一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法技术

本发明专利技术提供了一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，属于中药技术领域，包括如下步骤：(1)供试样品溶液的制备；(2)混合对照品溶液的制备；(4)分别精密吸取供试样品溶液、混合对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，分别得到供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱；(5)采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱进行数据匹配，即得标准指纹图谱。本发明专利技术玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，有效的控制了玉女煎标准颗粒剂的质量，保证了药物的疗效，使经典名方得到了更为正规的质量控制。

A HPLC fingerprint method for determining the standard soup of Jade Maiden Decoction

The present invention provides a method for the determination of HPLC fingerprint of a standard decoction decoction, belonging to the technical field of traditional Chinese medicine, which comprises the following steps: (1) the preparation of sample solution; (2) the mixed standard solution preparation; (4) respectively from the samples of precision solution, mixed standard solution injection high performance liquid chromatography for the determination, get the samples solution and mixed standard solution liquid chromatography respectively; (5) the software of chromatographic fingerprint evaluation system formulated by the State Pharmacopoeia Commission, the tested sample solution and the mixed standard solution of liquid chromatography data matching, the standard fingerprint map. The HPLC fingerprint of Yu Nu Jian standard soup has effectively controlled the quality of the jade standard granule, guaranteed the efficacy of the medicine, and made the classical party get a more regular quality control.

【技术实现步骤摘要】
一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法
本专利技术涉及属于中药
，具体是一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法。
技术介绍
中药经典名方汤剂作为传统的中医临床用药的主要剂型，具有组方合理、疗效确切、易于吸收、起效较快等优点,深受广大患者的信赖。却因调配、携带、临时煎煮、久置容易发生霉败变质、汤液味苦和量大，以及标准难以统一，严重影响其临床疗效等缺点，不能适应现代人的生活要求。为了保持汤剂的优势,克服汤剂的种种不足,在国家科技部“重大新药创制”科技重大专项项目的大力支持下及院士、行业专家的反复探讨后，以经典名方标准汤的质量属性为评价指标，生产出与其在质量及药效基本保持一致的标准颗粒剂。“经典名方标准颗粒研究”隶属于国家科技部“重大新药创制”科技重大专项“三重”项目，在科技部、国家中医药管理局的大力支持下及院士、行业专家的反复探讨后，以经典名方标准汤的质量属性为评价指标，生产出与其在质量及药效方面同一的标准颗粒剂。作为其子课题，玉女煎标准颗粒从药材的提取到制粒的过程中，均按照“经典名方标准颗粒研究”的要求进行。虽玉女煎标准颗粒从提取到制粒过程中，均以其基准煎为基础进行研究，但是为生产出与传统汤剂在药效、质量方面高度一致性的颗粒，缺少一种有效手段对其颗粒进行质量控制。“质量标准”的建立对加强对药品质量的控制及行政管理，保障广大百姓用药安全具有重要意义。“经典名方标准颗粒”系指以标准汤剂的关键质量属性为评价指标，对颗粒制备过程的药材提取、浓缩、干燥等关键工艺进行研究，应用现代生产技术制备与标准汤剂的关键质量属性基本一致的颗粒。根据《经典名方标准颗粒研究专家共识—标准汤剂定义、制备、质量属性及应用》有关要求，进行玉女煎标准汤的相关考察和研究。与指标成分含量测定的质量分析方法相比，指纹图谱能够比较全面地反映中药化学成分的种类和数量，在中药复方制剂有效成分尚未完全阐明的现状下，可实现对中药内在质量的综合评价和对其整体物质的有效控制，是目前中药及其制剂质量控制的有效手段之一。中药指纹图谱的检测方法有色谱法、光谱法、波谱法等。色谱法主要包括薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱、毛细管电泳等，其中高效液相色谱法具有高效、快速、灵敏、重现性好的特点，与紫外检测器(UV)、二甲管阵列检测器(DAD)、蒸发光散射检测器(ELSD)和质谱检测器(MS)等多种检测器联用，可用于中药中多种复杂成分的分析检测，现已成为中药指纹图谱研究的主流方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术旨在提供一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，有效的控制了玉女煎标准颗粒剂的质量，保证了药物的疗效，使经典名方得到了更为正规的质量控制。为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，包括如下步骤：(1)供试样品溶液的制备：取玉女煎标准汤5体积份数，用水饱和正丁醇萃取，合并萃取液，用纯水洗涤，弃去水相，正丁醇相水浴蒸干，50％甲醇复溶，定容至2体积份数，离心，取上清液过微孔滤膜，即得；(2)混合对照品溶液的制备：精密称定芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷对照品适量，加50％甲醇制成每1体积份数含芒果苷0.05质量份数、β-蜕皮甾酮0.012质量份数、毛蕊花糖苷0.01质量份数的溶液，即得；(4)分别精密吸取供试样品溶液、混合对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，分别得到供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱；(5)采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱进行数据匹配，即得标准指纹图谱。所述重量份数与所述体积份数的关系为g/mL。进一步地，所述步骤(4)的色谱条件如下：色谱柱：UltimateXBC18，4.6×250mm，5μm，00201-31043；检测波长：280nmBW40；流动相：乙腈-0.1％甲酸水；流速：1mL/min；进样量：20μL；柱温：35℃按照以下梯度洗脱条进行洗脱：进一步地，所述标准指纹图谱包括25个共有峰：峰1、2、4、8、12、14、19、20、24来自熟地，峰2、13、22来自麦冬，峰2、8、18、20、22、24来自牛膝，峰1-11、13、15-17、20-23、25来自知母。进一步地，所述供试样品溶液的制备：取制备的玉女煎标准汤5mL，用水饱和正丁醇萃取5次，每次10mL，合并萃取液，用纯水洗涤2次，每次5mL，弃去水相，正丁醇相水浴蒸干，50％甲醇复溶，定容至2mL，离心10min，取上清液过0.45μm的微孔滤膜，即得。进一步地，所述玉女煎标准汤的制备方法：取不同产地和不同批次的按中国药典检验合格的药材或饮片，分别称取生石膏15g，熟地15g，麦冬6g，知母4.5g，牛膝4.5g，加入300mL去离子水浸泡60min，武火(220V)10min煮沸，文火(140V)煎煮35min(煎液量约140mL)，趁热倾倒，制得玉女煎标准汤。放置室温，定容至250mL，即得。进一步地，混合对照品溶液的制备：精密称定芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷对照品适量，加50％甲醇制成每1mL含芒果苷50μg、β-蜕皮甾酮12μg、毛蕊花糖苷10μg的溶液，即得。本专利技术还提供了上述方法在玉女煎的药物制剂的质量检测和质量控制中的应用。本专利技术还提供了玉女煎标准颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：(1)按照上述测定方法建立玉女煎标准汤的标准指纹图谱；(2)取待检的玉女煎标准颗粒，按照上述测定方法得到指纹图谱；(3)将步骤(2)得到的指纹图谱与步骤(1)得到的标准指纹图谱进行对比，符合即为合格产品，不符合即为不合格产品。玉女煎标准颗粒供试样品溶液的制备：取装量差异下的玉女煎标准颗粒，混匀，研细，取1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25mL纯水，称定重量，超声处理(功率220W，频率50Hz)30min，放冷，再称定重量，用纯水补足减失的重量，摇匀后，精密移取5mL，并用水饱和正丁醇萃取5次，每次10mL，合并萃取液，用纯水洗涤两次，每次5mL，弃去水相，正丁醇相水浴蒸干，50％甲醇复溶，定容至2mL，离心(转速为每分钟10000转)10min，取上清液过0.45μm的微孔滤膜，即得。相对于现有技术，本专利技术具有以下优势：(1)本专利技术在建立玉女煎标准颗粒的指纹图谱过程中，确认了25个共有特征峰，并对其相对保留时间和相对峰面积进行了研究，保证了制剂的化学组成稳定性和使用安全性。(2)玉女煎标准颗粒中化学成分复杂，要实现其特征指纹峰的分离难度大，本专利技术在建立起指纹图谱的过程中，采用了梯度洗脱的方法，解决了指纹特征峰难以分开和杂质峰的干扰问题。(3)建立玉女煎标准颗粒的指纹图谱，克服了单一成分含量测定难以反映整体含量的缺陷，可以从整体上、宏观上控制玉女煎标准颗粒剂的内在质量，保证了药物的疗效，使经典名方得到了更为正规的质量控制。(4)以玉女煎标准颗粒中各有效成分指纹图形作为一个整体看待，注重各个特征峰的前后顺序和相互关系，既避免了因只测定一、二个化学成分而判定玉女煎标准颗粒整体质量的片面性，又减少了为质量达标而人为处理的可能性。为完整、准确评价玉女煎标准颗粒的质量提供了新的方法和手段。(5)本专利技术方法稳定性好、精密度高、重现性好、便捷且本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)供试样品溶液的制备：取玉女煎标准汤5体积份数，用水饱和正丁醇萃取，合并萃取液，用纯水洗涤，弃去水相，正丁醇相水浴蒸干，50％甲醇复溶，定容至2体积份数，离心，取上清液过微孔滤膜，即得；(2)混合对照品溶液的制备：精密称定芒果苷、β‑蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷对照品适量，加50％甲醇制成每1体积份数含芒果苷0.05质量份数、β‑蜕皮甾酮0.012质量份数、毛蕊花糖苷0.01质量份数的溶液，即得；(4)分别精密吸取供试样品溶液、混合对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，分别得到供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱；(5)采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱进行数据匹配，即得标准指纹图谱。所述重量份数与所述体积份数的关系为g/mL。

【技术特征摘要】
1.一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)供试样品溶液的制备：取玉女煎标准汤5体积份数，用水饱和正丁醇萃取，合并萃取液，用纯水洗涤，弃去水相，正丁醇相水浴蒸干，50％甲醇复溶，定容至2体积份数，离心，取上清液过微孔滤膜，即得；(2)混合对照品溶液的制备：精密称定芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷对照品适量，加50％甲醇制成每1体积份数含芒果苷0.05质量份数、β-蜕皮甾酮0.012质量份数、毛蕊花糖苷0.01质量份数的溶液，即得；(4)分别精密吸取供试样品溶液、混合对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，分别得到供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱；(5)采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱进行数据匹配，即得标准指纹图谱。所述重量份数与所述体积份数的关系为g/mL。2.根据权利要求1所述的玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于：所述步骤(4)的色谱条件如下：色谱柱：UltimateXBC18，4.6×250mm，5μm，00201-31043；检测波长：280nmBW40；流动相：乙腈-0.1％甲酸水；流速：1mL/min；进样量：20μL；柱温：35℃按照以下梯度洗脱条进行洗脱：3.根据权利要求1所述的玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于：所述标准指纹图谱包括25个共有峰：峰1、2、4、8、12、14、19、20、24来自熟地，峰2、13、22来自麦冬，峰2、8、18、20、22、24来自牛膝，峰1-11、13、15-17、20-...

【专利技术属性】
技术研发人员：张彦森，高桂琴，
申请(专利权)人：天津同仁堂集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12