多巴胺转运蛋白拟肽抑制剂及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种新的多巴胺转运蛋白拟肽抑制剂以及含有该抑制剂的药物组合物。本发明专利技术的该新型抑制剂对与多巴胺转运蛋白相关的神经精神性疾病（尤其是可卡因成瘾）有治疗作用，可特异性作用于多巴胺转运蛋白，竞争可卡因在多巴胺转运蛋白上的结合位点；能够透过血脑屏障，皮下注射后缓慢分布于脑内，且作用时间持久。动物实验发现本发明专利技术抑制剂可以拮抗可卡因成瘾。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物学领域。更具体地，本专利技术涉及新的多巴胺转运蛋白拟肽抑制剂以及含有该抑制剂的药物组合物。本专利技术的该新型抑制剂对与多巴胺转运蛋白相关的神经精神性疾病(尤其是可卡因成瘾)有治疗作用。
技术介绍
多巴胺转运蛋白是良好的药物靶点，一些成功用于治疗肥胖、小儿注意力缺乏症(ADHD)、抑郁症和帕金森病的化学药物是典型的多巴胺转运蛋白抑制剂，如上市的马吲哚(mazindol)，利他林(ritalin)，安非拉酮(bupropion)和进入临床实验的brasofensine等(Dutta，A.K.，Zhang，S.，Kolhatkar，R.&Reith，M.E.Dopamine transporter as target for drug development ofcocaine dependence medications.Eur.J.Pharmacol.479，93-106，2003)。 特别值得关注的是可卡因滥用是全球性社会和医学问题，尽管现在还无药可治，临床实验证明起效温和、作用时间长的多巴胺转运蛋白特异性抑制剂有望成为治疗药物(Gorelick，D.A.，Gardner，E.L.&Xi，Z.X.Agents indevelopment for the management of cocaine abuse.Drugs 64，1547-1573，2004)。多巴胺转运蛋白是12次跨膜蛋白，和去甲肾上腺素转运蛋白、五羟色胺转运蛋白等在结构、功能上存在同源性，且这类蛋白至今还没有解析出晶体结构。这些都制约了多巴胺特异性抑制剂的发展。在以可卡因和GBR为模板的药物设计中得到了多巴胺转运蛋白特异性抑制剂，但数量有限(Gorelick，D.A.，Gardner，E.L.&Xi，Z.X.Agents in development for the management of cocaine abuse.Drugs 64，1547-1573，2004)。综上所述，由于仍缺乏令人满意的多巴胺转运蛋白的抑制剂，因此本领域仍然迫切需要开发新的有效抑制多巴胺转运蛋白的抑制剂。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种可用作多巴胺转运蛋白特异性拟肽抑制剂的化合物及其应用。在本专利技术的第一方面，提供了一种下式I表示的抑制剂，或其药学上可接受的盐-----(I)式中，Xaa0是L-Phe、L-Fbz、或L-Bip；Xaa1是选自下组的氨基酸Ala、Ile、Leu、Phe、Pro、Trp、Tyr、Val；Xaa2是选自下组的氨基酸Ala、Gly、Ser、Thr；Xaa3是无，或选自下组的氨基酸Tbz、Ala、Ile、Leu、Phe、Pro、Trp、Tyr、Val；或是由上述2-5个氨基酸构成肽段；Xaa4是无，或选自下组的氨基酸Ala、Gly；并且所述的抑制剂结合于多巴胺转运蛋白。在另一优选例中，所述抑制剂具有β-转折，并且在218nm处的椭圆率大于20。较佳地，在218nm处的椭圆率大于30，更佳地，在218nm处的椭圆率大于40。在另一优选例中，Xaa0选自L-Bip；和/或Xaa1选自Tyr、Trp、Phe；和/或Xaa2选自Thr、Ser。在另一优选例中，Xaa3选自Tbz、Ala、Ile、Leu、Phe、Pro、Trp、Tyr、Val；和/或Xaa4选自无、或Gly、Ala。在另一优选例中，Xaa0选自L-Bip、Xaa1选自Tyr、Phe；Xaa2选自Thr；Xaa3选自Phe、Tbz；且Xaa4选自无、或Gly。在另一优选例中，该抑制剂选自下组(a)具有SEQ ID NO2、3、5、7、8、或9所示氨基酸序列的多肽；(b)将SEQ ID NO2、3、5、7、8、或9所示氨基酸序列经过1-2个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有结合于多巴胺转运蛋白的由(a)衍生的多肽。在本专利技术的第二方面，提供了一种分离的核酸分子，它编码本专利技术上述的抑制剂。在本专利技术的第三方面，提供了一种药物组合物，它含有(a)安全有效量(如0.01-99.99wt％，较佳地0.1-90wt％，更佳地1-80wt％)本专利技术上述所述抑制剂或其药学上可接受的盐；和(b)药学上可接受的载体或赋形剂。在本专利技术的第四方面，提供了本专利技术所述的抑制剂或药学上可接受的盐的用途，它们被用于制备治疗多巴胺转运蛋白相关疾病的药物。在另一优选例中，所述的多巴胺转运蛋白相关疾病选自下组帕金森病、可卡因成瘾、抑郁症、小儿多动症和肥胖症。附图说明图1显示了本专利技术拟肽的圆二色谱图。图中1-4分别表示肽1-4。肽1-4的序列如下肽1------(SEQ ID NO1)；肽2------(SEQ ID NO2)；肽3-----(SEQ ID NO3)；肽4-----(SEQ ID NO4)。图2显示了饱和实验曲线图。图中曲线表示多巴胺转运蛋白的转运速度随底物浓度变化的情况，空心方框表示没有本专利技术拟肽抑制剂，实心圆点表示250nM肽5，空心三角表示600nM肽5。其中肽5序列为-----(SEQ ID NO5)。图3显示了肽5对Win35428结合的影响。图中曲线表示可卡因类似物Win35428在多巴胺转运蛋白上的结合随拟肽浓度的升高而下降。三角形表示肽5，圆形表示肽6。图4显示了肽5在脑内的浓度时间曲线图。结果表明，皮下给药后，脑内肽5浓度随时间变化。其中，每组数据是5只小鼠数据的平均值。图5显示了本专利技术的拟肽可以拮抗可卡因成瘾。其中，在A中，动物分别皮下注射生理盐水、20mg/Kg肽5或6、10mg/Kg可卡因。结果表明，只有可卡因会诱导小鼠地点偏好性。每组数据是6只动物的平均值。在B中显示了肽5可拮抗可卡因对地点偏好的诱导。每组数据由15只动物组成。星号表示P＜0.05。在C中显示了肽5可拮抗可卡因诱导出的地点偏好的表达。每组数据由15只动物组成。星号表示P＜0.05。具体实施例方式本专利技术人经过广泛而深入的研究，建立了快速灵敏的多巴胺转运蛋白活性测定方法以及对该蛋白抑制剂的体内活性评价方法，在此基础上筛选了大量化合物。结果发现多巴胺转运蛋白偏好整体结构为β-转折的多肽配基，尤其是4-苯基-L-苯丙氨酸和L-脯氨酸配对组成β-转折起始模块。含有所述起始模块的4-10个短肽可有效地结合于多巴胺转运蛋白并抑制其活性。在此基础上完成了本专利技术。如本文所用，“L-Fbz”指4-苄基-L-苯丙氨酸。如本文所用，“L-Bip”指4-苯基-L-苯丙氨酸。如本文所用，“Tbz”指O-苄基-L-苏氨酸。多巴胺转运蛋白抑制剂如本文所用，“本专利技术多肽”、“本专利技术拟肽”、“本专利技术的多巴胺转运蛋白抑制剂”可互换使用，指氨基酸序列式I所示结构的抑制剂或SEQ ID NO10所示序列。此外，还包括具有结合或抑制多巴胺转运蛋白功能的、SEQ ID NO10序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)1-5个(通常为1-4个，较佳地1-3个，更佳地1-2个，最佳地1个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为5个以内，较佳地为3个以内，更佳地为2个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种下式Ⅰ表示的抑制剂，或其药学上可接受的盐　　　　［Ｘａａ０］－［Ｘａａ１］－［Ｘａａ２］－［Ｌ－脯氨酸］－［Ｘａａ３］－［Ｘａａ４］　　（Ⅰ）　　　　式中，　　　　Ｘａａ０是Ｌ－Ｐｈｅ、Ｌ－Ｆｂｚ、或Ｌ－Ｂｉｐ；　　　　Ｘａａ１是选自下组的氨基酸：Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ；　　　　Ｘａａ２是选自下组的氨基酸：Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；　　　　Ｘａａ３是无，或选自下组的氨基酸：Ｔｂｚ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ；或是由上述２－５个氨基酸构成肽段；　　　　Ｘａａ４是无，或选自下组的氨基酸：Ａｌａ、Ｇｌｙ；　　　　并且所述的抑制剂结合于多巴胺转运蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：费俭，崔大敷，丁金国，
申请(专利权)人：上海南方模式生物科技发展有限公司，上海生物泰生命科学研究有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]