兰花组织培养快速繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种兰花组织培养快速繁殖方法，其包括诱导培养、增殖及继代培养，诱导培养所用诱导培养基是以改良ＭＳ为基本培养基并附加其他成分的半固体培养基；而增殖及继代培养所用培养基则为以改良ＭＳ为基本培养基并附加其他成分的液固二相培养基，并结合了控温摇床温和摇动培养，从而实现了高效诱导和增殖、减轻褐化和有效继代的目的，特别适合于兰花的组织培养。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组织培养
，具体是，主要是通 过兰花幼芽或种子在诱导培养基上诱导出初始(类)原球茎，然后通过液固二相增殖培 养基在温控摇床内控温、控速摇动培养达到高效增殖目的。
技术介绍
原球茎或类原球茎，是兰科植物特有的一种再生方式，诱导和增殖培养原球茎或类 原球茎，是兰科植物获得快速繁殖的有效途径。兰科植物，其种子、幼芽一般通过组织 培养大都能诱导出原球茎或类原球茎，统称为(类)原球茎，再通过分化和生根培养就 能形成大量微型植株，因此，(类)原球茎的诱导和快速繁殖是兰科植物工厂化生产小 苗的关键技术。兰科植物是繁殖最困难的一类单子叶植物，尤其是中国兰花， 一般繁殖系数很低， 最多一年2 3倍，而那些名贵品种繁殖系数更低些， 一般在0.5 1之间，如莳养不当， 可能越养越少。随着甜几年掏兰热毁灭性破坏，国兰种质资源已濒临灭绝的边缘。因此， 加快兰花、特别是中国兰花繁殖速度，更好地保护中国兰花品种资源，使颇具天姿国香 的中国兰花能走进千家万户，已成为当前我国兰花科学研究的重点和热点。传统的兰花繁殖方法多采用分株繁殖法，繁殖系数小，产业化程度低，远远不能满 足市场消费需求。虽有一些中国兰花组织培养研究报导，但组织培养成功的限于个别种， 且原球茎生长易于褐化，研究进展缓慢。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种兰花组织培养快 速繁殖方法，以达到高效诱导和增殖、减轻褐化和有效继代的目的。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为该，其 特征在于包括以下步骤a、诱导培养；将兰科植物的种子或幼芽接种在诱导培养基上，诱导出芝麻粒大小 的初始(类)原球茎；所述诱导培养基是以改良MS为基本培养基并附加其他成分的半 固体培养基，具体成分和含量为KN03 1200~1500mg/L、 NH4N03 1000~1350mg/L、KH2P04 110~140 mg/L、 MgS04 '71120 230 300 mg/L、 CaCl2 200-280 mg/L、 KI 0.83 mg/L、 H3B03 6.2mg/L、 MnS04 '4H20 22.3 mg/L、 ZnS04 '71120 8.6 mg/L、 Na2Mo04 '2H20 0.25 mg/L、 CuS04 5H20 0.025 mg/L、 CoCl2 6H20 0.025 mg/L、 Na2 . EDTA 37.3 mg/L、 FeS04 7H20 27.8 mg/L、 C6H1206 2H20 100mg/L、 NH2 CH2 COOH 2 mg/L、 C12H17C1N40S HCl 0.1 mg/L、 CgHuC^N HCl 0.5 mg/L、 NC5H4COOH 0.5 mg/L、蔗糖 20~30mg/L、 6-BA0.01~0.5mg/L、活性炭0.01 0.1%、琼脂糖4~5g/L， pH值5.0 5.4;b、增殖及继代培养；将初始(类)原球茎转接到增殖培养基上进行增殖培养，每 隔四周，将增值后的初始(类)原球茎切割后进行继代培养，使(类)原球茎快速增殖， 继代培养所用培养基与所述增值培养基相同；所述增殖培养基是以改良MS为基本培养 基并附加其他成分的液固二相培养基，其中上层为液相培养基，下层为固相培养基；所述液相培养基的具体成分和含量为KN03 600~1200mg/L、 NH4N03 500-1100mg/L、 KH2PO450~120 mg/L、 MgS04 '7H20 120~250 mg/L、 CaCl2 100 250 mg/L、 KI 0.83 mg/L、 H3B03 6.2mg/L、 MnS04 '4H20 22.3 mg/L、 ZnS04 '71120 8.6 mg/L、 Na2Mo04 '2H20 0.25 mg/L、 CuS04 5H20 0.025 mg/L、 CoCl2 . 6H20 0.025 mg/L、 Na2 EDTA 37.3 mg/L、 FeS04 7H20 27.8 mg/L、 C6H1206 2H20 100mg/L、 NH2 CH2 COOH 2 mg/L、 Ci2H17ClN4OS HCl 0.1 mg/L、 QHuCbN HCl 0.5 mg/L、 NC5H4COOH 0.5 mg/L、蔗糖 30mg/L、 6-BA0.1 lmg/L、 NAA0.01 0,5 mg/L、活性炭0.1~0.5%、香蕉泥0 100g/L， pH值5.2~5.4;所述固相培养基与所述液相培养基相比，仅在于其还添加有琼脂糖 6~7g/L。所述诱导培养所采用的培养条件为先于2(TC 25'C条件下暗培15 20天，然后在 20°C~25°C、 1000 1500Lux条件下诱导培养2~3个月。所述增殖及继代培养所采用的培养条件相同，培养条件为在温控摇床内摇动培养，摇床温度23。C 25。C，摇床转速10~150rpm。本专利技术的优点通过选择合适的诱导培养基、增殖培养基及继代培养基并结合控温 摇床温和摇动培养实现高效增殖，兼备了液体培养基和固体培养基的长处， 一方面保持 了原球茎或类原球茎固体培养基生长健壮的优势，另一方面发挥了液体培养基快速增殖 的长处；而且由于原球茎或类原球茎根植于固体培养基，避免了液体培养摇动乃至滚动 摩擦所带来的组织褐化现象，使组织生长条件更加优越。再者，诱导培养基其无机盐含 量较传统MS培养基相比约减少了 20%~35%;增殖培养基其无机盐含量较传统MS培 养基相比约减少了 30% 50%。具体实施例方式下面结合兰科兰属植物代表种春兰的初始原球茎(或类原球茎)高效诱导和增殖培养来说明具体实施例方式实施例l、春兰幼芽初始原球茎诱导和增殖培养-原球茎诱导阶段选择具有健壮、无病幼芽的春兰植株预先防菌或杀菌处理1 2周，用自来水冲洗干 净，用无菌手术刀切下幼芽，用75%的酒精擦净或置于75%酒精里浸泡lmin左右，取 出用无菌水冲洗1次，再在0.1%HgCl2中浸泡15min，取出用无菌水冲洗2~3次，用无 菌滤纸吸干水分，剥离幼芽外叶，取茎尖置于半固体状的以改良MS基本培养基和附加 成分混配的原球茎诱导培养基，诱导培养基成分及含量为KN03 1200-1500mg/L、 NH4NO3 1000~1350mg/L、 KH2P04 110~140 mg/L、 MgS04 . 7H20 230~300 mg/L、 CaCl2 200~280 mg/L、 KI 0.83 mg/L、 H3B03 6.2mg/L、 MnS04 4H20 22.3 mg/L、 ZnS04 7H20 8.6 mg/L、 Na2Mo04 2H20 0.25 mg/L、 CuS04 5H20 0.025 mg/L、 CoCl2 6H20 0.025 mg/L、 Na2 EDTA 37.3 mg/L、 FeS04 7H20 27.8 mg/L、 C6H1206 2H20 100 mg/L、 NH2 CH2 COOH 2 mg/L、 C12H17C1N40S HCl 0.1 mg/L、 C8Hu03本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种兰花组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：ａ、诱导培养；将兰科植物的种子或幼芽接种在诱导培养基上，诱导出芝麻粒大小的初始（类）原球茎；所述诱导培养基是以改良ＭＳ为基本培养基并附加其他成分的半固体培养基，具体成分和含量为：ＫＮＯ↓［３］１２００～１５００ｍｇ／Ｌ、ＮＨ↓［４］ＮＯ↓［３］１０００～１３５０ｍｇ／Ｌ、ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］１１０～１４０ｍｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ２３０～３００ｍｇ／Ｌ、ＣａＣｌ↓［２］２００～２８０ｍｇ／Ｌ、ＫＩ０．８３ｍｇ／Ｌ、Ｈ↓［３］ＢＯ↓［３］６．２ｍｇ／Ｌ、ＭｎＳＯ↓［４］.４Ｈ↓［２］Ｏ２２．３ｍｇ／Ｌ、ＺｎＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ８．６ｍｇ／Ｌ、Ｎａ↓［２］ＭｏＯ↓［４］.２Ｈ↓［２］Ｏ０．２５ｍｇ／Ｌ、ＣｕＳＯ↓［４］.５Ｈ↓［２］Ｏ０．０２５ｍｇ／Ｌ、ＣｏＣｌ↓［２］.６Ｈ↓［２］Ｏ０．０２５ｍｇ／Ｌ、Ｎａ↓［２］.ＥＤＴＡ３７．３ｍｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ２７．８ｍｇ／Ｌ、Ｃ↓［６］Ｈ↓［１２］Ｏ↓［６］.２Ｈ↓［２］Ｏ１００ｍｇ／Ｌ、ＮＨ↓［２］.ＣＨ↓［２］.ＣＯＯＨ２ｍｇ／Ｌ、Ｃ↓［１２］Ｈ↓［１７］ＣｌＮ↓［４］ＯＳ.ＨＣｌ０．１ｍｇ／Ｌ、Ｃ↓［８］Ｈ↓［１１］Ｏ↓［３］Ｎ.ＨＣｌ０．５ｍｇ／Ｌ、ＮＣ↓［５］Ｈ↓［４］ＣＯＯＨ０．５ｍｇ／Ｌ、蔗糖２０～３０ｍｇ／Ｌ、６－ＢＡ０．０１～０．５ｍｇ／Ｌ、活性炭０．０１～０．１％、琼脂糖４～５ｇ／Ｌ，ｐＨ值５．０～５．４；ｂ、增殖及继代培养；将初始（类）原球茎转接到增殖培养基上进行增殖培养，每隔四周，将增值后的初始（类）原球茎切割后进行继代培养，使（类）原球茎快速增殖，继代培养所用培养基与所述增值培养基相同；所述增殖培养基是以改良ＭＳ为基本培养基并附加其他成分的液固二相培养基，其中上层为液相培养基，下层为固相培养基；所述液相培养基的具体成分和含量为：ＫＮＯ↓［３］６００～１２００ｍｇ／Ｌ、ＮＨ↓［４］ＮＯ↓［３］５００～１１００ｍｇ／Ｌ、ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］５０～１２０ｍｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ１２０～２５０ｍｇ／Ｌ、ＣａＣｌ↓［２］１００～２５０ｍｇ／Ｌ、ＫＩ０．８３ｍｇ／Ｌ、Ｈ↓［３］ＢＯ↓［３］６．２ｍｇ／Ｌ、ＭｎＳＯ↓［４］.４Ｈ↓［２］Ｏ２２．３ｍｇ／Ｌ、ＺｎＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ８．６ｍｇ／Ｌ、Ｎａ↓［２］ＭｏＯ↓［４］.２Ｈ↓［２］Ｏ０．２５...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙志栋，陈惠云，
申请(专利权)人：宁波市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：97[中国|宁波]