从胎盘组织克隆人基质金属蛋白酶2C端片段PEXcDNA的方法技术

从胎盘组织克隆人基质金属蛋白酶２Ｃ端片段ＰＥＸ　　ｃＤＮＡ的方法。以从人胎盘组织提取的总ＲＮＡ为模板逆转录合成ＰＥＸ　　ｃＤＮＡ第一条链，根据人ＭＭＰ２序列和载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３、ｐＧＥＸ－５Ｘ－１的多克隆位点，设计ＰＣＲ引物ＰＥＸ４４６Ｓ、ＰＥＸ４６２Ｓ和ＰＥＸ６６０Ａ，用上游引物ＰＥＸ４４６Ｓ和下游引物ＰＥＸ６６０Ａ、上游引物ＰＥＸ４６２Ｓ和下游引物ＰＥＸ６６０Ａ扩增人ＭＭＰ２　　ｃＤＮＡ１６２９ｂｐ～２３０４ｂｐ　　ｃＤＮＡ片段ＰＥＸ２１５和人ＭＭＰ２　　ｃＤＮＡ　　１６７６ｂｐ～２３０４ｂｐ片段ＰＥＸ１９８，重组于ＧＳＴ融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３和ｐＧＥＸ－５Ｘ－１，获重组质粒。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
从胎盘组织克隆人基质金属蛋白酶２Ｃ端片段ＰＥＸｃＤＮＡ的方法，其特征在于所说的方法步骤如下：步骤１提取胎盘组织总ＲＮＡ：从新鲜胎盘中提取胎盘组织总ＲＮＡ；步骤２用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增不同长度人ＭＭＰ２Ｃ端ＰＥ ＸｃＤＮＡ片段：（１）以胎盘组织总ＲＮＡ为模板逆转录合成ＰＥＸｃＤＮＡ第一条链，（２）根据ＧｅｎｂａｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．：ＮＭ＿００４５３０的人ＭＭＰ２序列和载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３、ｐＧＥＸ－５Ｘ－１ 多克隆位点，设计三条ＰＣＲ引物，分别为ＰＥＸ４４６Ｓ：序列为５’－ＣＴＧＡＡＴＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＡＣＡＴＴＧＡＣＣＴＴＧ－３’，上游引物，带限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ酶切位点；ＰＥＸ４６２Ｓ：序列为５’－Ｇ ＡＧＡＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＡＣＴＣＣＴＧＡＧ－３’，上游引物，带限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ酶切位点；ＰＥＸ６６０Ａ：序列为５’－ＣＧＣＴＣＧＡＧＡＧＧＡＡＧＧＧＣＣＴＧＴＧＧ－３’，下游引 物，带限制性内切酶ＸｈｏⅠ酶切位点；（３）以逆转录合成的第一条链为模板，利用ＰＣＲ技术，用上游引物ＰＥＸ４４６Ｓ和下游引物ＰＥＸ６６０Ａ一起扩增人ＭＭＰ２ｃＤＮＡ１６２９ｂｐ～２３０４ｂｐ片段，即长度为６７６ｂｐ的ＰＥＸ ｃＤＮＡ片段ＰＥＸ２１５，该ｃＤＮＡ片段编码人ＭＭＰ２从４４６ａａ到６６０ａａ的ＰＥＸ片段；（４）以逆转录合成的第一条链为模板，利用ＰＣＲ技术，用上游引物ＰＥＸ４６２Ｓ和下游引物ＰＥＸ６６０Ａ一起扩增人ＭＭＰ２ｃＤＮＡ１６７ ６ｂｐ～２３０４ｂｐ片段，即长度为６２９ｂｐ的ＰＥＸｃＤＮＡ片段ＰＥＸ１９８，该ｃＤＮＡ片段编码人ＭＭＰ２从４６２ａａ到６６０ａａ的ＰＥＸ片段；步骤３原核表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３／ＰＥＸ２１５和ｐＧＥＸ－５Ｘ－１／ＰＥＸ１ ９８的构建：将ＰＥＸ２１５和ＰＥＸ１９８两种不同长度人ＭＭＰ２Ｃ端ＰＥＸ片段ｃＤＮＡ分别重组于ＧＳＴ融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３和ｐＧＥＸ－５Ｘ－１，获得序列正确的重组质粒ｐＧＥＸ－４Ｔ－３／ＰＥＸ２１５和ｐＧＥＸ－５Ｘ－１／ＰＥ Ｘ１９８。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吕文清，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：92[中国|厦门]