用于血管生成治疗的小肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及可用于治疗血管生成性疾病的小肽，还涉及编码这些小肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的载体和细胞，以及利用这些肽、多核苷酸、载体或细胞来治疗血管生成性疾病的方法和药物组合物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及小肽及其应用，具体地，涉及可用于治疗血管生成性疾病的小肽， 还涉及编码这些小肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的载体和细胞，以及利用这些肽、 多核苷酸、载体或细胞来治疗血管生成性疾病的方法和药物组合物。
技术介绍
肿瘤是危害人类健康的顽症之一，目前治疗肿瘤的方法有多种，基于血管生成 与肿瘤生长和转移的关系而发展起来的抗血管生成疗法是一种较为看好的方法，成 为治疗癌症的新希望。早在20世纪70年代，Folkman就提出血管生成是肿瘤恶 性转化、生长和转移的生物基础与重要环节，并提出血管发生的抑制剂可能会成为 一种新型的、有价值的肿瘤治疗手段。没有新生血管生成的恶性肿瘤往往处于半休 眠状态，局限于原发部位，生长缓慢且不会太大。体积超过2mm3 3mm3的肿瘤不 仅需要新生血管维持营养供给和排泄代谢产物，还需要其提供有利于转移的通道。 随着肿瘤细胞的不断增殖，瘤块体积的不断扩大，瘤体的微循环改变，刺激肿瘤细 胞和宿主细胞产生刺激血管生成的因子，并下调抑制血管生成的因子的产生，打破 二者在肿瘤组织局部的平衡，启动血管生成，构成肿瘤迅速增殖的前提条件。 一旦 新生血管形成，肿瘤会呈对数般地生长，同时大量肿瘤细胞借助脉管向远处转移， 对患者的病情及预后极为不利。有证据表明，运用药物抑制肿瘤及肿瘤边缘新生血 管的生成可明显提高患者的五年生存率。根据对肿瘤血管生成的多年研究，O'Reilly与Folkman等认为在肿瘤患者或荷 瘤动物血清中必然同时存在着刺激血管生成的因子与抑制血管生成的因子。这些内 源性血管生成刺激因子和抑制因子通过自分泌或旁分泌等方式直接作用于血管内皮 细胞，影响其增殖、迁移和形成管状结构，二者间的平衡直接决定了肿瘤血管的启 动和发展方向，因此是调节肿瘤血管的最重要的因素。其中内源性肿瘤血管生成抑 制因子是人体内源性蛋白的一部分，在控制肿瘤的生长和转移过程中发挥重要的作 用，有着较好的抗癌前景。与其他抗肿瘤药物相比，内源性肿瘤血管生成抑制因子 作为药物具有许多优势(1)治疗发生时，血管形成已被启动，故内源性肿瘤血管生 成抑制因子治疗具有良好的特异性；(2)实体瘤生长和转移均需依赖血管生成，因而 具有广谱性；(3)血管内皮细胞暴露于血流中，药物能直接发挥作用，故剂量小、疗 效高；(4)内皮细胞基因表达相对稳定，不易产生耐药性；(5)反复用药不会引起耐 药性，无细胞毒药物的巨大毒副作用。如内源性抗血管生成物质(endostatin)在我 国也己成功上市。许多内源性抗血管生成制剂如angiostatin等也已处于不同的临床 试验中。可见其作为候选肿瘤治疗药物具有较好的前景。但是上述内源性抗血管生成蛋白，因其分子量较大，活性低，合成不方便，通 过纯化得到的制剂存在较弱的免疫原性，长时间用药可引起耐药反应。近年来内源 性抗肿瘤小肽药物的研究发展迅猛。内源性抗肿瘤小肽药物较传统抗肿瘤药物具有 明显的优势，其作为信使分子针对肿瘤细胞生长发育的不同环节特异性杀伤或抑制 肿瘤细胞，另外小肽分子小，活性高，易于合成，而且无免疫源性，结构简单，功 能明确而特异，毒副作用小，作为药物较为安全。因此，近年来，以内源性小肽为 对象的抗肿瘤药物研制与开发愈来愈受到重视。由此可见，内源性抗肿瘤血管生成抑制小肽作为候选药物用于治疗肿瘤以及预 防肿瘤术后复发及转移具有极大的发展潜力。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种小肽或其药学上可接受的盐。 本专利技术的另一目的是提供含有本专利技术的小肽的肽或其药学上可接受的盐在制备治疗血管生成性疾病的药物中的应用。本专利技术的另一目的是提供一种融合蛋白，其含有本专利技术的小肽。 本专利技术的另一目的是提供编码本专利技术的小肽的多核苷酸。 本专利技术的目的是提供一种药物组合物，其含有本专利技术的小肽或其药学上可接受的盐；或本专利技术的融合蛋白；或本专利技术的多核苷酸；以及药物可接受的载体或赋形剂。 本专利技术的另一目的是提供含有本专利技术的多核苷酸的质粒或病毒载体。 本专利技术的另一目的是提供含有本专利技术的多核苷酸或载体的细胞。 本专利技术的另一目的是提供一种治疗血管生成性疾病的方法。 —方面，本专利技术提供一种小肽或其药学上可接受的盐，所述小肽为与表2中SEQ ID NO: 1所示的序列(文中称为FpAT小肽)具有至少40%同源性且与SEQ ID NO: l具有相同的功能的序列。优选本专利技术的小肽与SEQIDNO: l所示的序列具 有至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、 至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少95%、至少96%、至 少97%、至少98%、至少99%、至少99.5%同源性的序列。在本专利技术的一个实施方式中，提供一种如下(a)或(b)的小肽或其药学上可 接受的盐，其中所述小肽为(a) SEQ ID NO: 1所示序列组成的小肽；(b) 在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或几个氨基酸且具 有治疗血管生成性疾病作用的由(a)衍生的小肽。由于本专利技术SEQ ID NO: 1所示的序列为仅有15个氨基酸序列的小肽，所以本 领域的普通技术人员可以很容易对SEQ ID NO: 1的氨基酸序列进行本领域常规的 改变而不改变其功能，所述改变例如进行常规取代、缺失或添加等操作，尤其是进 行非极性氨基酸间或是极性氨基酸间(特别是不带电荷的极性氨基酸间或带相同电 荷(带正电荷或负电荷)的极性氨基酸间)的取代。例如，本领域技术人员可以利 用表1显示的常见氨基酸序列的分类进行非极性氨基酸间或是极性氨基酸间的取代， 例如Asp与Glu之间的互换。表l氨基酸分类非极性氨基酸Ala、 Val、 Leu、 Ile、 Met、 Phe、 Trp、 Pro共八种极性不带电荷Gly、 Ser、 Thr、 Cys、 Asn、 Gln、 Tyr共七种带正电荷Arg、 Lys、 His带负电荷Asp、 Glu本专利技术人禾IJ用分析程序(http:〃www.ebi.ac.uk/Tools/ Sequence Analysis-ClustalW)， 按照默认参数对FpAT与VEGF (血管内皮细胞生长因子)的同源性进行序列比对分 析，结果得出Leu-Ala-Glu-Gly-Gly-Gly这六个氨基酸，至少是Ala-Glu-Gly-Gly-Gly 这五个氨基酸是该小肽的作用核心序列(实施例3);其结果与在FpAT及其截短小 肽对昆明鼠体内肿瘤生长的抑制中的结论基本一致，在截短小肽的实验中，专利技术人 以大量实验证明Phe-Leu-Ala-Glu-Gly-Gly连续六个氨基酸为本专利技术小肽的作用核心序列。综合上述结果，本专利技术人认为本专利技术的Ala-Glu-Gly-Gly,尤其Ala-Glu-Gly 连续氨基酸序列是本专利技术的小肽的作用核心序列。在此基础上，本领域技术人员理 解，对本专利技术小肽的核心序列之外的序列进行取代、缺失或添加而基本不会改变本 专利技术的小肽的功能。所述同源性也可根据本领域的普通技术人员已知的方法计算。例如，UWGCG包 提供了 BESTFIT程序，其可用于计算同源性(Devereux等(1984) Wwc/e/c Zc化 i e^arc/z 12,第387 395页)。BLAST算法也本文档来自技高网...

【技术保护点】
如下（ａ）或（ｂ）的小肽或其药学上可接受的盐，其中所述小肽为　　　　（ａ）ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１所示序列组成的小肽；　　　　（ｂ）在（ａ）中的氨基酸序列经过取代、缺失和／或添加一个或几个氨基酸且具有治疗血管生成性疾病作用的由（ａ）衍生的小肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：寿成超，苏亚辉，
申请(专利权)人：北京市肿瘤防治研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]