一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法技术

本发明专利技术揭示了一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法，包括如下步骤：a)对包载bFGF的水凝胶进行冷冻干燥，表面喷金处理；对包载bFGF的水凝胶浸泡于PBS缓冲溶液中；b)使用ELISA试剂盒检测上述包载bFGF的SBMA水凝胶上清中bFGF的含量；c)通过ELISA蛋白溶液与稀释剂配置多个ELISA蛋白标准品；d)取反应板，在反应板中孔内加入ELISA蛋白标准品和包载bFGF的水凝胶溶液，重复混合；e)反应板每个孔加入蒸馏水和第一抗体工作液，重复混合；f)加入酶标抗体工作液，重复混合；g)加入显色底物工作液，重复混合；h)加入终止液以终止反应；i)用酶标仪进行吸光度检测bFGF的含量；通过步骤b)与步骤i)中含量共同确认bFGF的累积释放量。检测方法较为简单，方便操作，并且其检测的精度高。

A method for detecting the release rate of hydrogel containing bFGF

The invention discloses a bFGF loaded hydrogel release rate detection method, which comprises the following steps: a) of bFGF loaded hydrogel for freeze drying, surface spraying treatment; the bFGF loaded hydrogel soaked in PBS buffer solution; b) using ELISA kit on bFGF SBMA supernatant of the hydrogel bFGF loaded in content; c) by ELISA protein solution and diluent to configure multiple ELISA protein standard; d) from the reaction plate, the reaction plate hole into protein standard and bFGF loaded hydrogel solution, ELISA repeated mixing; E) reaction in each hole to add distilled water and the first antibody the working fluid, repeated mixing; F) adding enzyme antibody working fluid, repeated mixing; g) adding chromogenic substrate solution, repeated mixing; H) adding the stop solution to terminate the reaction; I) were detected by bFGF absorbance microplate;. The cumulative release of bFGF is confirmed by the content of step b) and step I). The detection method is simple, easy to operate, and its detection precision is high.

【技术实现步骤摘要】
一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法
本专利技术属于医用材料
，特别是涉及一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法。
技术介绍
随着“湿性愈合理论”的提出，创面敷料保持创面的湿润环境变得尤为重要，尤其是慢性难愈合创面。因此一系列模拟细胞外基质的水凝胶类敷料越来越得到广泛的重视，如具有生物相容性的壳聚糖水凝胶敷料，其良好的生物相容性有效促进了糖尿病小鼠创面的愈合。为提高创面愈合率的，人们对水凝胶做出了大量的研究，来提高水凝胶的性能，bFGF能够改善细胞生长的微环境，促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，使肌肤富有弹性，使皮肤处于滑嫩的状态。bFGF与水凝胶的结合，是现在行业的趋势，也是待攻克的技术难题，bFGF与水凝胶的结合的效果，直接决定了水凝胶的性能。因此，有必要提供一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法来确认bFGF与水凝胶的结合。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法，从而提高释放率精准度。本专利技术通过如下技术方案实现上述目的：一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法，包括如下步骤：a)对包载bFGF的水凝胶进行冷冻干燥，表面喷金处理；对包载bFGF的水凝胶浸泡于PBS缓冲溶液中；b)使用ELISA试剂盒检测上述包载bFGF的SBMA水凝胶上清中bFGF的含量；c)通过ELISA蛋白溶液与稀释剂配置多个ELISA蛋白标准品；d)取反应板，在反应板中孔内加入ELISA蛋白标准品和包载bFGF的水凝胶溶液，重复混合；e)反应板每个孔加入蒸馏水和第一抗体工作液，重复混合；f)加入酶标抗体工作液，重复混合；g)加入显色底物工作液，重复混合；h)加入终止液以终止反应；i)用酶标仪进行吸光度检测bFGF的含量；通过步骤b)与步骤i)中含量共同确认bFGF的累积释放量。bFGF的累积释放量＝ELISA试剂盒检测的检测量+酶标仪检测的吸光度检测量。步骤a)中，称取包载bFGF的水凝胶，并浸泡于PBS缓冲溶液里，静置，取定量的上清液，同时再补充等量的PBS，于低温保存。步骤c)中，取多个离心管，第一离心管加入ELISA蛋白稀释液，第二至第八离心管均加入少于第一离心管量的ELISA蛋白稀释液，在第一离心管中加入ELISA蛋白溶液，混匀，吸出一定量加入至第二离心管中，震荡混匀后，再从第二离心管吸出等量的溶液，加入至第三离心管中。如此反复对半稀释，最后从最后一个离心管中吸出等量溶液弃去，形成ELISA蛋白标准品。与现有技术相比，本专利技术一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法的有益效果在于：检测方法较为简单，方便操作，并且其检测的精度高。【具体实施方式】本专利技术为一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法，包括如下步骤：a)对包载bFGF的水凝胶进行冷冻干燥，表面喷金处理；对包载bFGF的水凝胶浸泡于PBS缓冲溶液中；b)使用ELISA试剂盒检测上述包载bFGF的SBMA水凝胶上清中bFGF的含量；c)通过ELISA蛋白溶液与稀释剂配置多个ELISA蛋白标准品；d)取反应板，在反应板中孔内加入ELISA蛋白标准品和包载bFGF的水凝胶溶液，重复混合；e)反应板每个孔加入蒸馏水和第一抗体工作液，重复混合；f)加入酶标抗体工作液，重复混合；g)加入显色底物工作液，重复混合；h)加入终止液以终止反应；i)用酶标仪进行吸光度检测bFGF的含量；通过步骤b)与步骤i)中含量共同确认bFGF的累积释放量。详细检测举例说明如下：提供SBMA水凝胶以及加入bFGF，液氮速冻5分钟并通过真空低温方式抽干，形成包载bFGF的水凝胶。再进行冷冻干燥24小时，表面喷金处理。使用ELISA试剂盒检测上述包载bFGF的SBMA水凝胶在各个时间段上清中bFGF的含量，(各个时间点可以为：3小时，9小时，24小时，第3天，第7天，第10天以及第20天)。精确称取包载bFGF的水凝胶(样品)，并浸泡于一定量的PBS缓冲溶液里，静置于4度冰箱，等到特定时间点取定量的上清液(500μL)，同时再补充500μLPBS，于-80℃保存(特定时间点可以为：3小时，9小时，24小时，第3天，第7天，第10天以及第20天)。取多个离心管，第一离心管加入ELISA蛋白稀释液，第二至第八离心管均加入少于第一离心管量的ELISA蛋白稀释液，在第一离心管中加入ELISA蛋白溶液，混匀，吸出一定量加入至第二离心管中，震荡混匀后，再从第二离心管吸出等量的溶液，加入至第三离心管中。如此反复对半稀释，最后从最后一个离心管中吸出等量溶液弃去，形成ELISA蛋白标准品。详细的，取八个1.5mL离心管，第一离心管加入标准品稀释液900μL，第二至第八离心管加入500μL，在第一离心管中加入100μL标准品溶液(40ng/mL)，置于漩涡震荡器上混匀，吸出500μL加入至第二离心管中，震荡混匀后，再从第二离心管吸出500μL，加入至第三离心管中。如此反复对半稀释，最后从第八离心管中吸出500μL弃去，形成ELISA蛋白标准品。取反应板，反应板中每个孔内加入ELISA蛋白标准品和待测样品100μL，重复混合，置于37℃孵育40分钟。用洗涤液将反应板充分洗涤四次，在滤纸上印干。反应板每个孔加入蒸馏水和第一抗体工作液各50μL，重复混合，置于37℃孵育20分钟。再用洗涤液充分洗板。每个孔加入酶标抗体工作液100μL，重复混合，置于37℃孵育10分钟。再用洗涤液充分洗板。每孔加入显色底物工作液100μL，置于37℃暗处孵育15分钟。15分钟后，加入100μL终止液以终止反应，并在30分钟之内，用酶标仪进行吸光度检测，检测波长为450nm，吸光度检测量出的认释放量。通过3小时，9小时，24小时，第3天，第7天，第10天以及第20天特定时间点的检测，获取bFGF在水凝胶中不同时间的释放量。bFGF的累积释放量＝ELISA试剂盒检测的检测量+酶标仪检测的吸光度检测量。从而获取bFGF的水凝胶释放率。本检测方法较为简单，方便操作，并且其检测的精度高。以上所述的仅是本专利技术的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法，其特征在于包括如下步骤：a)对包载bFGF的水凝胶进行冷冻干燥，表面喷金处理；对包载bFGF的水凝胶浸泡于PBS缓冲溶液中；b)使用ELISA试剂盒检测上述包载bFGF的SBMA水凝胶上清中bFGF的含量；c)通过ELISA蛋白溶液与稀释剂配置多个ELISA蛋白标准品；d)取反应板，在反应板中孔内加入ELISA蛋白标准品和包载bFGF的水凝胶溶液，重复混合；e)反应板每个孔加入蒸馏水和第一抗体工作液，重复混合；f)加入酶标抗体工作液，重复混合；g)加入显色底物工作液，重复混合；h)加入终止液以终止反应；i)用酶标仪进行吸光度检测出bFGF的含量；通过步骤b)与步骤i)中含量共同确认bFGF的累积释放量。

【技术特征摘要】
1.一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法，其特征在于包括如下步骤：a)对包载bFGF的水凝胶进行冷冻干燥，表面喷金处理；对包载bFGF的水凝胶浸泡于PBS缓冲溶液中；b)使用ELISA试剂盒检测上述包载bFGF的SBMA水凝胶上清中bFGF的含量；c)通过ELISA蛋白溶液与稀释剂配置多个ELISA蛋白标准品；d)取反应板，在反应板中孔内加入ELISA蛋白标准品和包载bFGF的水凝胶溶液，重复混合；e)反应板每个孔加入蒸馏水和第一抗体工作液，重复混合；f)加入酶标抗体工作液，重复混合；g)加入显色底物工作液，重复混合；h)加入终止液以终止反应；i)用酶标仪进行吸光度检测出bFGF的含量；通过步骤b)与步骤i)中含量共同确认bFGF的累积释放量。2.如权利要求书1中一种包载bFGF的水凝胶释放率的检测方法，其特征在于：步骤a)中，称取包载bFGF的水凝胶，并浸泡于PBS缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宏宇，顾志明，钱伟，
申请(专利权)人：苏州榭睿迦医疗科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32