【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种冬瓜蛋白酶的纯化方法，其特征在于按照以下步骤操作：第一步，取冬瓜，去皮、打碎，将匀浆液过滤，滤液离心，取上清液；第二步，向上清液中边搅拌边加入硫酸铵至３０％饱和度，继续搅拌，离心，沉淀溶解在ＴＳ缓冲溶液中，上清液继续加入硫酸铵至５０％饱和度，离心，沉淀溶解在ＴＥ缓冲溶液中，上清液继续加入硫酸铵至８０％饱和度，沉淀溶解在ＴＥ缓冲溶液中，将不同饱和度的硫酸铵沉淀出的蛋白质用ＴＳ缓冲溶液溶解后，装入透析袋中，４℃下，对ＴＳ缓冲溶液透析１２小时；第三步，将透析脱盐的提取液上ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ阴离子交换柱，分别用含０．１，０．１５，０．２，０．２５，０．３，０．３５，０．４ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的ＴＳ缓冲液进行不连续梯度洗脱，收集０．２ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的洗脱液；第四步，将收集到的洗脱液浓缩后上Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５凝胶过滤层析柱，上样量与柱床体积比为１∶１５０～１∶２００；洗脱液为ＴＳ缓冲液，流速０．５－１ｍＬ／ｍｉｎ，分步收集洗脱液，合并具有酪蛋白水解活性的洗脱液；将洗脱液冷冻干燥即得到分子量在６５～６７ｋＤ的纯化冬瓜蛋白酶。
【技术特征摘要】
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