固相细胞裂解和捕获平台制造技术

本发明专利技术提供了涉及从宿主细胞提取或提取和分离细胞组分的容器、方法和试剂盒。更具体地，本发明专利技术容器包含口、包含侧壁结构和底部的内表面、体积、裂解试剂；和在一些情况中，受支持的捕获配体。还提供了使用本文描述的容器从宿主细胞提取或提取和分离细胞组分的方法和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
本专利技术涉及从宿主细胞分离细胞组分，如多肽和核酸。重组DNA技术的最近进展使得可能在宿主细胞中产生大量肽。然而，从宿主细胞提取和分离靶肽、蛋白质、核酸或者其他细胞组分到目前仍然是多步骤方法，包括首先裂解，然后一个或多个随后步骤用以从其他细胞组分分离靶产物。多种技术已经用于裂解细胞，每种技术都具有某些优点和缺点。例如，已经使用了超声处理、弗氏压碎器、匀浆、研磨、冷冻-解冻裂解，和多种其他物理或机械裂解细胞的方法；参见，例如，Bollag & Edelstein，ProteinExtraction，Protein Methods，27-43(1993)；Schutte & Kula，Biotech.andApp.Biochem.，12559-620(1990)；和Hughes，等人，Methods inMicrobiology，5B1-54(1969)。然而，机械裂解需要可能不易得到的专门设备，此外，超声处理也产生热，其对于某些蛋白质是有害的。酶和去污剂也已经用于酶促或化学地裂解细胞；见，例如，Hughes，等人，Methodsin Microbiology，5B1-54；Andrews & Asenjo，Trends in Biotech.，5273-77(1987)；Wiseman，Process Biochem.，63-65(1969)；和Wolska-Mitaszko，等人，Analytical Biochem.，116241-47(1981)。然而，酶或者去污剂溶液的加入导致含有待裂解细胞的溶液的稀释，此外，所希望的产物必须仍然与所得膜碎片、不希望的蛋白质和其他细胞残渣分离。类似地，多种亲和捕获方法已经用于纯化肽、蛋白质和核酸。美国专利号4,569,794、5,310,663和5,594,115描述了包括组氨酸残基的金属螯合肽的用途，和所述肽在蛋白质纯化中的用途。美国专利号4,703,004、4,851,341、5,011,912和6,461,154描述了抗原性FLAG肽，和含有所述肽的蛋白质的纯化。美国专利号5,654,176描述了谷胱甘肽-S-转移酶用于纯化蛋白质的用途。美国专利号5,998,155描述了抗生物素蛋白/生物素捕获系统的用途。在每一种这些实例中，靶产物上的亲和标记或者序列与相应配体的相互作用导致靶产物的“捕获”。然后可以洗除未结合的组分和其他细胞残渣，留下结合到标记-或者序列-特异配体的靶产物。然后用特定洗脱剂释放结合的靶产物，导致纯化的靶产物。不利地，与首先裂解宿主细胞然后纯化靶产物有关的多个步骤增加了分离产物，特别是高通量应用中分离产物所需的成本和时间。专利技术概述因此，在本专利技术的多个方面，提供了裂解细胞和捕获肽、蛋白质、核酸或者其他细胞组分的相对快速、有效的方法。有利地，本专利技术的方法和容器不需要离心细胞溶液以除去可溶的材料、在额外的去污剂裂解液体或者酶抑制剂中吹吸(pipette)(从而稀释原来的含有细胞的溶液)，或者进行随后的纯化步骤。因此，简言之，本专利技术涉及从宿主细胞提取细胞组分的容器。所述容器含有口、内表面，和至少一部分内表面上裂解试剂的涂层(coating)，其中当含有宿主细胞的液体悬浮物导入容器中时，涂层中裂解试剂的量足够形成能够裂解宿主细胞的裂解溶液。在一个实施方案中，经涂布的内表面的面积与容器的体积之比小于约4mm2/μl。另一方面，本专利技术涉及用于从宿主细胞提取和分离细胞组分的容器。该容器含有口、内表面、体积、裂解试剂和受支持的捕获配体。口作为向容器导入液体的入口和从容器除去液体的出口，捕获配体在容器中的一个位置受到支持，当含有完整宿主细胞或者固体细胞组分的液体悬浮物通过容器口导入容器时，所述位置允许捕获配体接触完整宿主细胞或者从其来源的固体细胞组分。另一方面，本专利技术涉及用于从宿主细胞提取细胞组分的多孔板，其中多孔板的至少一个孔含有裂解试剂。裂解试剂(i)涂在孔的至少一部分内表面上，或者(ii)为孔中所含的材料块的形式。另一方面，本专利技术涉及从宿主细胞提取细胞组分的方法。该方法包括(a)将含有宿主细胞的液体悬浮物导入容器，所述容器具有口、内表面、体积、至少一部分内表面上的裂解试剂涂层，经涂布的内表面的面积与容器的体积之比小于约4mm2/μl，和(b)裂解容器中的宿主细胞以释放细胞组分和形成细胞残渣。另一方面，本专利技术涉及从宿主细胞提取和分离细胞组分的方法。该方法包括(a)将含有宿主细胞的液体悬浮物导入容器，该容器具有口、内表面、体积、裂解试剂，和受支持的捕获配体，其中口作为导入液体的入口和从容器除去液体的出口，(b)裂解容器中的宿主细胞以释放细胞组分和形成固态细胞残渣；和(c)在固态细胞残渣存在下用捕获配体捕获细胞组分。在另一方面，本专利技术涉及从宿主细胞提取和分离细胞组分的方法。该方法包括(a)将含有宿主细胞的液体悬浮物导入容器，该容器具有口、内表面、体积、裂解试剂，和受支持的捕获配体，其中口作为向容器导入液体的入口，(b)裂解容器中的宿主细胞以释放细胞组分和形成固态细胞残渣；(c)在固态细胞残渣存在下用捕获配体捕获细胞组分；(d)从捕获配体释放细胞组分，和(e)回收释放的细胞组分。另一方面，本专利技术涉及用于从宿主细胞提取和分离细胞组分的试剂盒。该试剂盒包含本专利技术的容器，和从宿主细胞提取和分离细胞组分的使用说明。在另一实施方案中，该试剂盒还含有用于从宿主细胞提取和/或分离细胞组分的额外试剂，和/或用于测定或检测捕获的细胞组分的试剂。另一方面，本专利技术涉及制备用于从宿主细胞提取细胞组分的容器的方法，该方法包括将容器的内表面与含有裂解试剂的液体接触并干燥液体以在容器的内表面上形成裂解试剂的吸附层。本专利技术的其他目标和特征将部分在下文中是显然的，部分在下文中指出。附图简述附图说明图1描绘了从HIS-SelectTM高容量板洗脱的物质的SDS-PAGE凝胶图像。裂解试剂在板的表面上干燥并加入0.1ml细胞。每个泳道的含量在表1中描述。该图表明在粗裂解细胞的存在下蛋白质可以结合到板。在这些条件下可以结合增量蛋白质并用不同试剂洗脱。图2描绘了从HIS-SelectTM高容量板洗脱的物质的SDS-PAGE凝胶图像。将裂解试剂(0.05ml)在板表面上干燥，并向每孔加入0.1ml细胞或者纯蛋白质。表3中描述了每个泳道的含量。该图表明存在和不存在粗裂解细胞时可以结合蛋白质。可以在这些条件下结合和洗脱增量蛋白质。图3描绘了从HIS-SelectTM高容量板洗脱的物质的SDS-PAGE凝胶图像。将裂解试剂(0.1ml)在板表面上干燥，并向每孔加入0.1ml细胞或者纯蛋白质。表3中描述了每个泳道的含量。该图表明存在和不存在粗裂解细胞时可以结合蛋白质。可以在这些条件下结合和洗脱增量蛋白质。图4描绘了使用ANTI-FLAGM2高灵敏性板，来自酶免疫检测测定的校正吸收(A450)读数。图上具条纹的条形代表具有DYKDDDDK(SEQ.ID.NO.1)标记的蛋白质的结果；具有水平线的条形代表具有DYKDDDDK(SEQ.ID.NO.1)/his标记的蛋白质的结果；白色条形代表具有his-标记的蛋白质的结果。所用的裂解试剂在实施例4中本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于从宿主细胞提取细胞组分的容器，所述容器具有口、内表面、体积Ｖ和至少一部分内表面上裂解试剂的涂层，所述内表面包含侧壁结构和底部，当含有宿主细胞的液体悬浮物导入容器时，涂层中裂解试剂的量足够形成能够裂解宿主细胞的裂解溶液，经涂布的内表面的面积ＳＡ与体积Ｖ的比值小于约４ｍｍ↑［２］／μｌ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：WK卡普尔，RJ梅海伊，EA詹金斯，
申请(专利权)人：西格玛奥尔德利希公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]