miR‑92抑制剂及其用途制造技术

本发明专利技术提供miR‑92的寡核苷酸抑制剂和使用所述抑制剂抑制有此需要的受试者中的miR‑92的功能和/或活性的方法。本发明专利技术还提供了用于评估或监测用于促进伤口愈合的治疗剂的功效的方法，和选择用调节miR‑92功能和/或活性的治疗剂治疗的受试者的方法。

MiR 92 inhibitor and use thereof

The present invention provides a method of miR 92 oligonucleotide inhibitors and using the inhibitor of the need of the subjects in the 92 miR function and / or activity. The invention also provides a method for assessment and monitoring method for promoting wound healing efficacy of therapeutic agents, methods and selection of therapeutic agents by regulating miR 92 functions and / or activity of treated subjects.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】miR-92抑制剂及其用途相关申请本申请要求于2015年1月20日提交的美国临时申请序列号62/105,546的权益，其通过引用整体并入。专利
本专利技术一般涉及miR-92功能和/或活性的调节剂，例如作为miR-92抑制剂的寡核苷酸，以及miR-92功能和/或活性调节剂的生物标志物及其用途。专利技术背景糖尿病和非愈合性糖尿病性足溃疡(non-healingdiabeticfootulcer)是美国非创伤性下肢截肢(lowerextremityamputation)的主要原因。糖尿病性足溃疡由于供血不足，缺血(ischemia)，神经病变，葡萄糖控制不良，感染和其它影响因素而无法愈合。治疗通常包括清创术(debridement)，感染控制，减荷，并且可以包括生长因子(例如血小板衍生生长因子(PDGF))或生物敷料的施用。微小RNA(miRNA)是一类小的，内源的且非编码的RNA，其能够通过靶向特定的信使RNA(mRNA)并诱导其降解或翻译抑制来负调节基因表达(Ambros，Nature431：350-355(2004)；Bartel，Cell136：215-233(2009))。新近的研究已经将mRNA降解定义为miRNA对其mRNA靶物的主要机械论效应(Guoetal.，Nature2010；466：835-840)。微小RNA牵涉许多生物过程，包括心脏功能的调节和维持，血管炎症和血管病理学的发展(参见EvaVanRooij和EricOlson，J.Clin.Invest.117(9)：2369-2376(2007)；Chien，Nature447：389-390(2007)；Kartha和Subramanian，J.Cardiovasc.Transl.Res.3：256-270(2010)；Urbichetal.，Cardiovasc.Res.79：581-588(2008))。miRNA也被报道参与生物体的发育(Ambros，Cell113：673-676(2003))，并且在许多组织(Xuetal.，Curr.Biol.13：790-795(2003)；Landgrafetal.，Cell129：1401-14(2007))，病毒感染过程(Pfeffereta1.，Science304：734-736(2004))中差别表达，并与癌发生相关(Calinetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA101：2999-3004(2004))；Calinetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA99(24)：15524-15529(2002))。因此，调节微小RNA的功能和/或活性可以在用于各种状况的有效治疗的发展中呈现治疗靶点。然而，靶向miRNA的基于反义的治疗剂的递送可以提出几种挑战。对特定miRNA的结合亲和力和特异性、细胞摄取的效率、和核酸酶抗性可以是基于寡核苷酸的治疗剂的递送和活性中的因素。例如，在将寡核苷酸导入完整细胞中时，它们可以受到核酸酶攻击和降解，导致活性的丧失。如此，有用的反义治疗剂可以对胞外和胞内核酸酶具有良好的抗性，以及能够穿过细胞膜。相反，如果中靶效应(on-targeteffect)在与施用治疗剂的组织和部位不同的组织和部位是不期望的，则对核酸酶降解的敏感性可以限制远端组织暴露和活性或限制系统性毒性。因此，需要稳定且有效的基于寡核苷酸的抑制剂，包括针对此种miRNA，如例如miR-92的miRNA的那些基于寡核苷酸的抑制剂。还需要鉴定miRNA调节剂的生物标志物，用于指导治疗决策。当施用于受试者时，本专利技术的寡核苷酸可以具有在效力，递送效率，靶物特异性，稳定性和/或毒性中的优点。专利技术概述本专利技术提供了包含选自表1和表2的序列的寡核苷酸。寡核苷酸可以包含至少一个非锁定核苷酸，其是2-O-烷基或2’-卤代修饰的。在一些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个具有2’至4’亚甲基桥的LNA。在一些实施方案中，寡核苷酸具有5’帽结构、3’帽结构或5’和3’结构。在一些实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个硫代磷酸酯连接(phosphorothioatelinkage)。在一些实施方案中，寡核苷酸是完全硫代磷酸酯连接的。在其它实施方案中，寡核苷酸包含悬垂的亲脂基团(pendentlipophilicgroup)。本文还提供了包含有效量的寡核苷酸或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。在一些实施方案中，药学上可接受的载体包括胶态分散体系统(colloidaldispersionsystem)、大分子复合物、纳米囊(nanocapsule)、微球、珠粒、水包油乳剂、胶束、混合胶束或脂质体。本专利技术还提供减少或抑制细胞中miR-92活性的方法，其包括使细胞与本文公开的寡核苷酸，诸如选自表2的寡核苷酸接触。在一些实施方案中，细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，细胞是心脏细胞或肌细胞。在一些实施方案中，细胞参与伤口愈合。在一些实施方案中，细胞是纤维细胞、成纤维细胞、角质形成细胞或内皮细胞。在其它实施方案中，细胞是体外的、体内的或离体的。本专利技术还提供促进受试者中血管发生(angiogenesis)的方法，其包括向受试者施用本文公开的寡核苷酸，例如选自表2的寡核苷酸。在一些实施方案中，所述受试者患有缺血、心肌梗死(myocardialinfarction)、慢性缺血性心脏病(chronicischemicheartdisease)、外周或冠状动脉闭塞(peripheralorcoronaryarteryocclusion)、缺血性梗塞(ischemicinfarction)、中风(stroke)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)、急性冠状动脉综合征(acutecoronarysyndrome)、冠状动脉疾病(coronaryarterydisease)、颈动脉疾病(carotidarterydisease)、糖尿病(diabete)、慢性创伤、外周血管疾病(peripheralvasculardisease)(例如外周动脉疾病(peripheralarterydisease))。在一些实施方案中，受试者是人。本专利技术还提供了促进受试者中伤口愈合的方法，其包括向受试者施用miR-92抑制剂。在一些实施方案中，miR-92抑制剂是包含与miR-92至少部分互补的序列的寡核苷酸。寡核苷酸可以包含至少一个非锁定核苷酸，其是2’O-烷基或2’卤代修饰的。在一些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个具有2’至4’亚甲基桥的LNA。在一些实施方案中，miR-92抑制剂是包含16个核苷酸序列的寡核苷酸，其中该序列与miR-92互补并且包含不超过(nomorethan)三个连续的LNA，其中从5’端到3’端，序列的位置1、6、10、11、13和16是LNA。在一些实施方案中，距包含16个核苷酸的序列的寡核苷酸的5’端的位置2是作为5-甲基胞嘧啶的脱氧核糖核酸(DNA)核苷酸。在一些实施方案中，miR-92抑制剂是包含16个核苷酸的序列的寡核苷酸，其中该序列与miR-92互补并且包含不超过三个连续的LNA，其中从5’端到3’端，序列的位置1、3、6、8、10、11、本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于促进受试者中伤口愈合的方法，其包括施用包含与miR‑92至少部分互补的序列的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的施用降低miR‑92的功能或活性，由此促进伤口愈合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.20 US 62/105,5461.用于促进受试者中伤口愈合的方法，其包括施用包含与miR-92至少部分互补的序列的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的施用降低miR-92的功能或活性，由此促进伤口愈合。2.权利要求1的方法，其中所述寡核苷酸包含至少一个含有2’至4’亚甲基桥的锁定核酸(lockednucleicacid)(LNA)。3.权利要求1或2的方法，其中所述包含与miR-92至少部分互补的序列的寡核苷酸包含至少16个核苷酸的序列，其中所述序列包含不超过三个连续的LNA，其中从5’端至3’端，序列的位置1、6、10、11、13和16是LNA。4.权利要求3的方法，其中从5’端至3’端，所述序列还包括在位置3、9和14的LNA。5.权利要求3的方法，其中从5’端至3’端，所述序列还包括在位置3、8和14的LNA。6.权利要求3的方法，其中从5’端至3’端，所述序列还包括在位置5、8和15的LNA。7.权利要求4-6中的任一项的方法，其中从5’端至3’端，所述序列还包含在第二核苷酸位置处的脱氧核糖核酸(DNA)核苷酸。8.权利要求7的方法，其中所述在第二核苷酸位置处的DNA核苷酸含有经化学修饰的含氮碱基。9.权利要求8的方法，其中所述经化学修饰的含氮碱基是5-甲基胞嘧啶。10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述寡核苷酸包含至少一个经2’-脱氧、2-O-烷基或2’卤代修饰的核苷酸。11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述寡核苷酸具有5’帽结构、3’帽结构、或5’和3’帽结构。12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述寡核苷酸包含一个或多个硫代磷酸酯连接(phosphorothioatelinkage)。13.权利要求12的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是完全硫代磷酸酯连接的。14.权利要求1-13中任一项的方法，其还包含悬垂的亲脂基团(pendentlipophilicgroup)。15.权利要求1的方法，其中所述寡核苷酸包含选自表1或表2的序列。16.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述受试者是人。17.权利要求1-16中任一项的方法，其中所述受试者患有糖尿病。18.权利要求1-17中任一项的方法，其中所述伤口愈合是针对慢性创伤(chronicwound)、糖尿病性足溃疡(diabeticfootulcer)、静脉淤滞腿溃疡(venousstasislegulcer)或受压溃疡(pressuresore)。19.根据权利要求1-18中任一项的方法，其中与无治疗或用已知促进伤口愈合的试剂治疗相比，所述寡核苷酸的施用在伤口愈合期间产生增加的表皮细胞再生(re-epithelialization)、肉芽形成(granulation)和/或新血管发生(neoangiogenesis)的速率。20.权利要求19的方法，其中所述已知促进伤口愈合的试剂是血小板衍生生长因子(PDGF)或血管内皮生长因子(VEGF)。21.寡核苷酸，其包含选自表2的序列。22.权利要求21的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的至少一个非锁定核苷酸是2’-脱氧、2-O-烷基或2’-卤代修饰的。23.权利要求21或22的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的至少一个锁定核酸(LNA)具有2’至4’亚甲基桥。24.权利要求中21-23中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸具有5’帽结构、3’帽结构、或5’和3’帽结构。25.权利要求21-24中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含一个或多个硫代磷酸酯连接。26.权利要求25的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是完全硫代磷酸酯连接的。27.权利要求21-26中任一项的寡核苷酸，其还包含悬垂的亲脂基团。28.药物组合物，其包含有效量的权利要求21-27中任一项的寡核苷酸或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或稀释剂。29.权利要求28的药物组合物，其中所述药学上可接受的载体包括胶态分散体系统(colloidaldispersionsystem)、大分子复合物、纳米囊、微球、珠粒、水包油乳剂、胶束、混合胶束或脂质体。30.减少或抑制细胞中miR-92活性的方法，其包括使所述细胞与权利要求21-27中任一项的寡核苷酸接触。31.权利要求30的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。32.权利要求31的方法，其中所述细胞是心肌细胞、肌细胞、纤维细胞、成纤维细胞、角质形成细胞或内皮细胞。33.权利要求30-32中任一项的方法，其中所述细胞是体外的、体内的或离体的。34.促进受试者中血管发生的方法，其包括向受试者施用权利要求21-27中任一项的寡核苷酸。35.权利要求34的方法，其中所述受试者患有缺血(ischemia)、心肌梗死(myocardialinfarction)、慢性缺血...

【专利技术属性】
技术研发人员：CM多尔比，CL加伦特贝姆，A杰克逊，K胡特尼克，A塞托，
申请(专利权)人：米拉根医疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US