【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种转化生长因子ｂｅｔａ２基因修饰的组织工程化软骨的构建方法，包括种子细胞的分离培养与扩增、基因转染、细胞与载体复合，以及体内组织工程化软骨生成，其特征在于：（１）脂肪来源的成体干细胞的分离培养与扩增：取手术病人皮下脂肪，ＰＢＳ充分洗涤，剪刀将组织块剪碎；０．１％胶原酶Ⅰ中振荡消化４５ｍｉｎ，加入含１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ中止消化，１２００ｇ离心１０ｍｉｎ，得到的细胞团用培养液悬浮后滤网过滤以除去杂质，细胞接种于培养瓶，置于３７℃、５％ＣＯ↓［２］培养箱进行培养，二天后换液去除未贴壁的红细胞。以后每周换液两次。至细胞达９０％融合后，吸净培养基，以ＰＢＳ冲洗２次，加入０．０５％胰蛋白酶，置于３７℃、５％ＣＯ↓［２］培养箱中孵育５分钟，加入完全ＤＭＥＭ培养基以中和胰蛋白酶活性，用吸管轻轻吹打使成单细胞悬液，按１∶２进行传代培养；（２）携带转化生长因子ｂｅｔａ２基因的复制缺陷５型腺病毒转染脂肪来源的成体干细胞；（３）转染细胞和载体材料的复合：以聚乳酸－聚羟基乙酸／藻酸钙复合物做为细胞载体材料。转染后二十四小时，单层细胞用胰酶消化后制成单细胞悬液，离心后弃去培养液，细胞以２×１０↑［７］／ｍｌ浓...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：靳小兵，娄思权，孙永生，
申请(专利权)人：北京大学第三医院，
类型：发明
国别省市：11[]
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