心营养素调节干细胞增殖的用途制造技术

提供促进干细胞增殖的方法，包括将所述细胞与心营养素－１（ＣＴ－１）接触。所述方法还可以包括将所述干细胞与一种或更多种促进所述干细胞分化的干细胞调节剂接触。也提供抑制干细胞增殖的方法，包括将所述细胞与一种或更多种ＣＴ－１抑制剂接触。所述方法可用于体外和体内促进或抑制干细胞增殖。也提供所述方法在替代损伤或缺陷组织或在抑制不适当细胞增殖的治疗性应用。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及干细胞治疗剂领域，具体涉及调节干细胞增殖的方法。
技术介绍
干细胞是未分化的或未成熟的细胞，能产生多种特化细胞类型并最终产生终末分化的细胞。与任何其它细胞不同，它们能够自我更新，使得当需要时可以产生基本上无限供应的成熟细胞类型。由于这种自我更新能力，干细胞可治疗性的用于再生和修复组织。干细胞具有向多种临床状况提供益处的潜力。很多潜在应用的限制是获得足量靶细胞并刺激这些干细胞终末分化成成熟组织特异性细胞。成年骨髓和很多其它身体组织被认为含有多能干细胞群体，它们可以分化成多种表型的细胞。例如，最近已报道成年小鼠心脏内的多能干细胞样群体(SP)(Hierlihy，A.M.et al.，(2002)FEBS Letters，530239-243)。在减缓生长的条件下，这些细胞被激活并分化成心肌细胞。最近已描述(美国专利申请20030054973)通过施用来源于心脏或其它组织的成体干细胞和细胞因子来修复或再生损伤心肌的方法，这些细胞因子如干细胞因子(SCF)、粒细胞-集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、基质细胞来源因子-1(stromal cell-derived factor-1)、steel因子、血管内皮细胞生长因子、巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞刺激因子或白介素-3。已知细胞因子在机体内的细胞间通讯中起关键作用，并充当能够调节生长和分化的细胞介质。已经描述了细胞因子促进干细胞分化的用途。例如美国专利申请20030027330描述了通过将干细胞和发育中或发育后异体或异种细胞、任选的和细胞因子、生长因子或趋化因子共培养，从干细胞产生分化的乳腺细胞或组织的方法；美国专利申请20030103951描述了通过施用间充质干细胞而再生心脏肌肉的方法，所述干细胞可以被遗传修饰以产生对分化重要的蛋白质，如细胞因子、生长因子、生肌因子和转录因子；美国专利申请20020142457描述了使用多种细胞因子和转录因子使具有分化成心肌细胞潜力的细胞增殖并调节它们分化成心肌细胞的方法。心营养素-1(cardiotrophin)(CT-1)是IL-6细胞因子家族的成员，并以相对心脏限制性方式表达。已克隆编码人和小鼠CT-1的基因(Pennica，D.，et al.，(1996)Cytokine，8183-189；Pennica，D.，et al.，(1995)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，921142-1146)。开始被称为心脏肥大因子(cardiac hypertrophy factor，CHF)，CT-1已经表明可诱导心脏肥大，并且已经描述CT-1及其拮抗剂用于心衰、心律不齐或影响收缩的疾病或周围神经病(见美国专利NO.5,534,615；5,571,675；5,571,893；5,624,806和5,679,545)，以及在诊断和治疗癌症中的用途(美国专利申请20020146707)。也已经报道在缺血前施用CT-1可保护成年大鼠心脏免受损伤(Liao，Z.，et al.，(2002)Cardiovasc.Res.，53902-910)。提供这些背景信息的目的是准备本申请人认为与本专利技术可能相关的已知信息。不必然意味着、也不应解释为任何前述信息构成针对本专利技术的现有技术。本专利技术的一个目的是克服现有技术的缺点。主权利要求的组合实现了上述目的，从属权利要求进一步公开了本专利技术的有利
技术实现思路
本专利技术涉及干细胞治疗剂领域，具体涉及调节干细胞增殖的方法。根据本专利技术提供促进干细胞增殖的方法，包括将所述干细胞与含心营养素-1氨基酸序列的多肽或其类似物、衍生物、变体或活性片段或编码所述多肽的多核苷酸接触。在不以任何方式限制本专利技术的替代实施方案中，提供抑制干细胞增殖的方法，包括将所述干细胞与一种或更多种心营养素-1抑制剂接触。根据本专利技术的另一方面，提供促进干细胞增值和分化的方法，包括将所述干细胞与含心营养素-1氨基酸序列的多肽或其类似物、衍生物、变体或活性片段或编码所述多肽的多核苷酸与一种或多种干细胞调节剂接触，其中所述一种或多种干细胞调节剂是多肽或编码多肽的多核苷酸。根据本专利技术的另一方面，提供分离的多肽、编码所述多肽的多核苷酸以及含所述多核苷酸的载体，所述多肽是心营养素-1的类似物、衍生物、变体或活性片段，其中所述多肽能促进干细胞增殖。根据本专利技术的另一方面，提供促进哺乳动物中心脏干细胞增殖的方法，包括向所述哺乳动物施用有效量的含心营养素-1氨基酸序列的多肽或其类似物、衍生物、变体或活性片段，或编码所述多肽的多核苷酸。根据本专利技术的另一方面，提供抑制哺乳动物中心脏干细胞增殖的方法，包括向所述哺乳动物施用有效量的心营养素-1抑制剂。根据本专利技术的另一方面，提供修复或再生哺乳动物中心脏组织的方法，包括向所述哺乳动物施用有效量的含心营养素-1氨基酸序列的多肽或其类似物、衍生物、变体或活性片段或编码所述多肽的多核苷酸，其中所述多肽能促进心脏干细胞增殖。该专利技术简述不必一定要描述本专利技术的所有必要特征，但本专利技术也可以位于所描述特征的子组合中。附图说明参考以下附图，下面的描述将可以使本专利技术的这些和其它特征更明显图1表示本专利技术使用的腺病毒构建体ad-CT-1的示意图。图2A和2B表示经注射盐水或心营养素-1处理、随后用Hoechst 33342染料染色的心脏细胞悬液的FACS分析。图2C是证明在感染H9C2细胞中CT-1腺病毒表达的Western印迹。印迹中示出了约24.5kDa的CT-1蛋白。图2D表示对照注射后24小时心脏细胞FACS分析获得的对照结果。图2E表示注射腺病毒后24小时心脏细胞FACS分析的对照结果。图3A和B表示在注射ad-CT-1后t＝24、48、72和96小时时ad-CT-1对小鼠心脏的作用的时程结果。图4的结果表示心脏内注射后4天恢复期间在AdCT-1处理心脏中发现的SP细胞相对数目。这些数据相对于每个时间点从对照注射心脏获得的数据进行标准化。由相当Ad载体组成的对照注射不编码CT-1。图5A、B和C表示心内施用ad-CT-1在时间点24小时、48小时、72小时和96小时对来自骨骼肌(图5a)、骨髓(图5b)和肝脏(图5c)的SP细胞的结果。图6表示对照和CT-1注射小鼠心脏后3周、4个月和1年时间点的FACS分析结果，提示CT-1对所述小鼠心脏可能的年龄依赖作用。图7表示的结果提示CT-1加速成年心脏干细胞的分化。表达组成型表达的GFP转基因的小鼠注射CT-1。24小时后收集心脏，将来自这些心脏的分离SP细胞与正常原代心肌细胞共培养。结果证实了标记GFP的SP细胞向连接蛋白-43阳性心肌细胞的明显(robust)转变。图8用图解说明确认心内注射Ad-CT-1是否能影响受损骨骼肌修复所遵照的试验程序。图9的结果表示对照注射、心脏毒素(ctx)注射或同时注射心脏毒素和Ad-CT-1之后约6天的损伤程度。在这些试验中，向1月龄小鼠后肢的右胫骨前肌(TA)注射10微摩尔心脏毒素。对侧腿用作对照。另一组小鼠中，心内注射心脏毒素之后施用CT-1。6天后，解剖TA肌并冷冻用于切片。用苏木精/伊红染色肌肉切片，以显示膜和结构成分。图10表示用α-辅肌动蛋白抗体染色肌肉切片的本文档来自技高网...

【技术保护点】
促进干细胞群体增殖的方法，包括将所述干细胞与含心营养素－１氨基酸序列的多肽或其类似物、衍生物、变体或活性片段或编码所述多肽的多核苷酸接触。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：林恩梅吉尼，
申请(专利权)人：渥太华健康研究所，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]