本发明专利技术提供了一种候选癌基因ｈＲａｂＪ来源的ＨＬＡ－Ａ２限制性表位多肽，以及该表位及其相关的重组蛋白、编码核苷酸序列、抗原递呈细胞、组合物，以及针对该表位的特异性免疫效应细胞在表达ｈＲａｂＪ肿瘤治疗及预防中的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物学和医学领域，更具体地涉及提供了一种候选癌基因hRabJ来源的HLA-A2限制性表位多肽，以及该表位及其相关的重组蛋白、编码核苷酸序列、抗原递呈细胞、组合物，以及针对该表位的特异性免疫效应细胞在表达hRabJ肿瘤治疗及预防中的用途。
技术介绍
hRabJ(SEQ ID NO12)是从树突状细胞(dendritic cell，DC)cDNA文库进行大规模测序的过程中发现一种新型全长新基因，在GenBank/EMBL数据库中登录(序列号为AF178983)。hRabJ编码273个氨基酸的蛋白质(SEQ ID NO13)，是一个Rab样的GTP水解蛋白酶(GTPase)。RabJ主要分布于睾丸、大脑和卵巢等组织，可以结合和降解GTP，在细胞内可能分布于核内，与热休克蛋白70(heatshock protein 70，HSP70)可以形成复合体。通过对RabJ的基因定位、蛋白质一级结构、细胞和组织分布的分析，发现RabJ可能代表一个新的小G蛋白家族，其特征是在其蛋白质组成中包含三类功能域N端(1-18氨基酸)和中间(210-216氨基酸)的核定位信号(nuclearlocalization signal，NLS)、中间的Rab样功能域(19-209氨基酸)和C端的J功能域(217-273氨基酸)，并与Ras家族分子有较高同源性。三类功能域分别介导RabJ的核定位；与细胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulatedkinase，ERK1/2)激酶(ERK kinase，MEK1/2)、蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)的P85亚基、P53亚基相互作用；与HSC70和Raf(Ras相关因子，Ras-associated factor)相互作用等功能。RabJ的核苷酸序列和氨基酸序列以及制法公开于中国专利申请CN01126826.3中。在NIH3T3细胞系内，RabJ的过表达可以促进细胞周期蛋白表达、促进细胞增殖、推动细胞周期进展，在裸鼠体内也可以形成纤维肉瘤，提示RabJ是一个癌基因样的小G蛋白。同时发现在肿瘤细胞内RabJ的表达往往甚高，抑制RabJ的表达可以抑制肿瘤细胞的增殖和体内外的致瘤活性。其作用机制可能是通过作为磷酸化MEK1/2的胞核锚着位点，抑制MEK1/2的核浆转位，从而引起MEK1/2的持续活化并促进肿瘤的发生。RT-PCR显示，hRabJ是一个在肿瘤细胞中分布比较广泛的分子，在HeLa、Jurkat、Molt-4、NB4、THP-1、U937、MCF-7、PC-3等多种人源造血细胞系白血病细胞和实体瘤内均有较高的表达，在正常的细胞系内(如NIH3T3、TC-1)内却没有表达。阻断或者抑制hRabJ表达可抑制肿瘤的生长速率和降低其致瘤性，从而使hRabJ可以作为肿瘤治疗或诊断的靶基因。因此，如果以hRabJ为靶标，对机体进行免疫，将会使机体产生针对hRabJ蛋白的特异性免疫应答，从而使机体能有效地抑制、清除肿瘤细胞，为相关肿瘤的预防及治疗提供措施。合成肽疫苗是近年来随着分子生物学及免疫学的进展而发展起来的一种新的疫苗，可以诱导机体产生特异性的免疫应答，而且其副作用轻微、安全性好，是目前疫苗研究的一个新的方向，被应用于抗肿瘤及抗病毒免疫治疗。目前已经有多种基于表位多肽的疫苗进入临床研究或上市。细胞免疫在抗肿瘤和抗病毒免疫中起关键作用。T细胞识别的抗原为与细胞表面的MHC-I类或II类分子结合的肽，其长度约为8-12个氨基酸。而作为杀伤肿瘤细胞的主要效应细胞CTL(细胞毒T淋巴细胞，Cytotoxic TLymphocytes)则识别与MHC-I类分子结合的内源性肽。已有证据表明，合成肽能直接与MHC-I类分子结合，而不需要APC的加工、处理，它和天然的内源性肽在激活免疫系统方面具有同等的效力。多肽疫苗已成为目前抗恶性肿瘤的一项新策略，也是目前研究最多的肿瘤治疗性疫苗。研究较多的有(1)gp100来源于gp100的肽G9154(序列为KTWGQYWQV)、G9209(序列为ITDQVPPFSV)均能诱导抗原特异性的CTL。用之致敏来自HLA-A2+的黑色素瘤患者的外周血淋巴细胞(PBL)，能明显增强其诱导特异性CTL的能力诱导的CTL即能识别未修饰的gp100；(2)CEA采用与上述相似的方法，Zaremba等人的研究表明CEA的肽CAP1-6D不仅能在体外致敏CEA特异的CTL，其效力为CAP1的100-1000倍，在体内也能诱导CEA特异的CTL(而CAP1却不能)；而且所致敏的CTL同样能识别CAP1。更为重要的是，这些CTL能溶解同源的表达CEA的人类肿瘤；(3)MAGE-2MAGE-2广泛存在于黑色素瘤、喉癌、肺癌、肉瘤等多种肿瘤(除睾丸外)，不存在于正常组织。在MAGE-2中已发现有三段多肽能与MHC-I类分子在37℃下形成稳定复合物，其中至少有两个能被HLA-A*0201加工、呈递，成为多肽疫苗研究的新候选者；(4)P21WAFI将P21WAFI的肽与内源化肽融合能抑制肿瘤的生长；(5)HER2/neu来源于HER2/neu的肽在体外能致敏特异性的CTL，在小鼠体内也能诱导特异的CTL，且能抑制肿瘤的生长。另外采用HPV多肽疫苗也已经进入临床研究。HLA-A2是一种在我国人群中具有较高分布的一种MHC-I类分子，阳性率在40-60％之间，占MHC-I类分子各个亚群的首位，由于HLA-A*0201是人群出现频率最高的位点，基序组成明确，因此是疫苗设计中首选的相关分子。随着对MHC-I类分子和肽表位分子相互作用认识的深人，科学家们已建立了较为成熟的表位鉴定技术路线，主要步骤如下(1)根据表位和MHC-I类分子相互作用的特点，预测MHC-I类分子限制性CTL表位，并利用计算机分子模拟技术对预测表位进行进一步筛选；(2)测定表位与MHC-I类分子结合力；(3)利用体外细胞毒分析或免疫荷瘤转基因小鼠鉴定肽表位能否诱导CTL，寻求最佳优势表位。基于这一技术路线，已有多种HLA-A*0201限制性CTL表位被鉴定，有的已在临床显示了较好疗效。T2细胞是用于测定表位与HLA-A*0201分子结合力的工具细胞之一，它是一株抗原递呈转运体缺陷的HLA-A*0201型细胞株，该细胞表面只表达不含有内源性抗原分子的HLA-A*0201分子，从而可利用其与目的肽的结合程度来测定HLA-A0201分子与目的表位间的亲和力。目前尚缺乏有效预防和治疗抗肿瘤的治疗性疫苗，尤其是安全性高的合成肽疫苗，因此本领域迫切需要开发新的可用于预防和治疗肿瘤的安全性高、具有高免疫原性的合成肽疫苗。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种安全性高、具有高免疫原性的合成肽及其应用。在本专利技术的第一方面，提供了一种hRabJ来源的HLA-A2限制性表位多肽，所述多肽具有诱导细胞毒T细胞杀伤活性，且选自下组(a)包含如下通式I中的氨基酸序列的多肽Xaa1-FVSKYLATI-Xaa2(I) 式中，Xaa1和Xaa2各为0、1、2或3个任选的氨基酸；(b)将通式氨基酸序列经本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种ｈＲａｂＪ来源的ＨＬＡ－Ａ２限制性表位多肽，其特征在于，所述多肽具有诱导细胞毒Ｔ细胞杀伤活性，且选自下组：（ａ）包含如下通式Ⅰ中的氨基酸序列的多肽：Ｘ↓［ａａ１］－ＦＶＳＫＹＬＡＴＩ－Ｘ↓［ａａ２］（Ⅰ）式中，Ｘ↓［ａａ１］和Ｘ↓［ａａ２］各为０、１、２或３个任选的氨基酸；（ｂ）将通式氨基酸序列经过１－４个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有诱导细胞毒Ｔ细胞杀伤活性功能的由（ａ）衍生的ＨＬＡ－Ａ２限制性表位多肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李楠，孙伟红，陈涛涌，曹雪涛，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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