鹅重组Ⅰ、Ⅱ干扰素的制备方法技术

本发明专利技术提供的是鹅重组Ⅰ、Ⅱ型干扰素的制备方法。通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增编码鹅ＩＦＮ－α成熟蛋白及编码ＩＦＮ－γ成熟蛋白基因，对基因序列分别测序鉴定，将目的基因分别定向亚克隆至ｐＥＴ３０ａ原核表达载体，分别在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ中，进行诱导表达，并对融合表达的目的蛋白分别进行亲合层析纯化、分别定向亚克隆至ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ和ｐＭｅｌ　　ＢａｃＡ杆状病毒转移载体，转移载体与线性化的杆状病毒ＤＮＡ分别共转染昆虫细胞Ｓｆ９，重组病毒感染昆虫细胞，真核表达系统表达鹅ｍＩＦＮ－α与ｍＩＦＮ－γ。本方法得到的产品可作为鹅用抗病毒性疫病的药物及免疫佐剂增强鹅用疫苗的免疫效力。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
鹅重组Ⅰ、Ⅱ型干扰素的制备方法，其特征是：通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增编码鹅ＩＦＮ－α成熟蛋白及编码ＩＦＮ－γ成熟蛋白基因，对获得基因序列分别测序鉴定，将目的基因分别定向亚克隆至ｐＥＴ３０ａ原核表达载体，分别在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌ ｙｓＳ中，于３７℃ＩＰＴＧ终浓度１ｍＭ进行诱导表达，并对融合表达的目的蛋白分别进行亲合层析纯化；同时将目的基因分别定向亚克隆至ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ和ｐＭｅｌＢａｃＡ杆状病毒转移载体，利用重组杆状病毒转移载体与线性化的杆状病毒Ｄ ＮＡ分别共转染昆虫细胞Ｓｆ９获得重组杆状病毒，重组病毒感染昆虫细胞，真核表达系统表达鹅ｍＩＦＮ－α与ｍＩＦＮ－γ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王君伟，李洪涛，马波，秘晶纬，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]