还提供了女贞子多酚的生产方法，包括母液制备、女贞子多酚粗品制备、纯化等步骤，本发明专利技术填补了相关技术和产品的空白。运用本发明专利技术方法采用新鲜、无需干燥的女贞子能够低成本、高效率地生产女贞子多酚，纯度高达91.5%，得率可达到0.054%。本发明专利技术的面世可以使我国丰富的女贞子资源得到充分利用，而且低成本、效率高，本发明专利技术为人们在保健领域提供了一种新的、作用巨大、无毒副作用的天然产品，这种产品并可以运用到其他相关领域，具有良好的市场前景。

A Ligustrum polyphenol and its production method

The invention provides a new polyphenols of Ligustrum lucidum seed, and provides a production method for polyphenols of Ligustrum lucidum seed, including mother liquid preparation, Ligustrum lucidum polyphenols crude preparation, purification and other steps, which fills gaps in related technologies and products. The fresh and dry dried Fructus Ligustri lucidum can produce the polyphenols of Ligustrum lucidum seed with low cost and high efficiency, and its purity is up to 91.5%, and the yield is 0.054%. The invention can make available rich privet resources of our country has made full use of, and low cost, high efficiency, the invention provides a kind of new natural products, great effect and no toxic side effect in the health field, and this product can be applied to other related fields, with good market prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种女贞子多酚及其生产方法
本专利技术涉及生物提取领域，具体涉及一种女贞子多酚及其生产方法。
技术介绍
植物多酚是一类分子结构中包含多个酚羟基的化合物，是很好的氢或电子给予体，具有很强的消除自由基作用，对自由基相关的肿瘤、突变、病毒和糖尿病有一定预防作用，防止自由基与生物膜脂质反应导致的膜结构异常，保护细胞正常功能。植物多酚在植物和食品中分布广泛，因此受到天然药物化学和食品科学领域的重点关注，成为近年研究热点之一。关于植物多酚的生物活性和保健作用已有许多研究成果。研究表明，绿茶多酚对氧化应激造成的DNA损伤具有预防和保护作用；儿茶素EGCG能抑制DNA甲基转移酶表达，预防孕妇糖尿病造成的胎儿神经管缺陷；药用天竺葵气生根中提取的多酚对典型流感病毒有抑制作用；苹果多酚在2型糖尿病中能提高胰岛素效能；胡桃多酚能降低氧化应激水平，防止细胞毒作用，对脾免疫细胞的增殖具有显著的促进作用，同时提高免疫细胞因子和颗粒酶水平。由于多酚具有显著的保健作用，MZujko在波兰开展了为期3年的全国性膳食多酚摄入量调查。通过从波兰全国多中心健康调查数据库随机抽取6661名年龄为20-74的成年人，确定了96种含植物多酚的食物，记录折算每天的膳食多酚摄入量。结果显示男性平均摄入量为1172mg/d，女性为1031mg/d。目前，分离和鉴定植物多酚的手段有柱层析法、高效制备液相色谱、高效薄层色谱、核磁共振、电喷雾质谱、衍生化质谱等。MartinoForino等用硅胶柱层析和反相硅胶柱层析，从枸杞粗提物中分离得到具有抗氧化活性化合物，经核磁共振和质谱分析，确定其结构为阿魏酰酪氨二聚体。JustinJ.J.vanderHooft等研究大质量分辨率多级质谱在多酚结构研究中的应用。基于分子的裂解树关系，采用傅里叶变换快速处理离子碎片信息，可以从复杂的混合样品中识别区分多酚及其代谢物。SunYanguo用液质联用（配置二极管阵列检测器和正离子电喷雾质谱检测器）快速鉴定抱茎獐牙菜中的多酚C-葡萄糖苷。用120u和150u特征损耗谱对抱茎獐牙菜提取物进行中性丢失扫描，结合在线紫外光谱和二级、三级质谱，能区分各种多酚C-葡萄糖苷。结果发现了6种多酚苷，并首次从提取物中发现了异芒果苷和1,6,7-三羟基-2-C-氧杂蒽酮葡萄糖苷。Actis-GorettaLucas等报导了衍生化结合质谱法分析人尿液中表儿茶素硫酸化代谢产物。以三甲基硅烷基重氮甲烷为甲基化试剂，将尿样中的表儿茶素代谢产物转化为3-O-甲基化代谢产物，然后以高分辨率质谱进行分析，可以确定硫酸化基团在表儿茶素中的位置。由于O-甲基化对不同硫酸化负离子的电荷离域影响不同，进而在诊断离子的作用下影响裂解规律，由此可以区别鉴定硫酸化位置异构体。研究结果表明，硫酸化代谢作用主要发生在表儿茶素的5-和7-羟基上。EikeReich等报导了高效薄层色谱法用于绿茶和绿茶提取物的鉴别。以甲苯、丙酮、甲酸(9:9:2)为流动相，硅胶60为固定相，能分离鉴别样品中的多酚类成分，从而区分绿茶产地和等级。女贞子作为保健药物在中国已经沿用了数千年。中国老百姓通过自身经验总结出了这种传统药物的保健作用。但女贞子在应用方面却缺乏市场，导致供过于求和资源浪费，现状令人惋惜。原因在于药物活性成分结构及药理性质未能充分阐明，不符合中药现代化理念，在全球化背景下，在与其它保健药物的市场竞争中处于劣势，不能广泛应用。中国专利ZL200710132085.9公开了一种茶多酚制备工艺，包括逆流提取、浓缩、精制、转溶、过滤、浓缩、干燥等步骤；中国专利CN105646428A也公开了一种茶多酚的生产工艺，包括热水浸提茶叶、过滤、萃取、浓缩、萃取、水洗、浓缩、喷雾干燥等步骤。但是，女贞子多酚及其生产方法却未见公开。随着女贞子和植物多酚研究的深入，二者生物活性的相似之处逐渐明朗，但有关女贞子多酚的研究尚未开展。因此，从女贞子中提取多酚，鉴定其化学结构，有助于充分开发女贞子资源，为保健应用提供科学依据，具有良好的社会经济效益和创新意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种女贞子多酚及其低成本、高效率的生产方法，以填补相关技术和产品的空白。为实现上述目的，本专利技术提供了一种生产女贞子多酚的方法，其特征在于包括如下步骤：1）母液制备取新鲜的女贞子，加入女贞子质量0.25~0.4倍的氯化钠混匀，在氩气氛下共同捣烂后，按照体积毫升数是所述女贞子质量克数的0.7-1.0倍加入预冷至0~4℃的脱氧甲醇，0~4℃浸提2-4小时后，过滤，取滤渣再用体积毫升数与所述女贞子质量克数相等的、体积百分比浓度为50%的脱氧甲醇溶液常温浸提2-4小时，过滤，弃去滤渣，合并前后两次滤液，减压于－0.1MPa，40-50℃旋转蒸发除去所述脱氧甲醇，得母液；2）女贞子多酚粗品制备向步骤1）得到的母液中加入所述女贞子质量0.075-0.1倍的吸附树脂，搅拌均匀，0~4℃吸附2-12小时，倾出弃去上层液体，下层树脂层用脱氧纯化水洗涤1-4次，除去异物杂质，直至洗涤水近于无色，将树脂装入层析柱中，依次用体积毫升数为所述大孔吸附树脂质量克数8/3~4倍的、体积百分比浓度为5%、10%、20%的脱氧甲醇溶液洗脱，选取20%甲醇溶液洗脱液于-0.1MPa，40-50℃下减压旋转浓缩后，真空干燥得女贞子多酚粗品，－20℃保存；3）纯化采用凝胶层析法纯化；取步骤2）得到的多酚粗品，溶于体积毫升数为所述多酚粗品质量克数4倍的、体积百分比浓度为40%的脱氧甲醇溶液中，超声波振荡使溶液均匀，注入层析柱中，依次用所述40%脱氧甲醇溶液体积50倍的脱氧水、50倍的体积百分比浓度为10%脱氧甲醇溶液、100倍的体积百分比浓度为20%脱氧甲醇溶液洗脱，分部份收集洗脱液，每份20mL，点样于定性滤纸上，吹干后于紫外灯下检视，取有荧光成分的洗脱液部分合并，减压于-0.1MPa,40-50℃下旋转蒸发浓缩，浓缩液置于真空干燥箱内减压至－0.1MPa下常温干燥；重复纯化2次，得女贞子多酚纯品。优选地，上述所述的生产女贞子多酚的方法所包括的步骤为：1）母液制备取新鲜的女贞子，加入女贞子质量0.25倍的氯化钠混匀，在氩气氛下共同捣烂后，按照体积毫升数是所述女贞子质量克数的0.7倍加入预冷至0~4℃的脱氧甲醇，4℃浸提4小时后，过滤，取滤渣再用体积毫升数与所述女贞子质量克数相等的、体积百分比浓度为50%的脱氧甲醇溶液常温浸提2小时，过滤，弃去滤渣，合并前后两次滤液，减压于－0.1MPa，40-50℃旋转蒸发除去所述脱氧甲醇，得母液；2）女贞子多酚粗品制备向步骤1）得到的母液中加入所述女贞子质量0.075倍的吸附树脂，搅拌均匀，4℃吸附12小时，倾出弃去上层液体，下层树脂层用脱氧纯化水洗涤1-4次，除去异物杂质，直至洗涤水近于无色，将树脂装入层析柱中，依次用体积毫升数为所述大孔吸附树脂质量克数8/3倍的、体积百分比浓度为5%、10%、20%的脱氧甲醇溶液洗脱，选取20%甲醇溶液洗脱液于-0.1MPa，50℃下减压旋转浓缩后，真空干燥得女贞子多酚粗品，－20℃保存；3）纯化采用凝胶层析法纯化；取步骤2）得到的多酚粗品，溶于体积毫升数为所述多酚粗品质量克数4倍的、体积百分比浓度为40%的脱氧甲醇溶液中，超声波振荡使溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产女贞子多酚的方法，其特征在于包括如下步骤：1）母液制备取新鲜的女贞子，加入女贞子质量0.25~0.4倍的氯化钠混匀，在氩气氛下共同捣烂后，按照体积毫升数是所述女贞子质量克数的0.7‑1.0倍加入预冷至0~4℃的脱氧甲醇， 0~4℃浸提2‑4小时后，过滤，取滤渣再用体积毫升数与所述女贞子质量克数相等的、体积百分比浓度为50%的脱氧甲醇溶液常温浸提2‑4小时，过滤，弃去滤渣，合并前后两次滤液，减压于－0.1MPa，40‑50℃旋转蒸发除去所述脱氧甲醇，得母液；女贞子多酚粗品制备向步骤1）得到的母液中加入所述女贞子质量0.075‑0.1倍的吸附树脂，搅拌均匀，0~4℃吸附2‑12小时，倾出弃去上层液体，下层树脂层用脱氧纯化水洗涤1‑4次，除去异物杂质，直至洗涤水近于无色，将树脂装入层析柱中，依次用体积毫升数为所述大孔吸附树脂质量克数8/3~4倍的、体积百分比浓度为5%、10%、20% 的脱氧甲醇溶液洗脱，选取20%甲醇溶液洗脱液于‑0.1MPa， 40‑50℃下减压旋转浓缩后，真空干燥得女贞子多酚粗品，－20℃保存；纯化采用凝胶层析法纯化；取步骤2）得到的多酚粗品，溶于体积毫升数为所述多酚粗品质量克数4倍的、体积百分比浓度为40% 的脱氧甲醇溶液中，超声波振荡使溶液均匀，注入层析柱中，依次用所述40%脱氧甲醇溶液体积50倍的脱氧水、50倍的体积百分比浓度为10%脱氧甲醇溶液、100倍的体积百分比浓度为20%脱氧甲醇溶液洗脱，分部份收集洗脱液，每份20mL，点样于定性滤纸上，吹干后于紫外灯下检视，取有荧光成分的洗脱液部分合并，减压于‑0.1MPa ,40‑50℃下旋转蒸发浓缩，浓缩液置于真空干燥箱内减压至－0.1MPa下常温干燥；重复纯化2次，得女贞子多酚纯品。...

【技术特征摘要】
1.一种生产女贞子多酚的方法，其特征在于包括如下步骤：1）母液制备取新鲜的女贞子，加入女贞子质量0.25~0.4倍的氯化钠混匀，在氩气氛下共同捣烂后，按照体积毫升数是所述女贞子质量克数的0.7-1.0倍加入预冷至0~4℃的脱氧甲醇，0~4℃浸提2-4小时后，过滤，取滤渣再用体积毫升数与所述女贞子质量克数相等的、体积百分比浓度为50%的脱氧甲醇溶液常温浸提2-4小时，过滤，弃去滤渣，合并前后两次滤液，减压于－0.1MPa，40-50℃旋转蒸发除去所述脱氧甲醇，得母液；女贞子多酚粗品制备向步骤1）得到的母液中加入所述女贞子质量0.075-0.1倍的吸附树脂，搅拌均匀，0~4℃吸附2-12小时，倾出弃去上层液体，下层树脂层用脱氧纯化水洗涤1-4次，除去异物杂质，直至洗涤水近于无色，将树脂装入层析柱中，依次用体积毫升数为所述大孔吸附树脂质量克数8/3~4倍的、体积百分比浓度为5%、10%、20%的脱氧甲醇溶液洗脱，选取20%甲醇溶液洗脱液于-0.1MPa，40-50℃下减压旋转浓缩后，真空干燥得女贞子多酚粗品，－20℃保存；纯化采用凝胶层析法纯化；取步骤2）得到的多酚粗品，溶于体积毫升数为所述多酚粗品质量克数4倍的、体积百分比浓度为40%的脱氧甲醇溶液中，超声波振荡使溶液均匀，注入层析柱中，依次用所述40%脱氧甲醇溶液体积50倍的脱氧水、50倍的体积百分比浓度为10%脱氧甲醇溶液、100倍的体积百分比浓度为20%脱氧甲醇溶液洗脱，分部份收集洗脱液，每份20mL，点样于定性滤纸上，吹干后于紫外灯下检视，取有荧光成分的洗脱液部分合并，减压于-0.1MPa,40-50℃下旋转蒸发浓缩，浓缩液置于真空干燥箱内减压至－0.1MPa下常温干燥；重复纯化2次，得女贞子多酚纯品。2.如权利要求1所述的生产女贞子多酚的方法，其特征在于所包括的步骤为：1）母液制备取新鲜的女贞子，加入女贞子质量0.25倍的氯化钠混匀，在氩气氛下共同捣烂后，按照体积毫升数是所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨裕启，刘元胜，方学勤，
申请(专利权)人：湖北理工学院，
类型：发明
国别省市：湖北,42