一种DNA的多点定向突变方法技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体涉及一种ＤＮＡ的多点定向突变方法。本发明专利技术利用单向ＰＣＲ反应，特异扩增突变序列，增加突变模板量；再结合重叠延伸ＰＣＲ，获得定向多点高频率ＤＮＡ突变；在这一反应体系中，改变引物设计方法，使之既利于与模板复性，又利于片段间的重叠延伸，从而提高突变频率。本发明专利技术为体外定向诱变ＤＮＡ提供了一种简单有效的方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种ＤＮＡ分子多点定向突变的方法，包括重叠延伸ＰＣＲ步骤，其特征在于，在所述的重叠延伸ＰＣＲ之前增加一个单向ＰＣＲ步骤：即在期望的基因突变位点处设计一对特异引物，每一条特异引物先进行单向ＰＣＲ，按照编号为Ｐ１与Ｐ４，Ｐ３与Ｐ６，Ｐ５与Ｐ８，Ｐ７与Ｐ２的组合将单向ＰＣＲ产物合并后，进行第一轮ＰＣＲ，产物为含有不同突变位点的ＤＮＡ片段；以第一轮ＰＣＲ产物为模板，进行第二轮ＰＣＲ；再以第二轮ＰＣＲ产物为模板，进行第三轮ＰＣＲ，得到全长基因序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：廖玉才，李和平，刘春雷，黄涛，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]