存活蛋白表达的调节制造技术

提供了调节存活蛋白表达的化合物和组合物。通过ＲＮＡｉ反义作用机制起作用的化合物例证的化合物包括双链和单链构建体，以及ｓｉＲＮＡ、规范ｓｉＲＮＡ、平末端ｓｉＲＮＡ和单链反义ＲＮＡ化合物。还提供了使用这些化合物调节存活蛋白表达和治疗与存活蛋白表达相关的疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供了调节存活蛋白表达的组合物和方法。特别地，本专利技术涉及与编码人存活蛋白的核酸特异杂交的反义化合物，特别是双链寡核苷酸。已证实这些寡核苷酸可调节存活蛋白的表达。
技术介绍
癌性细胞的特征性特点是失控性增殖。已经发现的肿瘤和正常细胞间的差异之一是对程序性细胞死亡，也称作凋亡的过程的抗性(Ambrosini等人，Nat.Med.，1997，3，917-921)。凋亡是多细胞生物已经演化了的用以阻止失控性细胞增殖和消灭那些呈病态、有害的或不再需要的细胞的过程。凋亡过程涉及多步骤级联，在该级联中通过蛋白水解酶和DNA内切核酸酶的协调性作用从内部降解细胞，导致随后由清除细胞去除的凋亡小体形成。迄今研究已经证明大部分细胞内降解通过胱天蛋白酶的作用进行，胱天蛋白酶是切割邻近天冬氨酸残基的蛋白水解酶家族(Cohen，Biochemistry Journal，1997，326，1-16)。发现大多数肿瘤细胞对凋亡过程表现抗性导致这样的观点，即以降低肿瘤细胞对凋亡的抗性为目标的治疗策略代表阻止瘤细胞扩散的新型手段(Ambrosini等人，Nat.Med.，1997，3，917-921)。据认为肿瘤细胞获得对凋亡抗性的机制之一是过量表达存活蛋白，其是IAP(凋亡抑制物)胱天蛋白酶抑制物家族的一个新近描述的成员。迄今，在肺肿瘤、结肠肿瘤、胰腺肿瘤、前列腺肿瘤、乳腺肿瘤、胃肿瘤、非霍奇金淋巴瘤和成神经细胞瘤中已经检测到存活蛋白的过量表达(Adida等人，Lancet，1998，351，882-883；Ambrosini等人，Nat.Med.，1997，3，917-921；Lu等人，Cancer Res.1998，58，1808-1812)。已经在成神经细胞瘤中进行了更为详细的分析，其中发现存活蛋白的过量表达同已知与不良预后相关的肿瘤组织学是相互分开的(Adida等人，Lancet，1998，351，882-883)。最后，Ambrosini等人描述了用包含编码效应细胞蛋白酶受体1(EPR-1)的人cDNA 708核苷酸片段的表达载体转染HeLa细胞，所述受体的编码序列与存活蛋白的编码链互补(Ambrosini等人，J.Bio.Chem.，1998，273，11177-11182)。该构建体引起细胞活力的下降。最近发现存活蛋白在细胞周期调节中发挥作用。已发现该蛋白在细胞周期的G2/M期中以受周期调节的方式表达，并与有丝分裂纺锤体的微管结合。在有丝分裂期间，破坏这种相互作用导致存活蛋白抗凋亡功能的丧失并且增强了有丝分裂期间胱天蛋白酶3的活性。胱天蛋白酶3与凋亡性细胞死亡相关。因此认为存活蛋白可抵消G2/M期中对凋亡的默认诱导。因此认为在癌中过量表达存活蛋白可能克服这个凋亡检查点，听任不受欢迎的癌细胞幸存和分裂。发现上述Ambrosini所描述的存活蛋白反义构建体可下调Hela细胞中内源性存活蛋白同时提高G2/M期细胞的胱天蛋白酶3依赖性凋亡，Li等人，Nature，1998，396，580-584。在许多物种中，导入双链RNA(dsRNA)诱导强烈而特异性的基因沉默。这种现象在植物和动物中均存在，并且在病毒防御和转座子沉默机制中发挥作用(Jorgensen等人，Plant Mol.Biol.，1996，31，957-973；Napoli等人，Plant Cell，1990，2，279-289)。dsRNA能导致动物中基因沉默的第一份证据来自在秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)中的工作成果，其中已经证明饲喂、浸浴或注射dsRNA(有义链和反义链的混合物)得到了比单独注射有义链或反义链时效率高得多的沉默(Guo和Kemphues，Cell，1995，81，611-620；Fire等人，Nature 391806-811(1998)；Montgomery等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9515502-15507(1998)；PCT国际公开WO99/32619；(Fire等人，Nature，1998，391，806-810；Timmons等人，Gene，2001，263，103-112；Timmons和Fire，Nature，1998，395，854)。从那以后，已在多种生物中证实了这种现象，所述生物包括黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)(Kennerdell等人，Cell 951017-1026(1998))；和胚胎小鼠(Wianny等人，Nat.Cell Biol.270-75(2000))。已将这种转录后基因沉默现象称为“RNA干扰(RNAi)”，并且该现象已开始泛指涉及dsRNA的基因沉默过程，该过程通过降解靶mRNA导致基因表达的序列特异性降低(Tuschl等人，Genes Dev.，1999，13，3191-3197)。已证实具有3’突出端的21个和22个核苷酸的dsRNA片段是RNAi的经典序列特异性中介体。这些叫做短干扰性RNA(siRNA)的片段由较长dsRNA通过类RNA酶III加工反应生成。经化学合成的siRNA也能在位于接近siRNA引导链覆盖区域的中心的切割位点介导高效靶RNA切割(Elbashir等人，Nature，2001，411，494-498)。已经在包括人胚胎肾(293)和HeLa细胞的几个哺乳动物细胞系中研究了由21-23个核苷酸的siRNA引起内源性和异源性基因表达抑制的表征(Elbashir等人，Genesand Development，2001，15，188-200)。近来，已证实反义极性的单链RNA寡聚体(ssRNAi或asRNA)是基因沉默的强烈诱导物，并且单链寡聚体是RNAi现象的最终原因(Tiisterman等人，Science，2002，295，694-697)。此处每一个引用作为参考的美国专利5,898,031和6,107,094描述了某些具有类RNA性质的寡核苷酸。当与RNA杂交时，这些寡核苷酸作为dsRNA酶底物并因此导致酶对RNA的切割(Crooke，2000；Crooke，1999)。作为对调亡以及认为存活蛋白表达对种类繁多的肿瘤细胞类型提供生长优势中所发挥作用的理解的发展结果，迫切需要提供可调节存活蛋白表达的组合物。迫切需要提供在动物中诊断和检测编码存活蛋白的核酸的方法。也需要提供诊断和治疗源于存活蛋白表达的疾病的方法。而且，需要检测和研究编码存活蛋白的核酸的改进了的研究试剂盒和试剂。因此，本专利技术提供一类新型存活蛋白抑制物、包含这些化合物的组合物和使用这些化合物的方法。专利技术简述本专利技术涉及寡聚化合物，特别是单链和双链反义化合物，这些化合物靶向编码存活蛋白的核酸并且调节存活蛋白的表达。在某些实施方案中，反义化合物为寡核苷酸。在某些实施方案中，寡核苷酸是RNAi寡核苷酸(其主要为RNA或类RNA)。在其它实施方案中，寡核苷酸为RNA酶H寡核苷酸(其主要为DNA或类DNA)。在另外的实施方案中，寡核苷酸可经化学修饰。也提供包含本专利技术的反义化合物的药物组合物和其它组合物。进一步提供调节细胞或组织中存活蛋白表达的方法，该方法包括将所述细胞或组织与一种或多种本专利技术的反义化合物或组合物接触。进一本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有第一链和第二链的双链化合物，其中：所述第一链与编码人存活蛋白（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４）的核酸分子互补；所述第二链与所述第一链互补；所述第一链和第二链每条链长度为８－８０个核碱基；并且该双链化合物抑制人存活蛋白的表达。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：B巴特，BK帕泰特，E斯韦兹，
申请(专利权)人：ISIS药物公司，伊莱利利公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]