免疫系统的激活和抑制技术方案

公开了使用ＮＦ－κ　　Ｂ诱导剂激活免疫应答、使用ＮＦ－κ　　Ｂ抑制剂诱导无反应性应答、以及通过给予ＮＦ－κ　　Ｂ激活剂或抑制剂而抑制或激活免疫应答。ＮＦ－κ　　Ｂ抑制剂的例子包括Ｉκ　　Ｂα、ＰＳＩ、编码Ｉκ　　Ｂα的核苷酸序列、编码ＮＦ－κ　　Ｂ序列（如Ｒｅｌ　　Ｂ）的反义核酸以及抗ＮＦ－κ　　Ｂ抗体。ＮＦ－κ　　Ｂ诱导剂的例子包括ＮＩＫ、ＭＥＫＫ、ＩＫＫ２、ＴＲＲＦ２和Ｒｅｌ　　Ｂ。还公开了编码ＮＦ－κ　　Ｂ诱导剂和抑制剂的载体，例如腺病毒载体。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及应用NF-κB的诱导剂和抑制剂激活和抑制免疫系统，以及应用所述诱导剂和抑制剂治疗移植排斥、自身免疫病、变态反应、传染病和癌症。
技术介绍
抗原呈递是启动免疫应答的关键步骤，而人们认为树突细胞(DC)是原初T细胞最有效的抗原呈递细胞。这部分是由于它们高度表达MHC和共同刺激分子(Hart(1997)Blood 90，3245-3287)。然而，对于调节抗原呈递功能的生物化学途径所知甚少，这部分是由于难以转染DC。在本文中，本专利技术人使用IκB降解的抑制剂，即有效抑制NF-κB激活的PSI，显示消除DC诱导混合淋巴细胞反应的能力。抑制DC功能和消除抗原呈递的机制涉及下调节多个步骤，其中包括共同刺激分子(CD86和CD80)、II型HLA(DQ＞DR)以及细胞因子如IL-12。此外，暴露于所述DC的T细胞不能通过随后遇到正常DC而被刺激。这些结果指出NF-κB是阻断抗原呈递的有效靶。树突细胞在初次免疫应答应答呈递抗原到原初T细胞的过程中是非常重要的。它们是骨髓衍生的细胞，在20世纪70年代早期由Steinman和Cohn(1973)J.Exp.Med 179，1109首次描述。起初因为难以分离足够数量的树突细胞，因此对它们的研究遇到困难，但通过用GM-CSF和IL-4培养CD34+细胞或人类单核细胞，在体外产生一种DC亚群，部分克服了这个问题。这些培养的DC具有未成熟DC的表型，可以通过与TNFα或LPS一起孵育成熟成为高度表达MHC、CD80/86的细胞(Bender等(1996)J.Immunol.Methods 196，121；Romani等(1996)J.Immunol.Methods(1996)196，137；Reddy等(1997)Blood 90，3640)。从外周血中的集落形成后单位(post colony-forming unit)CD14+中间体也可以衍生DC。DC迁移到皮肤、粘膜、脾和胸腺中的外周位点。它们涉及多种临床上重要的过程，其中包括同种异体移植排斥、特应性疾病、自身免疫和抗肿瘤免疫。可以使用细胞因子，主要是GM-CSF、IL-4和TNFα，从CD34+干细胞或CD14+外周血单核细胞离体培养DC(Scabolsc等(1995)J.Immunol.154，5651-5661)。来自这些来源的DC都有免疫活性，并且能够摄入外源呈递的抗原、加工所述抗原并将其呈递给细胞毒性T细胞(Grabbe等(1995)Immunology Today 16，117-121；Girolomoni和Ricciardi-Castagnoli(1997)Immunology Today 18，102-104)。DC可以传递体内产生的抗原特异性肿瘤免疫(Kwak等(1995)Lancet 345，1016-1020)，而用肿瘤抗原离体脉冲处理自体DC，可以诱导可测量的抗肿瘤效应(Hsu等(1996)Nature Medicine 2，52-58)。可以使用肿瘤膜粗裂解物、纯化肽或肽片段，有效脉冲处理DC。在例如WO/00/26249中描述了来自患者的自体树突细胞的离体扩充、加载肽抗原和作为继承性免疫治疗的再输注。通过证明阻断抗原呈递下调节免疫应答并且可用于治疗疾病的动物模型，证实抗原呈递在产生免疫应答中的重要性。因此，已经使用鼠II类MHC的抗体治疗实验性变应性脑脊髓炎(Smith等(1994)Immunology 83，1)，而用抗体或CTLA4-Ig融合蛋白阻断CD80/86共同刺激分子在移植或关节炎的动物模型中是有益的(Lu等(1999)GeneTher.6，554-563)。这已经引起人们寻找可用于人类疾病或移植中的下调节抗原呈递的新途径。人门已经推测NF-κB涉及免疫系统。这一点在例如Baeueurle P.A.和Henkel T.的论文中有概述(Annual Reviews in Immunology，1994，第12卷，第141-179页)。然而，由于以前无法研究激活或失活NF-κB对抗原呈递细胞的效应，因而没有人证明NF-κB在免疫系统的激活和抑制中确实是关键性的。本专利技术人第一次证明了NF-κB在免疫应答中的关键作用。转录因子NF-κB象蛋白一样，其激活来自转录后修饰，以允许预先形成的转录因子从胞质转运到核。一种名为IκB的抑制剂蛋白的磷酸化和降解控制该转运，该抑制剂蛋白与NF-κB形成复合物，因此将其保留在胞质中。通过合适信号刺激细胞导致IκB的修饰，而IκB的修饰又导致它从NF-κB解离和/或降解。IκB蛋白与NF-κB的结合屏蔽了NF-κB的核定位信号(NLS)。根据细胞类型和细胞发育阶段用特定因子刺激细胞时，IκB受到修饰，无法结合NF-κB，导致NF-κB与IκB解离。NF-κB是一种异二聚体蛋白，由一个50kD亚基(p50)和一个65kD亚基(p65)组成。已经克隆了编码p50和p65的cDNA，并且显示所述cDNA在300个氨基酸的区上同源。最近已经克隆了NF-κB家族的另一成员Rel B，该成员是来自血清刺激的成纤维细胞的立即早期反应基因。p50和p65都能够形成同二聚体，但所述同二聚体的性质不同p50同二聚体具有强DNA结合物亲和性，但不能反式激活转录，p65同二聚体仅能微弱结合DNA，但能够反式激活。p50作为110kD前体(p110)的氨基末端部分合成，该前体没有DNA结合活性和二聚活性。所述羧基末端部分包含八个锚蛋白重复，这是一个在几种涉及细胞周期控制和分化的蛋白中发现的基序。已经鉴定了五个IκB家族成员IκBα、IκBβ、p105/IκBγ、p110/IκBΔ和IκBε(Baeuerle和Baltimore，Cell 1996，第87卷，第13-20页)。所有IκB样家族成员都包含多个锚蛋白重复，所述重复对于抑制NF-κB激活是必不可少的。本专利技术人已经发现在人巨噬细胞和类风湿性滑膜中炎症反应的许多关键特性依赖于转录因子NF-κB。本专利技术人已经研究了蛋白体抑制药物pSI，该药物最初描述为蛋白体胰凝乳蛋白酶样活性的抑制剂。已经发现许多促炎介质(如TNFα、IL-6、IL-2)的产生依赖于NF-κB(可受PCT/GB98/02753所公开的AdvIκBα的抑制)，而抗炎细胞因子和介质(即IL-10、IL-1受体拮抗物、IL-11)则不受影响。这提醒我们NF-κB准确区分这两类介质，这就提出问题考虑到炎症和免疫系统的密切关系，NF-κB在诱导免疫中到底起什么作用。本专利技术人首先研究了蛋白体抑制药物PSI的效应，该药物不需要使用基因治疗。已知该药物抑制IκB降解，因此抑制树突细胞免疫刺激功能中的NF-κB激活，所述激活是产生初次免疫应答的关键早期步骤。据报道使用PSI治疗单核细胞衍生的成熟DC，抑制它们在混合淋巴细胞反应中诱导T细胞增殖的能力。为阐明该效应的机制，进行细胞表面分析、细胞因子测定和共培养，这些研究提示阻断NF-κB使得免疫抑制机制可以在树突细胞和T细胞的相互作用中发挥作用。此外，本专利技术人已经证明所述改变导致无反应性应答性应答。也就是说，它们导致无法产生免疫应答，甚至在除去原始的抑制化合物后也是如此。本专利技术人也已经意识到NF-κB也可本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＮＦ－κＢ抑制剂或包含编码ＮＦ－κＢ抑制剂的核酸的载体在生产药物方面的应用，所述核酸与表达所述核酸所必需的调节元件有效连接，所述药物通过给予哺乳动物从而在哺乳动物体内抑制抗原呈递或诱导无变应性反应，其中还给予所述哺乳动物一种抗原性分子或编码一种抗原性分子的多核苷酸。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：B福克斯维尔，M菲尔德曼，
申请(专利权)人：玛蒂尔达和特伦斯肯尼迪风湿病学信托学会，
类型：发明
国别省市：GB[英国]