本发明专利技术涉及含有ｄｅｓＧｌａ－因子Ⅶ多肽结构物形式杂质的因子Ⅶ多肽药品的纯化方法。该方法利用阴离子交换材料并包含用预定ｐＨ的缓冲液洗涤和／或洗脱。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及含有desGla-因子VII多肽结构物形式杂质的因子VII多肽药品的纯化方法。该方法利用阴离子交换材料并包含用预定pH的缓冲液洗涤和/或洗脱。
技术介绍
在凝血级联中涉及的蛋白质，包含例如因子VII、因子VIII、因子IX、因子X和蛋白质C，被证明是治疗各种病理状态的有用治疗剂。相应地，对于包含药学上可接受的并显示一致且预定的临床效果的这些蛋白质的制剂的需要在不断上升。用于纯化因子VII多肽药品的整个工业规模生产在某些情况下可能有下述缺点药品包含大量相应的desGla-因子VII多肽结构物，即药品被视为包含大量杂质。当然，这是不期望的并且在某些情况下也是不能接受的。据本专利技术人所知，工业规模生产中desGla-因子VII多肽结构物形成和去除的问题在现有技术中还未被充分关注。
技术实现思路
本专利技术人现在已发现通过进行在最关键步骤维持较低pH的特定阴离子交换操作可以减少或基本上消除药品中存在的desGla-因子VII多肽结构物。本专利技术提供了用于纯化因子VII多肽药品的方法，所述药品包含至少3％的desGla-因子VII多肽结构物，所述方法包含下列步骤(a)在有利于所述药品的一部分与所述阴离子交换材料结合的条件下，使药品与阴离子交换材料接触；(b)用洗涤缓冲液洗涤所述阴离子交换材料；和(c)用洗脱缓冲液洗脱所述阴离子交换材料，并收集纯化的因子VII多肽药品作为洗出液；其中上样缓冲液和/或洗涤缓冲液和/或洗脱缓冲液的pH为2.0-6.9。因此，根据本专利技术的方法特别涉及含有大量desGla-因子VII多肽结构物杂质，即至少3％的desGla-因子VII多肽结构物的因子VII多肽药品。应当理解，在某些情况下，工业规模的因子VII多肽药品可以包含甚至更高量的desGla-因子VII多肽结构物，例如至少4％，例如至少4.5％，或至少5％的desGla-因子VII多肽结构物，并且本专利技术的方法更与此类药品相关。当与因子VII多肽偶联使用时，desGla-因子VII多肽结构物的百分比(％)被定为重量百分比。“desGla-因子VII多肽结构物”的表达意指其中在Lys38附近从因子VII多肽分子中切除了Gla结构域的因子VII多肽结构物。如实施例1中所述通过SDS-PAGE可以确定因子VII多肽药品中的desGla-因子VII多肽结构物的含量。尽管不局限于此，但本专利技术方法特别适合于“工业规模”(或“大规模”)的因子VII多肽药品。术语“工业规模”一般指下述方法，其中液体因子VII多肽组合物的体积为至少100L，例如至少500L，例如至少1000L，或至少5000L，或其中组合物的重量为至少100kg，例如至少500kg，例如至少1000kg，或至少5000kg，或其中产物重量为至少1g(干物质)，例如至少10g，例如至少50g，例如1-1000g或1-500g或1-100g。本文所使用的“药品”的表达意指固体物质和液体物质，例如包含因子VII多肽的溶液或悬浮液。“药品”的表达特别指“大”体积或量，即指已知来自大规模和工业规模生产的体积和量。术语“因子VII多肽”在下文中进一步限定。步骤(a)-使药品与阴离子交换材料接触在方法的第一个步骤中，因子VII多肽药品与阴离子交换材料接触。目的是促进所述因子VII多肽药品的一部分与所述阴离子交换材料结合。与步骤(a)一起的术语“部分”指因子VII多肽药品中存在的至少30％(即30-100％)的因子VII多肽量。应当理解在大多数情况下希望结合远远超过30％的因子VII多肽量，例如至少50％，或至少70％，或占优势的部分。术语“占优势的部分”指因子VII多肽药品中存在的至少90％的因子VII多肽量。优选更高的部分与阴离子交换材料结合，例如至少95％的量，或至少98％的量，或至少99％的量，或甚至因子VII多肽药品中存在的基本上所有的因子VII多肽量。因子VII多肽药品一般来源于工业规模的生产方法，例如细胞培养、克隆动物(例如，母牛、猪、绵羊、山羊和鱼)或昆虫等，特别是来自细胞培养。阴离子交换材料优选强效阴离子交换材料，例如含有季铵基团的阴离子交换材料。此类材料的市售例子有DEAE Sepharose、BlueSepharose、和来自Amersham Biosciences的Q-Sepharose FastFlow，和来自Per Septive Biosystems或Tosohaas的POROS HQ 50。阴离子交换材料的最普遍排列是柱的形式。批容器中的排列当然也可以。因子VII多肽药品一般直接得自前述纯化步骤，或得自在必要的情况下后来调整了pH、离子强度、二价金属离子螯合作用等的前述纯化步骤。应用到阴离子交换材料之前和正在应用到阴离子交换材料上的药品的pH看来对desGla-因子VII多肽结构物的形成起相应的作用。因此，优选药品为液体形式并且在应用到阴离子交换材料时的pH为2.0-6.9，例如3.0-6.5或3.5-6.9。在某些令人感兴趣的实施方案中，药品的pH为2.0-6.8，例如3.0-6.8或3.5-6.8，或pH为2.0-6.7，例如3.0-6.7或3.5-6.7，或pH为2.0-6.6，例如3.0-6.6或3.5-6.6，或pH为2.0-6.5，例如3.0-6.5或3.5-6.5，或pH为2.0-6.4，例如3.0-6.4或3.5-6.4。一般地，但不限制地，传导率为5-30mS/cm，例如10-20mS/cm。药品的温度一般为，但不限于，0-15℃，例如约2-10℃。结合了因子VII多肽的阴离子交换材料的温度一般为，但不限于，0-15℃，例如约2-10℃，例如通过使用冷却套管和控制温度的溶液来维持在特定范围内。因子VII多肽药品的接触一般根据常规方案来进行，即药品的浓度、温度、离子强度等可以按照惯例，并且阴离子交换材料在应用前可以常规地进行洗涤和达到平衡。因子VII多肽的装载量一般为10-40g，例如15-30g因子VII多肽/升基质(湿润形式的阴离子交换材料)，并且药品一般应用的流速为3-200柱体积/小时(CV/h)，例如至少10CV/h，例如至少20CV/h，或至少40CV/h，或至少80CV/h，例如80-120CV/h。步骤(b)-洗涤步骤因子VII多肽药品与阴离子交换材料结合后，进行洗涤步骤(b)以从阴离子交换材料中去除大部分desGla-因子VII多肽结构物。通过这个步骤，阴离子交换材料上剩余(结合)部分的因子VII多肽将含有非常少量的desGla-因子VII多肽结构物。这个洗涤步骤(b)优选用pH为2.0-6.9，例如3.0-6.5或3.0-6.9的洗涤缓冲液来进行。在某些令人感兴趣的实施方案中，洗涤缓冲液的pH为2.0-6.8，例如3.0-6.8或3.5-6.8，或pH为2.0-6.7，例如3.0-6.7或3.5-6.7，或pH为2.0-6.6，例如3.0-6.6或3.5-6.6，或pH为2.0-6.5，例如3.0-6.5或3.5-6.5，或pH为2.0-6.4，例如3.0-6.4或3.5-6.4。洗涤步骤(b)一般以3-200柱体积/小时(CV/h)的流速来进行，例如至少10CV/h，例如至少20CV/h，或至少40CV/h，或至本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种纯化重组因子Ⅶ多肽药品的方法，所述药品包含至少３％的ｄｅｓＧｌａ－因子Ⅶ多肽结构物，所述方法包含下列步骤：（ａ）在有利于所述药品的一部分与所述阴离子交换材料结合的条件下使所述药品与阴离子交换材料接触；（ｂ）用洗涤缓冲液洗涤所述阴离子交换材料；和（ｃ）用洗脱缓冲液洗脱所述阴离子交换材料，并收集纯化的因子Ⅶ多肽药品作为洗出液；其中所述上样缓冲液和／或洗涤缓冲液和／或洗脱缓冲液的ｐＨ为２．０－６．９。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：J克拉鲁普，
申请(专利权)人：诺和诺德医疗保健公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]
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